HLA-G慢病毒转染诱导肾移植免疫耐受的大鼠和细胞实验研究

【摘要】背景：人类白细胞抗原I类分子HLA-G在体外实验中证实具有通过多种机制联合作用致免疫耐受的特性,临床上在器官移植术后患者病理标本或者血清中HLA-G水平的升高与急性和慢性排斥的发生率的降低程度相关。国内学者杨宁的研究表明,腺病毒HLA-G1转染SD至Wistar大鼠受体存活时间明显延长。我们拟用慢病毒HLA-G转染SD至Wistar大鼠保证持久而稳定的表达HLA-G,测试作为干预因素对抗急性排斥的效果。既往的研究表明,靶细胞表达HLA-G能够通过与NK细胞上的抑制性受体的结合,抑制细胞毒性颗粒的靶向释放,也能够通过含HLA-G的细胞膜片转移到NK细胞,使得暂时获得HLA-G的NK细胞转变为抑制性细胞抑制其他NK细胞对靶细胞的杀伤。方法：我们首先建立HLA-G慢病毒体系和SD至Wistar大鼠肾移植排斥反应模型。肾移植模型的建立方法是肾动静脉原位吻合,输尿管膀胱吻合,另外一侧肾脏切除。在肾动脉恢复血供前30分给予0.5ml含有107pfu的HLA-G慢病毒。我们设计的阳性对照组术后常规使用FK506抗排斥,阴性对照组以空白病毒转染。术后第7天检测受体大鼠的血清BUN和Cr值,取各组移植肾做病理组织学检查,并测定HLA-G的表达水平。为了弄清HLA-G抑制NK细胞的杀伤作用在大鼠和人类间的作用方式和效应水平的差异,我们采用大鼠内皮细胞和人类血管内皮细胞为靶细胞,在未转染HLA-G慢病毒和转染HLA-G慢病毒后,以大鼠NK细胞和人类的NK细胞作为攻击细胞,测定四种组合情况下,其杀伤率的差异。结果：输注HLA-G慢病毒对于术后受体大鼠的生存期和改善肾功能的BUN与Cr指标相对于空白病毒转染的对照组没有任何差别,但是明显短于使用FK506的抗排斥的对照组。基于Banff标准的病理组织学检查显示,术后7天在实验组和阴性对照组存在严重的排斥反应,而使用FK506抗排斥的阳性对照组只有轻度排斥反应。人NK细胞攻击靶细胞人内皮细胞经转染HLA-G慢病毒,杀伤率从74.8±14.1%显著降低至21.2±4.7%(p<0.05),而鼠NK细胞攻击人内皮细胞经转染HLA-G’漫病毒,杀伤率无明显差别,从67.7±11.6%到65.8±10.9%(p>0.05)。人NK细胞攻击靶细胞大鼠内皮细胞经转染HLA-G慢病毒,杀伤率从85.3±16.3%降低至31.7±7.8%,而鼠NK细胞攻击鼠内皮细胞经转染]HLA-G慢病毒,杀伤率无明显差别,从25.8±6.5%到26.0±5.9%。结论：我们的实验研究表明在SD至Wistar大鼠肾移植模型中表达HLA-G不能延长受体大鼠的生存期或者改善移植肾的功能。HLA-G的有效发挥功能以攻击细胞上有相应的特异性受体为前提,人的免疫细胞上表达有相应受体,而大鼠的免疫细胞上无相应特异性受体或者这种对应的受体有决定性的种属差别。图片19幅,表格10个,参考文献73篇。
【作者】叶少军；
【导师】叶啟发；
【作者基本信息】中南大学，临床医学，2014，博士
【关键词】大鼠肾移植；HLA-G；基因转染；免疫耐受；

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