miR-29b在前列腺癌中的表达及其作用和机制的初步探讨

【摘要】第一部分miR-29b在前列腺癌组织中的表达及临床意义目的：探讨miR-29b在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法：用实时定量PCR技术检测10例前列腺癌(PCa)及癌旁非肿瘤组织中miR-29b的表达情况,研究其与PCa病理分期、分级之间的关系。结果：10例前列腺癌组织(prostatecancer,PCa)与配对的癌旁非肿瘤组织相比,miR-29b在PCa中的表达明显下调,有统计学差异(p<0.05)。根据TNM病理分期,其中Tl-T2患者7例和T3b患者3例,两组的miR-29b无统计学差异(p>0.05)；根据Gleason评分进行病理分级,其中G1-G2患者4例,G3-G4患者6例,两组miR-29b表达相比无统计学差异(p>0.05)。结论：(1)miR-29b在前列腺癌组织中的表达明显低于癌旁组织。(2)miR-29b的表达与PCa病理分期及病理分级没有明显相关性。第二部分miR-29b在不同前列腺癌细胞株中的表达目的：探讨miR-29b在不同前列腺癌细胞株中的表达及其与细胞恶性程度和雄激素依赖性的相关性,选择miR-29b表达相对较低的细胞株进行下一步实验。方法：选取PC3、DU145、LNCap、LNCap-AI四种细胞系,其中PC3、DU145、LNCap为来源不同的细胞系。PC3和DU145具有恶性程度高且雄激素非依赖生长的特点,LNCap恶性程度低且雄激素依赖生长,而LNCap和LNCap-AI来源相同,LNCap-AI为LNCap在逐步去雄激素环境下培养出的雄激素非依赖细胞。用实时定量PCR技术检测这四种前列腺癌细胞株中miR-29b的表达情况。结果：四种前列腺癌细胞系中表达水平由高到低分别为DU-145、PC-3、LNCap、LNCap-AI,四组间具有统计学差异(P<0.05)。其中DU-145、PC-3中的rniR-29b表达水平明显高于LNCap,而LNCap细胞中rniR-29b表达水平高于LNCap-AI细胞。结论：(1)miR-29b在不同的前列腺癌细胞系中有不同的表达水平,且与雄激素非依赖性转化过程有相关性。(2)LNCap细胞株中miR-29b表达相对较低,选择LNCap细胞株进行下一步实验。第三部分miR-29b对前列腺癌细胞生物学行为的影响目的：探讨]miR-29b对前列腺癌细胞化疗药物敏感性、细胞周期、增殖、凋亡及侵袭能力等细胞生物学行为的影响。方法：构建miR-29b模拟物片段及干预序列,并转染到LNCap细胞中。在荧光镜下计算细胞转染效率并用实时定量PCR检测LNCap转染细胞株中1miR-29b的表达水平。分别用MTT法检测上调miR-29b对顺铂化疗作用的影响,观察细胞的存活率的变化,用流式细胞术检测细胞周期变化,AV/PI双标法FCM检测细胞的凋亡情况,Transwell细胞侵袭实验观察细胞浸袭能力。结果：成功构建miR-29b模拟物片段及干预序列,并转染到LNCap细胞中,细胞的转染效率达到80%以上。与阴性对照组相比：miR-29b模拟物转染组癌细胞细胞存活率明显下降,而1niR-29b模拟物加顺铂组细胞存活率进一步下降,rniR-29b可以增加癌细胞对顺铂的化疗敏感性；1miR-29b模拟物转染组亚G0/G1期明显增加,G0/G1期、S期、G2/M期比例均减少,癌细胞增殖能力下降；AV/PI双标法FCM试验显示1miR-29b模拟物转染组细胞总凋亡率明显下降；Transwell细胞侵袭实验显示miR-29b模拟物转染组细胞侵袭数量明显减少。结论：miR-29b高表达可以抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭能力,促进癌细胞凋亡并且增加癌细胞对化疗药物敏感性。第四部分前列腺癌中miR-29b作用靶基因的初步筛查目的：初步探讨前列腺癌中miR-29b可能的作用靶基因。方法：生物信息学技术及查阅文献的方法预测miR-29b可能的靶基因,Western-blot检测LNCap细胞株中各预测靶基因蛋白的表达情况。结果：用生物信息学技术预测出8个miR-29b可能作用的靶基因：SOCS-1、Mcl-1、DNMT3b、MMP2、IFN-γ、SMAD3、SOCS5、AKT3、WB检测rniR-29b表达变化后8种可能靶基因的蛋白变化,其中AKT3、Mcl-1和DNMT3b的蛋白表达在miR-29b模拟物转染组有明显下降,在miR-29b抑制物转染组有明显上升(P>0.05)结论：AKT3、Mcl-1和DNMT3b是miR-29b在前列腺癌中三种可能作用的靶基因,miR-29b可能通过靶向作用于此三种基因而发挥抑癌功能。
【作者】严彬；
【导师】杨金瑞；
【作者基本信息】中南大学，临床医学，2014，博士
【关键词】前列腺癌；miR-29b；TNM病理分期；Gleason病理分级；前列腺癌细胞系；PC3；DU145；LNCap；LNCap-AI；顺铂；增殖；凋亡；侵袭能力；化疗敏感性；靶基因；

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