脂多糖对小鼠心肌TMEM16A表达的影响

【摘要】目的：全身炎症反应综合征（SystemicInflammatoryResponseSyn-drome,SIRS）是指感染或非感染因素作用于机体而引起的一种难以控制的全身性瀑布式炎症反应综合征。SIRS发生时，循环系统是较易受影响及损害的系统之一，患者可以表现出不同程度的心功能障碍及心脏相关生化指标升高。而肺是炎症损伤的最先靶器官，已有研究证明SIRS是急性肺损伤（AcuteLungInjury,ALI）发生的基础。病理证实ALI的存在可以作为SIRS模型建立成功的标志。氯离子通道是广泛分布的一种阴离子通道，其中钙激活氯通道（Calcium-activatedChlorideChannels,CaCCs）是心肌主要的氯离子通道之一，在正常心肌细胞的生理功能中有重要作用，与心肌细胞的电活动有密切关系，病理情况下可导致心律失常的发生。而跨膜蛋白16A（TMEM16A）作为构成CaCCs的分子基础，其在小鼠心肌组织的表达已被证实。本研究旨在应用脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）建立小鼠全身炎症反应综合征的模型，观察TMEM16A在心肌组织表达的变化。方法：1全身炎症反应动物模型的建立：健康雄性C57BL/6小鼠24只，年龄8-12周，体重20-25g。随机分为对照组、轻度炎症组及SIRS组，每组8只小鼠，通过腹腔注射LPS（500ug/kg）建立轻度炎症模型，腹腔注射LPS（10mg/kg）建立SIRS模型，对照组腹腔注射等体积生理盐水。224小时后，观察各组小鼠一般状态。眼球取血，分离血清，应用ELISA试剂盒检测cTnI、CK-MB、和BNP的浓度。步骤严格按说明书进行，分别计算出标准曲线和回归方程，将样品光密度代入标准曲线乘以相应稀释倍数，计算样品中cTnI、CK-MB和BNP浓度。3麻醉并处死小鼠，分别取肺组织及心肌组织，肺组织及部分心肌组织用10%中性福尔马林固定，余心肌组织液氮罐保存。肺组织经HE染色及光镜检查，观察有无ALI病理特点，确定SIRS模型是否建立成功。福尔马林固定的心肌组织通过HE染色观察各组心肌组织的病理特点，另通过免疫组织化学染色观察其TMEM16A表达情况。液氮保存的心肌组织经蛋白提取，行BCA蛋白浓度测定及蛋白质印迹（WesternBlot），观察组间TMEM16A表达差异及有无统计学意义。结果：1对照组小鼠活动、进食等无异常，暴露肺脏后未见肿大、出血等。轻度炎症组小鼠活动及进食较对照组减少，肉眼观察肺脏无明显异常。SIRS组小鼠活动明显减少，出现嗜睡、厌食等，肉眼观察肺脏可见体积增大，表面可见点灶状出血。2轻度炎症组肺组织HE染色在光镜下示：部分肺泡腔狭窄，肺泡壁增厚，肺间质可见红细胞及粒细胞浸润。SIRS组肺组织HE染色示：肺泡壁结构破坏，肺间质大量红细胞及粒细胞浸润，肺泡内可见较多渗出。上述改变符合急性肺损伤病理特点，SIRS模型建立成功。3心肌组织免疫组织化学染色可见TMEM16A表达，且轻度炎症组及SIRS组较对照组表达量多，而SIRS组表达高于轻度炎症组。4与对照组小鼠相比，轻度炎症组及SIRS组血清cTnI及CK-MB浓度明显增高（P<0.05），其中SIRS组又明显高于轻度炎症组（P<0.05）。血清BNP浓度轻度炎症组与对照组小鼠相比无统计学意义（P>0.05），但SIRS组BNP浓度明显高于对照及轻度炎症组（P<0.05）。5WesternBlot观察TMEM16A在各组心肌均有表达（,n=3)。与对照组小鼠相比，轻度炎症组心肌TMEM16A表达升高，但无统计学意义（P>0.05）；SIRS组TMEM16A的表达明显升高，有统计学意义（P<0.05）结论：1小鼠腹腔注射脂多糖（10mg/kg）可成功建立SIRS模型。2全身炎症反应时，血清cTnI、CK-MB及BNP浓度升高，表明存在心肌细胞损伤。轻度炎症时血清cTnI及CK-MB浓度升高，但血清BNP浓度变化无统计学意义，表明轻度炎症时也可能存在心肌细胞损伤。3TMEM16A在心肌组织有所表达。在全身炎症反应综合征时，心肌组织TMEM16A的表达明显升高。说明钙激活氯离子通道在可能与全身炎症反应时患者心肌损伤有关。全身炎症反应综合征时钙激活氯离子通道表达异常是否与可能出现的心律失常有关有待进一步研究。
【作者】阎婕；
【导师】李拥军；
【作者基本信息】河北医科大学，内科学（专业学位），2014，硕士
【关键词】全身炎症反应综合征；心功能不全；钙激活氯离子通道；TMEM16A；脂多糖；cTnI；BNP；CK-MB；

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