上皮性卵巢癌组织与化疗耐药相关的基因谱筛查

【摘要】目的：上皮性卵巢癌的发病率约占卵巢恶性肿瘤85%-90%[1]，规范化手术加以铂类为基础的化疗是其目前的主要治疗方法。虽然卵巢癌的5年生存率较化疗药物出现前有所提升，但由于化疗耐药的发生，至今仍徘徊在20%~30%之间。研究化疗耐药发生机制、预测患者的耐药谱进而指导临床化疗用药是当前医学界亟需解决的难题。随着科学研究的进展，发现化疗耐药与多种基因表达异常相关，这些基因通过调节细胞内药物浓度、细胞的凋亡、DNA的修复等途径参与卵巢癌化疗耐药。国内外学者多对耐药基因在细胞系中的表达研究较多，无明显临床作用。本实验通过real-timePCR技术检测上皮性卵巢癌组织中与化疗耐药相关的基因表达进行筛查统计，整体上了解卵巢癌患者化疗耐药基因的表达差异，后续与患者临床资料相结合，筛选出具有临床意义且存在表达差异的基因，有望通过对上皮性卵巢癌患者进行化疗前耐药基因谱的检测以指导临床用药。方法：组织标本取自河北医科大学第四医院妇科2013年1月至2014年2月手术切除标本50例，其标本均经病理检查证实。应用real-timePCR技术检测20例上皮性卵巢癌组织（根据FIGO分期为高、中分化10例，低分化10例；早期7例，晚期13例。其中卵巢浆液性癌4例，卵巢粘液性癌2例，卵巢透明细胞癌2例，卵巢子宫内膜样癌12例），10例上皮性良性卵巢肿瘤组织标本（卵巢粘液性囊腺瘤5例，卵巢浆液性囊腺瘤2例，卵巢囊肿3例）和20例正常卵巢组织标本中化疗耐药相关基因（MDR1、MRP1、BCRP、LRP、GSTP1、BRCA1、ERCC1、hMLH1、hMSH2、bcl-2、caspase3、survivin、P53、Topo-Ⅱα、FZD-1、Smac、EZH2、XRCC1、Wnt-1、EGFR、PTEN、TUBB3、TRAG3、CRR9、XIAP和NF-κB）mRNA的表达情况。上皮性卵巢癌组为实验组，上皮性良性卵巢肿瘤组和正常卵巢组为对照组。结果：1MRP1mRNA表达MRP1mRNA在上皮性卵巢癌组、上皮性良性卵巢肿瘤组、正常卵巢组中的相对表达量分别为（101.92±106.60）、（16.66±9.46）、（81.31±86.31）。上皮性卵巢癌组MRP1mRNA相对表达量显著高于上皮性良性卵巢肿瘤组MRP1mRNA的相对表达量（P=0.03），与正常卵巢组相比未见明显差异（P=0.56）。2BCRPmRNA的表达BCRPmRNA在上皮性卵巢癌组、上皮性良性卵巢肿瘤组、正常卵巢组的相对表达量分别为（15.39±30.86）、（21.14±12.22）、（83.08±67.10）。上皮性卵巢癌组BCRPmRNA相对表达量显著低于正常卵巢组BCRPmRNA的相对表达量（P=0.00），与上皮性良性肿瘤组相比未见明显差异（P=0.58）。3BRCA1mRNA的表达BRCA1mRNA在上皮性卵巢癌组、上皮性良性卵巢肿瘤组、正常卵巢组的相对表达量分别为（9.44±13.08）、（1.40±1.29）、（1.99±3.07）。上皮性卵巢癌组BRCA1mRNA相对表达量显著高于正常卵巢组BRCA1mRNA的相对表达量（P=0.02），与上皮性良性肿瘤组相比未见明显差异（P=0.24）。4Topo-ⅡαmRNA的表达Topo-ⅡαmRNA在上皮性卵巢癌组、上皮性良性卵巢肿瘤组、正常卵巢组的相对表达量分别为（89.51±117.22）、（3.88±4.93）、（3.87±7.99）。上皮性卵巢癌组Topo-ⅡαmRNA相对表达量显著高于上皮性良性卵巢肿瘤组及正常卵巢组Topo-ⅡαmRNA的相对表达量（P=0.01，P=0.01）。5bcl-2mRNA的表达bcl-2mRNA在上皮性卵巢癌组、上皮性良性卵巢肿瘤组、正常卵巢组的相对表达量分别为（34.19±44.20）、（12.45±6.72）、（93.38±94.57）。上皮性卵巢癌组bcl-2mRNA相对表达量显著低于正常卵巢组bcl-2mRNA的相对表达量（P=0.02），与上皮性良性肿瘤组相比未见明显差异（P=0.38）。6caspase3mRNA的表达caspase3mRNA在上皮性卵巢癌组、上皮性良性卵巢肿瘤组、正常卵巢组的相对表达量分别为（26.08±18.10）、（3.91±2.91）、（13.33±9.38）。上皮性卵巢癌组caspase3mRNA相对表达量与上皮性良性卵巢肿瘤组及正常卵巢组caspase3mRNA的相对表达量相比均有显著差异（P=0.03，P=0.02）。7survivinmRNA的表达survivinmRNA在上皮性卵巢癌组、上皮性良性卵巢肿瘤组、正常卵巢组的相对表达量分别为（183.47±143.71）、（107.81±131.24）、（63.04±94.66）。上皮性卵巢癌组survivinmRNA相对表达量显著高于正常卵巢组survivinmRNA的相对表达量（P=0.01），与上皮性良性肿瘤组相比未见明显差异（P=0.36）。8P53mRNA的表达P53mRNA在上皮性卵巢癌组、上皮性良性卵巢肿瘤组、正常卵巢组的相对表达量分别为（135.25±142.04）、（16.10±7.68）、（107.90±106.83）。上皮性卵巢癌组P53mRNA相对表达量显著高于上皮性良性卵巢肿瘤组P53mRNA的相对表达量（P=0.01），与正常卵巢组相比未见明显差异（P=0.55）。9XIAPmRNA的表达XIAPmRNA在上皮性卵巢癌组、上皮性良性卵巢肿瘤组、正常卵巢组的相对表达量分别为（21.84±14.79）、（23.32±23.47）、（62.10±48.60）。上皮性卵巢癌组XIAPmRNA相对表达量显著低于正常卵巢组XIAPmRNA的相对表达量（P=0.03），与上皮性良性肿瘤组相比未见明显差异（P=0.34）。10EGFRmRNA的表达EGFRmRNA在上皮性卵巢癌组、上皮性良性卵巢肿瘤组、正常卵巢组的相对表达量分别为（3663.26±3069.61）、（3872.03±6031.59）、（13724.40±14556.37）。上皮性卵巢癌组EGFRmRNA相对表达量显著低于正常卵巢组EGFRmRNA的相对表达量（P=0.01），与上皮性良性肿瘤组相比未见明显差异（P=0.95）。11EZH2mRNA的表达EZH2mRNA在上皮性卵巢癌组、上皮性良性卵巢肿瘤组、正常卵巢组的相对表达量分别为（146.91±120.40）、（8.34±8.33）、（60.08±32.35）。上皮性卵巢癌组EZH2mRNA相对表达量显著高于上皮性良性卵巢肿瘤组及正常卵巢组EZH2mRNA的相对表达量（P=0.03，P=0.01）。12上皮性卵巢癌组MDR1、LRP、GSTP1、ERCC1、hMLH1、hMSH2、FZD-1、Smac、XRCC1、Wnt-1、PTEN、TUBB3、TRAG3、CRR9和NF-κB的mRNA相对表达量与上皮性良性卵巢肿瘤组及正常卵巢组相比均无明显差异（P>0.05）。13对MRP1、BCRP、BRCA1、bcl-2、caspase3、survivin、P53、Topo-Ⅱα、EZH2、EGFR和XIAPmRNA在上皮性卵巢癌不同病理分级及分期之间进行比较均未见明显差异（P>0.05）。结论：MRP1、BCRP、BRCA1、Topo-Ⅱα、bcl-2、caspase3、survivin、P53、XIAP、EGFR、EZH2mRNA在上皮性卵巢癌中的表达与良性卵巢组织或正常卵巢组织相比存在显著性差异。其有可能成为预测卵巢癌患者化疗耐药的目的基因。
【作者】刘洋；
【导师】张正茂；单保恩；
【作者基本信息】河北医科大学，妇产科学（专业学位），2014，硕士
【关键词】上皮性卵巢癌；化疗耐药基因；real-timePCR；组织RNA提取；基因芯片；

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