PPARγ新型配体对巨噬细胞脂质代谢的影响

【摘要】在抗动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的研究中，维持细胞内胆固醇的平衡具有重要意义。胆固醇的逆向转运是肝脏外的胆固醇回归至肝脏，并最终以胆汁或排泄物的方式排出体外的过程，其中胆固醇的流出是一个重要部分，三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的过表达可以促进胆固醇的流出，因此上调ABCA1的表达是抗动脉粥样硬化的关键因素之一。据报道，过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（peroxisomeproliferator-activatedreceptor-γ，PPAR-γ）的激活调控可导致ABCA1的反式激活：当巨噬细胞吞噬氧化低密度脂蛋白（oxidizedlowdensitylipoprotein，ox-LDL）后，oxLDL的脂质成分释放出来，激活PPARγ的转录，一方面可促进ABCA1表达，促进胆固醇的流出，另一方面也刺激了清道夫受体CD36（scavengerreceptor，CD36）的表达，导致细胞吞噬更多的oxLDL，从而维持机体内胆固醇的平衡。本实验室前期发现了oxLDL的脂质成分7-酮基胆甾醇-9-羧基壬烷（7-ketocholesteryl-9-carbo-xynonanoate，oxLig-1）与PPARγ的配体具有相似结构，那么oxLig-1是否参与调控PPARγ信号通路值得进一步研究。本实验将证实，在THP-1巨噬细胞中，oxLig-1经由PPARγ途径上调ABCA1的表达，促进胆固醇外流，同时也参与调控了PPARγ-CD36信号通路。为进一步研究oxLig-1对PPARγ介导的脂质代谢的提供依据和帮助。实验方法：应用ELISA方法检测oxLig-1与PPARγ配体结合区（ligandbindingdomain，LBD）的结合，双荧光素酶报告基因检测oxLig-1对PPARγ转录活性的影响，再用免疫印迹，3-Dodecanoyl-NBD-cholesterol(NBD-胆固醇)，流式细胞术，基因沉默等方法检测oxLig-1对由PPARγ介导的脂质代谢信号通路的影响。实验得出：oxLig-1在分子水平上可以与PPARγ-LBD结合，结合率高于PPARγ的合成配体曲格列酮（troglitazone，TRO），利用双荧光素酶报告基因检测表明oxLig-1提高了PPARγ的转录活性。在15-30μg/mL不同浓度中，oxLig-1均可上调ABCA1的表达，且20μg/mL，2h时ABCA1表达达到峰值，利用荧光标记胆固醇检测表明，在0-12h时oxLig-1可以促进胆固醇的流出，4h时外流率达到最高。在基因沉默实验中，PPARγ的沉默效率可达到90%左右，基因沉默后，ABCA1的表达和胆固醇的流出均受到不同程度的抑制，抑制率分别为62%和25%。而在oxLig-1作用细胞24h时，CD36的表达也有所上调，且受到PPARγ的调控。结论：oxLig-1可能是PPARγ的新型配体，并经由此通路上调ABCA1和CD36的表达，在维持体内胆固醇的平衡中发挥重要作用。
【作者】王乐；
【导师】刘庆平；
【作者基本信息】大连大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】7-酮基胆甾醇-9-羧基壬烷；过氧化物酶体增殖物激活受体-γ；ATP结合盒转运蛋白A1；清道夫受体CD36；

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