波纹唇鱼性别发育候选基因的克隆与表达研究

【摘要】波纹唇鱼(Cheilinusundulatus)是一种重要的大型热带珊瑚礁鱼类,属于雌雄同体雌性先熟的鱼类之一,又因为波纹唇鱼的肉质鲜美,但目前没有人工繁育成功,因此研究其性别决定机制无论是对波纹唇鱼以后的人工繁育还是对雌雄同体鱼类的性别决定机制的研究都具有非常重要的意义。因此目前研究比较热门的雄性性别发育相关基因sox9、dmrtl、wtl和雌性性别发育相关的基因foxl2、daxl、wnt4在波纹唇鱼中的克隆表达研究势在必行。本文克隆了波纹唇鱼的foxl2基因的全长cDNA和sox9、dmrt1、dmrtl、wt1、dax1、wnt4五个基因的中间片段,并且分析了这六个基因在波纹唇鱼雌雄鱼中各组织的表达模式。主要结果如下：1.本文利用同源比对克隆了foxl2的中间片段,通过已知中间片段利用RACE技术获得了全长。波纹唇鱼foxl2cDNA全长为1989bp,开放阅读框(ORF)为921bp,3’非翻译区为802bp,5’非翻译区为218bp,开放阅读框编码的氨基酸残基为306个,具有保守的叉头框DNA结合区。生物信息学分析显示,波纹唇鱼foxl2的非成熟肽分子量为34646.18Da,具有典型的叉头框结构,三个α螺旋、两条β链以及两个翼状结构。2.采用同源比对克隆了sox9、dmrtl、wtl、daxl、wnt4五个基因的中间片段,得到的sox9基因片段长为389bp,dmrtl为511bp,wtl为875bp,daxl为398bp,wnt4为696bp。经进化树分析显示,波纹唇鱼的这五个基因主要与石斑鱼、同科鱼海猪鱼聚类。3.本文采用实时荧光定量(Real-timePCR)PCR的方法,检测了这六个基因在波纹唇鱼雌雄鱼的组织中的分布情况。结果显示,dmrtl在卵巢组织中不见表达,在精巢中高表达,同时在其他组织中也不表达,这和dmrtl是一个极度保守的雄性性别决定基因保持一致；wnt4在雌雄鱼组织中广泛表达于性腺、鳃,垂体,脑,心,肝,肾,其中在鳃和脑中表达量较高,但精巢和卵巢表达量区别并不明显,所以其作用还有待深入研究；wt1在雌雄鱼的肾、心、脾、鳃中有表达,卵巢和精巢也高表达,且精巢表达量稍高于卵巢；Sox9在雌雄鱼鳃、脑、垂体、心、肾、肝、脾中都有不等表达,卵巢中未见表达,精巢中的表达量很高：Daxl也在大部分组织中都有表达,脑、性腺、肾、脾中表达量较高,卵巢表达量明显高于精巢：Foxl2除了在卵巢中高表达外,脑、垂体、鳃中也有表达,而精巢中微弱表达,说明Foxl2可能和性别生殖调控轴上游调控相关。
【作者】黄飞；
【导师】陈国华；
【作者基本信息】海南大学，水产养殖，2014，硕士
【关键词】波纹唇鱼；性别决定；克隆表达Foxl2；

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