橡胶品种热研7-33-97苗木叶片愈伤组织诱导及脱分化生理生化特性鉴定

【摘要】为扩大橡胶树组织培养外植体来源和建立高效稳定的橡胶树叶片离体再生体系,以1年生巴西橡胶树品种热研7-33-97袋装苗叶片为材料,研究叶片的预处理、0.1%升汞不同消毒时间、离体叶片切取部位、3种激素(6-BA、NAA、2,4-D)不同浓度配比、不同基本培养基、培养基不同pH、不同暗培养时间、叶片不同放置方式、不同物候期及不同取材时期对愈伤组织诱导的影响,筛选出愈伤组织诱导最适培养基；对橡胶树叶片(预处理含主脉叶块、预处理不含主脉叶块、未预处理含主脉叶块、未预处理不含主脉叶块)经离体培养后脱分化过程中丙二醛(MDA)含量、可溶性糖含量、过氧化物酶(POD)及过氧化氢酶(CAT)活性进行测定,初步了解橡胶叶片离体培养细胞脱分化机制。实验结果如下：1热研7-33-97苗木叶片愈伤组织诱导橡胶树苗木叶片预处理用液体培养基MS+3mg/L6-BA+0.5mg/L2,4-D+0.2mg/LNAA；最佳消毒方法为0.1%升汞对袋装苗叶片消毒15min,其存活率达2.47%；最佳愈伤组织诱导培养基是MS+3mg/L6-BA+0.5mg/L2,4-D+0.2mg/LNAA+4％蔗糖+3g/L植物凝胶,用此培养基对含主脉叶块和含主脉出愈叶块未出愈伤组织部分进行培养,其出愈率分别达49.07%和42.22%；用含主脉叶块和含主脉出愈叶块未出愈伤组织部分进行培养所诱导的愈伤组织质地较坚实、呈黄绿色,为橡胶袋装苗叶片培养的最适宜外植体。2热研7-33-97苗木叶片愈伤组织诱导影响因素热研7-33-97苗木叶片愈伤组织诱导最适基本培养基为MS基本培养,用此基本培养基对预处理含主脉叶块和不含主脉叶块进行培养,其出愈率达34.26%和12.04%；pH值5.8时叶片出愈率最高,预处理含主脉叶块出愈率达41.67%,预处理不含主脉叶块出愈率为14.8l%,pH为4.6和7.0的培养基的叶片均未诱导出愈伤组织；全暗培养42d对叶片愈伤组织诱导最有利,预处理含主脉叶块出愈率达36.11%,预处理不含主脉叶块出愈率为12.04%；叶片正面朝上放置于培养基为叶片接种时最佳放置方式；叶片物候期处于淡绿期时离体培养,愈伤组织诱导率最高,其中预处理含主脉叶块出愈率达34.26%,不含主脉叶块出愈率为10.19%；萌动期和稳定期叶片较难诱导出愈伤组织；6月份为热研7-33-97叶片离体培养最佳取材时期,出愈率最高,其中预处理含主脉叶块出愈率达40.74%,不含主脉叶块出愈率为12.96%,3月和9月次之,12月份叶片诱导愈伤组织最困难。3热研7-33-97苗木叶片离体培养脱分化生理生化研究丙二醛含量随着培养时间的增加大致呈先降后升再降再升的趋势,拐点分别出现在第14d、21d、42d,预处理含主脉叶块在3个拐点处的丙二醛含量均是最低,分别为8.33μmol/g、11.76μmol/g、5.26μmol/g；可溶性糖含量随着培养时间的增加大致呈先降后升的趋势,最低点出现在第42d,此处预处理含主脉叶块可溶性糖含量最低,为33.57mmol/g；POD酶活性随着培养时间的增加大致呈先升后降再升再降的趋势,两个活性高峰分别出现在第14d和第42d,预处理含主脉叶块在这2点处的POD酶活性最高,分别为63.61u／g(FW).min、87.82u/g(FW)·min；CAT酶活性随着培养时间的增加与POD酶活性变化趋势类似,且两个活性高峰也分别出现在第14d和第42d,预处理含主脉叶块在这2点处的CAT酶活性最高,分别为43.65u/gFW/min、67.38u/gFW/min。
【作者】欧阳超；
【导师】莫廷辉；
【作者基本信息】海南大学，橡胶学，2014，硕士
【关键词】热研7-33-97；袋装苗；叶片；愈伤组织；生理生化；

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