SATB1与相关MicroRNA在乳腺癌中的表达研究

【摘要】第一部分SATB1在乳腺癌患者中的表达及其意义目的：探讨SATB1在乳腺癌患者中的表达及预后意义，并同目前临床上常用4种标记物Ki-67、c-erbB-2、ER及PR的预后意义进行比较。方法：筛选出的93例浸润性导管癌患者标本，用免疫组织化学染色方法评估SATB1的表达。SATB1与4种标记物及临床病理参数之间的关系进行相关性分析。SATB1的预后意义采用Kaplan-Meier生存分析，log-rank检验比较SATB1不同表达水平的组间差异，多因素分析运用COX比例风险回归模型，利用受试者工作特征曲线（ROC）判断SATB1、Ki-67、c-erbB-2、ER及PR作为预后指标的敏感性和特异性。结果：免疫组化结果显示，SATB1的亚细胞定位具有异质性，SATB1阳性染色主要集中在细胞核，但也有细胞浆染色阳性。SATB1胞浆阳性和胞核阴性在各临床病理参数间无显著差异，二者作为预后判断时统计学意义无差别。SATB1的表达与临床分期相关（p=0.002），与Ki-67呈正相关（p<0.001），与ER/PR呈负相关（p分别为0.025和0.045），而SATB1与c-erbB-2表达不相关（p=0.63）。在中位随访72个月时，随着SATB1表达强度的增加，乳腺癌患者的总生存期(OS)及无复发生存期(RFS)均缩短。在单因素和多因素分析中，只有SATB1显著影响OS。将患者按不同的淋巴结状态及诺丁汉预后指数（NottinghamPrognosticIndex，NPI）划分为不同的亚组，无论在淋巴结阴性组和淋巴结阳性组,预后良好组（NPI＜3.4）和预后较差组（NPI≥3.4），均可依据SATB1表达的有无区分出不同的亚组人群。在ROC分析中，SATB1、Ki-67、c-erbB-2、ER及PR的曲线下面积(AreaUnderCurve,AUC)分别为0.859、0.662、0.637、0.586和0.498，提示SATB1作为预后指标的敏感性和特异性最佳。结论：核定位表达的SATB1是乳腺癌患者一个稳健的独立预后指标。第二部分miRNA与SATB1在乳腺癌中表达的相关性研究目的：本研究对可能调控SATB1表达的miRNA进行预测，并在乳腺癌患者标本中验证是否有候选miRNA调控SATB1的表达。方法：选取4种权威的miRNA靶基因预测软件TargetScan、PicTar、miRanda和miRDB，预测与SATB1mRNA3’-UTR有互补结合位点的miRNA，将上述不同软件预测的miRNA结果绘制成维恩图，图中交集部分为调控SATB1的候选miRNA。再用TaqMan实时定量RT-PCR检测乳腺癌患者标本中候选miRNA的表达，并对miRNA和SATB1的表达进行相关性分析。结果：经TargetScan、PicTar、miRanda及miRDB软件的预测，与SATB1的mRNA3’-UTR有互补结合位点的miRNA分别有22种、24种、76种及75种。将上述4种软件预测结果制作维恩图。图中交集为6种miRNA，分别是miR-7、miR-21、miR-23a、miR-23b、miR-34a及miR-155。在乳腺癌患者标本中，只有miR-34a的表达与SATB1的表达呈负相关（p<0.001），并且，随着miR-34a表达的下调，SATB1的蛋白表达水平呈上升趋势。miR-7与SATB1的表达有负相关倾向（p=0.056），而SATB1和其余4种miRNA表达均不相关。结论：SATB1可能是miR-34a一个新的靶基因。miR-34a表达的下调削弱对SATB1的抑制，从而导致乳腺癌患者疾病进展。恢复miR-34a的表达可能是那些SATB1高表达患者的潜在治疗方法。第三部分乳腺癌患者MIR34A启动子区域的甲基化研究目的：研究是否由于MIR34A基因启动子的甲基化而引起成熟miR-34a的表达量下降。方法：利用EpiTectFastFFPEBisulfiteKit试剂盒对石蜡包埋组织乳腺癌患者的基因组DNA进行抽提及亚硫酸盐修饰。通过甲基化特异PCR方法判断MIR34A基因启动子的甲基化状态，TaqMan实时定量RT-PCR检测乳腺癌患者标本中成熟miR-34a的表达。分析MIR34A基因启动子甲基化状态与成熟miR-34a表达量之间的关系。结果：在55例可供分析的乳腺癌患者中，MIR34A基因启动子有16例（29%）为非甲基化，9例（16%）为甲基化，30例（55%）为非甲基化和甲基化同时存在。MIR34A基因启动子甲基化状态与成熟miR-34a表达量呈显著负相关。结论：在部分乳腺癌患者中，由于启动子区域的甲基化，抑癌基因MIR34A失活，导致成熟miR-34a表达量下降。
【作者】段卫明；
【导师】陈子兴；
【作者基本信息】苏州大学，基因组医学，2014，硕士
【关键词】SATB1；核定位；miRNAs；miR-34a；甲基化；预后；

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