大青叶化学成分与抗氧化活性研究

【摘要】大青(ClerodendrumcyrtophyllunTurcz)为马鞭草科(Verbenaceae)大青属(Clerodendrum)植物,是我国传统中药,也是黎族药。根、叶药用,防治齿痛、痢疾、清热解毒,消炎镇痛,凉血利尿和蜈蚣咬伤之效,中医临床上用于流感、腮腺炎、肝炎和肿瘤、扁桃体炎、腮腺炎、急性喉炎、牙周炎、细菌性痢疾、虫、蛇咬伤、肿毒、感冒发热等,具有抗病毒、抗菌、降压等作用。经文献研究发现,大青叶的药理作用与其中已报道黄酮类化合物的药理作用相似,初步预测其药理作用与总黄酮量及其抗氧化活性有关。本研究采用单因素试验法结合响应曲面实验进行设计,通过对提取试剂乙醇浓度、超声时间、提取温度的考察,建立大青中抗氧化活性成分的超声波辅助提取最佳工艺,以总黄酮含量和总酚含量以及清除DPPH·和ABTS·的能力作为考察指标；在最优条件基础上,对大青叶进行了超声提取并使用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取划段,并用分光光度法测定了总浸膏及各萃取段的总黄酮量、总酚含量。采用了DPPH·法、ABTS·法、还原Fe3+、螯合Fe2+离子法、O2·-自由基法和抑制·OH六种抗氧化模型对大青提取物进行抗氧化活性评价；为进一步阐明大青的药效物质基础,我们对大青叶提取物进行单体化学成分的分离。研究结果如下：1、大青叶抗氧化活性成分提取最佳工艺的研究：使用单因素实验法确定响应曲面法的中心水平为：乙醇浓度40%,超声时间80min,提取温度60℃,进一步采用响应曲面法确定超声辅助提取大青中总酚含量(TPC)的最优条件为：乙醇浓度60.9%、超声时间85.4min、超声温度63.3℃,在此条件下的TPC为16.8±0.2mgGAE/gDW;总黄酮含量(TFC)的最佳条件为：乙醇浓度67.7%、超声时间82.9min、超声温度63.0℃,在此条件下的TFC为49.36±0.4mgRT/gDW;抗氧化物质清除DPPH·能力的最佳条件为：乙醇浓度48.8%、超声时间85.1min、超声温度63.9℃,在此条件下清除能力为86.8±0.2%；抗氧化物质清除ABTS·能力的最佳条件为：乙醇浓度50.6%、超声时间81.3min、超声温度63.4℃,在此条件下清除能力为92.9±0.5%。在提取过程中乙醇的浓度是最显著的影响因素。对总黄酮提取率与其抗氧化活性之间的关系进行了探讨,研究表明,总黄酮类成分的含量与其抗氧化活性成正相关性,具有较好的一致性。2、大青叶总浸膏和各萃取段抗氧化活性评价：正丁醇段总黄酮和总酚含量最大,分别为57.52±0.13mgRT/gDW,5.1±0.019mgGAE/gDW大青清除DPPH·的能力最强的是乙酸乙酯萃取段IC50为0.36±0.006mg.ml-1；清除ABTS·能力最强的是乙酸乙酯萃取段IC50为0.102±0.052mg.ml-1;清除·OH能力最强的是正丁醇萃取段IC50为0.653±0.08mg.ml-1;螯合Fe2+离子能力最强的是二氯甲烷萃取段1C50为0.742±0.014mg.ml-1；清除O2·-能力最强的是乙酸乙酯萃取物IC50为13.063±1.555mg.ml-1;还原Fe3+能力最强的是乙酸乙酯段萃取段EC50为0.203±0.008mg.ml-1。结果显示：各萃取段中黄酮类含量大于酚类含量,并且黄酮含量与酚类具有正相关性(P=0.1097>0.05),其中乙酸乙酯段和正丁醇段具有较好的抗氧化活性较好。3、大青单体化学成分：本研究采用正相硅胶,聚酰胺柱层析,SephadexLH-20葡聚糖凝胶,等分离方法共分离得到6个单体化合物,运用HPLC、ESI-MS、IDNMR及2DNMR等现代波谱技术鉴定了其中的4个,它们分别为：3’-甲氧基蓟黄素、滨蓟素、3’-甲氧基蓟黄素-4’-葡糖苷、22-脱氢赪桐甾醇3p-O-β-D-葡糖苷,其中滨蓟素、和22-脱氢赦桐甾醇3p-O-β-D-葡糖苷为首次从该植物中分离得到；本研究将进一步阐明了大青抗氧化作用的物质基础和作用机制,为开发新的天然抗氧化剂提供了理论依。
【作者】周婧；
【导师】杨小波；徐静；
【作者基本信息】海南大学，植物学，2014，硕士
【关键词】大青叶；超声波辅助提取法；抗氧化活性评价；黄酮；结构鉴定；

【参考文献】
[1]黄洁文.美国量化宽松货币政策有效性研究[D].广东外语外贸大学,世界经济,2013,硕士.
[2]龚莉.上海市应对人口老龄化的养老公共服务研究[D].吉林大学,社会医学与卫生事业管理,2013,硕士.
[3]李鑫.武汉地区普通高校保健体育课开展状况及对策研究[D].华中师范大学,体育教学,2013,硕士.
[4]王勇彬.龙首建筑开发公司竞争战略研究[D].西安理工大学,2005.
[5]张中虎.工程咨询业发展对策研究[D].河海大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[6]彭威霖.媒体报道对民营上市公司监督治理效应的研究[D].浙江工商大学,金融学,2014,硕士.
[7]常海峰.LAND CRUISER 100车型导入可行性研究报告[D].吉林大学,工商管理,2004,硕士.
[8]禄宗翰.织金县红艳村布依族文化变迁研究[D].贵州民族大学,民族学,2014,硕士.
[9]吕成国,王承发,李俊庆,韩纪庆,徐近霈.RASTA-PLP技术与谱减相结合的去噪方法[J].自动化学报,2000,05:717-720.
[10]王宁.基于ARM的实时文件存储管理系统的设计[D].中国地质大学（北京）,检测技术与自动化装置,2013,硕士.
[11]高鹏飞.磁控溅射法制备ITO薄膜及其光电性能研究[D].北京交通大学,2014.
[12]李艳.探析汽车公司集团概况英语语篇连贯性的实现[D].广东外语外贸大学,商务英语研究,2013,硕士.
[13]刘青霞.高管薪酬激励与企业绩效的相关性研究[D].北京交通大学,2010.
[14]吕品,赖际舟,刘建业,朱斌,宋亦凡.基于气动模型辅助的四旋翼飞行器室内自主导航方法[J].航空学报.
[15]沙曼.有岛武郎现实主义的转变[D].吉林大学,日语语言文学,2013,硕士.
[16]刘雯雯.文化视角下的美国诗歌清教主义元素汉译研究[D].山东师范大学,英语语言文学,2013,硕士.
[17]边祥博.中药熏蒸法、中药离子导入法对腰椎间盘突出症患者护理效果的研究[D].黑龙江中医药大学,护理学,2013,硕士.
[18]彭珍妮.G市地税局重点税源专业化管理策略研究[D].华南理工大学,公共管理（专业学位）,2014,硕士.
[19]苏丹娅.基于MOLDFLOW平台的电动刨锯外壳产品模流分析[D].山东大学,机械工程（专业学位）,2012,硕士.
[20]徐顺才.环境侵权若干问题研究[D].沈阳师范大学,法律,2014,硕士.
[21]田在艺,常承永,钱绍新.隐蔽油气藏的勘探[J].大庆石油地质与开发.1984(01)
[22]刘阳.考虑齿轮副动态激扰的机车动力学分析[D].西南交通大学,车辆工程,2013,硕士.
[23]袁柳,李战怀,陈世亮.基于本体的DeepWeb数据标注[J].软件学报,2008,02:237-245.
[24]沙祖光,陈德应,罗磊.澜沧江急流水下疏浚技术[J].重庆建筑大学学报,2003,01:100-105.
[25]杨丹丹.《洛阳伽蓝记》代词研究[D].西北大学,汉语言文字学,2013,硕士.
[26]陈银娟.基于代价敏感的特征选择及其在软件缺陷预测中的应用[D].南京师范大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[27]胡海洋.保留幽门胰十二指肠切除术（PPPD）临床疗效分析[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[28]徐维祥,舒季君,唐根年.中国工业化、信息化、城镇化、农业现代化同步发展测度[J].经济地理,2014,09:1-6.
[29]张杰.sAA糖基化和总含量测定方法及其含量与活性关系的研究[D].广东药学院,病原生物学,2013,硕士.
[30]周凡漪.抗生素类药物滥用问题及其法律规制研究[D].浙江大学,法律（专业学位）,2012,硕士.
[31]蒙井玉.城市大型立交连续箱梁桥设计与施工关键技术研究[D].重庆交通大学,桥梁与隧道工程,2012,硕士.
[32]黄安琴.中国高等学校贷款负债问题研究[D].广西师范大学,教育经济与管理,2013,硕士.
[33]张远彬,王开运,鲜骏仁.岷江冷杉林林窗小气候及其对不同龄级岷江冷杉幼苗生长的影响[J].植物生态学报,2006,06:941-946.
[34]LvXiaoting.The Comparative Study of Temporal Metaphors in Chinese and English[D].西安外国语大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[35]胡丹丹.虹鳟MHCⅡ类A基因（DAA）多态性与抗IHN相关性分析[D].甘肃农业大学,动物遗传育种与繁殖,2013,硕士.
[36]张晓懿.甲状腺疾病~(131)Ⅰ治疗中患者受照剂量及其防护的研究[D].苏州大学,MPH（专业学位）,2013,硕士.
[37]曹煜璐.服装消费感知风险对口碑信息源选择的影响[D].北京服装学院,服装设计与工程,2012,硕士.
[38]芦甜,杨耀权.基于IEC61850的线路保护装置的设计[J].计算机仿真,2015,03:169-172.
[39]赵欢欢.村庄里的媒介：甘皖两村庄大众媒介使用对比调查[D].兰州大学,新闻学,2013,硕士.
[40]郭洋琴.高压氧抗大鼠运动性疲劳的效应及机制研究[D].江西科技师范大学,体育教育训练学,2012,硕士.
[41]管鲁.《纽约时报》中有关中国经济报道的批评性话语分析[D].江苏科技大学,外国语言学与应用语言学,2013,硕士.
[42]邱红辉,李立伟,段雄英,范兴明,吕斌.用于激光供能电流互感器的低功耗光电传输系统[J].电力系统自动化,2006,20:72-76.
[43]李佳沩.中学语文教学与校园文化建设的互助关系研究[D].湖南师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[44]简志宏,朱柏松,李霜.动态通胀目标、货币供应机制与中国经济波动——基于动态随机一般均衡的分析[J].中国管理科学,2012,01:30-42.
[45]杜瑞娟.非ST段抬高型急性冠脉综合征患者血浆心型脂肪酸结合蛋白水平与SYNTAX评分的相关研究[D].河北医科大学,内科学,2014,硕士.
[46]叶国东,周小林.TOPSIS法在长沙轨道交通联络线规划决策中的运用[J].铁道运营技术.2008(02)
[47]朱颖.幼儿园区域活动中差异性教学研究[D].山东师范大学,学前教育学,2013,硕士.
[48]梁红伟.软件完整性自动检测系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,计算机技术,2012,硕士.
[49]曾丽兰,王道波,郭才根,黄向华.无人驾驶直升机飞行控制技术综述[J].控制与决策,2006,04:361-366.
[50]郭躬德,王晖,DavidBell.时间序列数据分析与预处理[J].小型微型计算机系统,2003,12:2228-2232.