MRI体外定量测定SPIO标记兔骨髓间充质干细胞

【摘要】目的：培养及鉴定兔骨髓间充质干细胞（r-MSC）,测定SPIO标记r-MSC的安全标记浓度及最佳标记浓度。材料与方法：全骨髓贴壁法培养及扩增r-MSC，流式细胞仪测定细胞表面抗原及成脂诱导分化实验鉴定r-MSC；普鲁士蓝染色测定不同浓度SPIO标记r-MSC的标记阳性率，透射电镜检测细胞内铁粒子的分布情况，原子分光光度仪测定标记细胞铁含量；台盼蓝染色及成脂诱导分化实验测定SPIO标记r-MSC的安全标记浓度。结果：光学显微镜显示r-MSC呈长梭形、栅栏样排列；表面抗原测定高表达：CD90、CD44，低表达：CD14、CD45；成脂诱导分化实验鉴定r-MSC能够分化为脂肪细胞。普鲁士蓝染色显示SPIO浓度越高，标记阳性率越高，SPIO为50.0μg/ml、25.0μg/ml、17.5μg/ml浓度下标记率分别约为97.97%、94.56%、93.77%，差异无统计学意义，p＞0.05。台盼蓝染色显示SPIO浓度≤25.0μg/ml的细胞活力与未标记细胞的细胞活力无显著性差异，p＞0.05；成脂诱导分化实验测定SPIO浓度≤50.0μg/ml时分化能力与未标记细胞未见明显差异。结论：全骨髓贴壁法在37℃、5%CO2条件下用L-DMEM培养基（含FBS15%，青链双抗100U/ml）可体外扩增r-MSC；SPIO标记r-MSC的最佳标记浓度为17.5μg/ml，SPIO标记r-MSC的安全浓度为25.0μg/m（l细胞增殖及多向分化能力无影响），相对安全浓度为50.0μg/ml（细胞增殖稍有影响、多向分化能力无影响）。目的：测定不同细胞浓度下MRI能够发现SPIO标记r-MSC的最低SPIO标记浓度并寻找MRI体外定量测定SPIO标记r-MSC的方法。材料与方法：不同浓度SPIO（50.0μg/ml、25.0μg/ml、17.5μg/ml、10.0μg/ml、2.5μg/ml）标记r-MSC孵化24h；制作含不同SPIO浓度及不同细胞浓度（1×106/ml、1×105/ml、1×104/ml、1×103/ml）的细胞悬液琼脂凝胶标本；3.0TMRIT2*W-GRE、T1-GRE、T2W-PROPELLER序列扫描上述标本；测定平均信号衰减率（△SI（%）=（SI0-SISPIO）/SI0×100）。分析不同细胞浓度组，不同浓度SPIO标记r-MSC的△SI与SPIO标记浓度的相关关系。结果：1×106/ml细胞浓度下，T2*W-GRE、T1-GRE、T2W-PROPELLER序列能够发现的最低SPIO浓度分别为10.0μg/ml、25.0μg/ml、17.5μg/ml；1×105/ml细胞浓度下，T2*W-GRE、T2W-PROPELLER序列能够发现的最低SPIO浓度分别为17.5μg/ml、25.0μg/ml，而T1-GRE序列不能发现标记细胞；1×104/ml细胞浓度下，仅T2*W-GRE序列能够发现50.0μg/mlSPIO标记的r-MSC。直线回归分析显示T2*W-GRE序列，1×104/ml、1×105/ml、1×106/ml细胞浓度组△SI与SPIO浓度可建立线性回归方程，相关系数R分别为0.571、0.939、0.949。结论：MRT2*W-GRE、T1-GRE及T2W-PROPELLER三种扫描序列中T2*W-GRE序列监测SPIO标记r-MSC的效果最佳，T2*W-GRE序列监测SPIO标记r-MSC的效果最佳，T2*W-GRE序列能够发现1×104/ml细胞浓度下的最低SPIO浓度为50.0μg/ml以及1×106/ml细胞浓度下的最低SPIO浓度为10.0μg/ml；适宜细胞浓度（≥1×105/ml），T2*W-GRE序列测定的平均信号衰减率(△SI)与SPIO标记浓度回归分析可用于近似定量预测SPIO标记浓度。
【作者】孙凤；
【导师】杨汉丰；
【作者基本信息】川北医学院，影像医学与核医学，2014，硕士
【关键词】细胞培养技术；兔骨髓间充质干细胞；磁共振成像；超顺磁性氧化铁粒子；T2*W-GRE序列；

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