钾离子抗血管钙化的分子机制研究

【摘要】目的：探讨钾离子对体外培养的血管平滑肌细胞（vascularsmoothmusclecell，VSMC）和动脉血管钙化的影响，揭示钾离子调节血管钙化的分子机制。方法：1.小鼠原代血管平滑肌细胞的培养及鉴定。改良组织块法分离培养原代C57BL/6J小鼠血管平滑肌细胞，光学显微镜观察细胞形态特征；免疫组化方法鉴定VSMC特异性蛋白α-SMA的表达；RT-PCR方法检测VSMC特异性基因α-SMA和SM22α在mRNA水平的表达情况。2.钾离子对平滑肌细胞钙化的抑制作用研究。选第5代VSMC作为实验细胞，实验分为3组:正常对照组（生理磷），高磷钙化组（2.6mmol/LNaPi）,钾离子干预组(2.6mmol/LNaPi+1.0mmol/LKCL)。细胞培养十天，通过显微镜观察细胞生长情况。通过kossa染色观察细胞钙化情况。通过RT-PCR方法检测α-SMA、SM22α、ALP、BMP-2、OPG、Runx2/Cbfα1等基因在mRNA水平的表达情况。通过流式细胞仪观察细胞凋亡情况。所有实验重复3次。3.钾离子对血管钙化的抑制作用研究。分离培养C57BL/6J小鼠主动脉血管，实验分为3组:正常对照组（生理磷），高磷钙化组（2.6mmol/LNaPi）,钾离子干预组(2.6mmol/LNaPi+1.0mmol/LKCL)。培养二十天，通过Vonkossa染色观察血管钙化情况。结果：1．细胞鉴定：光学显微镜下，小鼠VSMC为梭形细胞，呈典型“谷峰”样生长。抗α-SMA抗体免疫组化染色显示，VSMC包浆内可见大量棕色颗粒。RT-PCR显示α-SMA和SM22α在mRNA水平高表达。2．光学显微镜下可见：随着时间的延长，高磷钙化组细胞的透明度开始减退，絮状沉积增多，范围逐渐扩大。与高磷钙化组比较，钾离子干预组絮状沉积减少,范围缩小。细胞培养10天后进行kossa染色，正常对照组细胞无明显钙盐沉积;高磷钙化组细胞可见大量黑褐色钙盐沉积;钾离子干预组细胞钙盐沉积较轻，显示出良好的细胞钙化抑制作同。3.血管平滑肌细胞RT-PCR结果显示:与正常对照组比较，高磷钙化组ALP-1、OPG/RANKL、BMP-2、Runx2/Cbfα1的mRNA表达水平明显上调(P﹤0.01)，而α-SMA、SM22α的mRNA表达水平则显著下降(P﹤0.01);与高磷钙化组比较，钾离子干预组ALP、OPG、BMP-2、Runx2/Cbfα1的mRNA表达水平明显下降(P﹤0.01)，而α-SMA、SM22α的mRNA表达水平明显增加(P﹤0.01)。4.与正常组比较，高磷钙化组凋亡率增高(P﹤0.01)；与高磷钙化组比较，钾离子干预组凋亡率降低(P﹤0.01)。5．kossa染色显示:动脉血管培养20天后,正常组血管壁无明显钙盐沉积；高磷钙化组血管壁可见大量黑色钙盐沉积，钙化灶多分布在中外膜；钾离子干预组钙盐沉积较钙化组轻。结论：1高磷培养液可诱导血管平滑肌细胞与血管钙化。2氯化钾在体外可明显抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞与血管钙化。3氯化钾可能通过抑制血管平滑肌细胞表型转化，降低血管平滑肌细胞的凋亡，从而阻止血管平滑肌细胞与血管钙化的发生。
【作者】张正杨；
【导师】陈建业；
【作者基本信息】川北医学院，药理学，2014，硕士
【关键词】高磷；血管钙化；氯化钾；血管平滑肌细胞；

【参考文献】
[1]李兰兰.建立以“人格”为本的人力资源管理模式[D].湖南师范大学,教育经济与管理,2004,硕士.
[2]窦振京.论贸易救济中的“双反”措施[D].首都经济贸易大学,经济法学,2014,硕士.
[3]王春.中学教师职业倦怠成因分析与对策研究[D].内蒙古师范大学,教育管理（专业学位）,2012,硕士.
[4]吴永鹏.两个单增李斯特菌分离株的毒力测定和基因组测序及比较基因组学分析[D].华中农业大学,预防兽医学,2014,硕士.
[5]秦雅静.医疗侵权举证责任分配制度研究[D].西南财经大学,人口学,2014,博士.
[6]刘军.数控回转库的产品设计[D].长安大学,机械工程,2013,硕士.
[7]易宝娜.我国上市公司反收购法律问题研究[D].北方工业大学,经济法学,2013,硕士.
[8]吴向琴.Akt磷酸化对细胞自噬的调节及真菌次级代谢产物C77影响细胞自噬和HBV复制[D].安徽大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[9]柯春林.X线诱导结直肠癌SW480细胞上皮间质转化及其信号传导通路的相关研究[D].福建医科大学,肿瘤学,2014,硕士.
[10]牟昆昊.水书天干地支与商周同类字形的比较研究[D].贵州民族大学,中国少数民族语言文学,2012,硕士.
[11]陈源.小型船舶电力推进装置系统仿真研究[D].江苏科技大学,控制工程,2014,硕士.
[12]林群.温州市城管移动执法系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[13]马金娇.0-3岁低幼儿童绘本的分级创作与研究[D].首都师范大学,美术学,2014,硕士.
[14]李峥.合作原则视角下《绝望主妇》第八季中对白的会话含意分析[D].华中师范大学,英语语言文学,2013,硕士.
[15]杨凯.基于Linux的高可用性集群管理系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,软件工程,2011,硕士.
[16]龙海琳.林白水与中国报业现代化[D].湖南师范大学,新闻学,2013,硕士.
[17]梁尤平.抓落实练真功求实效——开展“质量品种效益年”活动的作法、效果与体会[J].企业活力.1992(01)
[18]黄帅.我国大学生生命教育研究[D].中国地质大学（北京）,马克思主义理论,2014,硕士.
[19]颜金彪.GPS长基线数据处理软件系统分析与实现[D].西南交通大学,大地测量学与测量工程,2013,硕士.
[20]孙月梅.基于案例分析的初中数学复习课问题研究[D].首都师范大学,学科教学,2013,硕士.
[21]徐洪.旅游地乡村性感知对游客满意与忠诚影响的实证研究——以“森林人家”旅游产品为例[J].湖州师范学院学报,2015,02:88-94.
[22]任杰.泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠血清IL-4、IL-6的影响[D].河北医科大学,中医内科学,2013,硕士.
[23]梁顺军,谢会文,彭更新,刘云祥,齐英敏,叶林,王建宁.高陡构造地震圈闭要素畸变分析[J].石油地球物理勘探,2002,S1:141-144+222.
[24]张梅静.德国地质学家李希霍芬在华勘矿活动及其影响[D].中国矿业大学,科学技术哲学,2014,硕士.
[25]郑舒雯.汞污染场地土壤中汞的空间分布及污染评价[D].兰州大学,环境工程（专业学位）,2013,硕士.
[26]袁晓军.CuMS_2（M=In，Ga）薄膜的制备、掺杂及光学特性[D].内蒙古大学,物理电子学,2014,硕士.
[27]高中才.新型荧光纳米材料碳点的毒性及作用机制研究[D].中国人民解放军军事医学科学院,药理学,2014,博士.
[28]田洪雨.首次膀胱镜检测对非肌层浸润性膀胱癌术后复发和进展的预测价值[D].大连医科大学,外科学,2012,硕士.
[29]崔汝国,牟风明,宋维琪,王成礼.VSP浮动坐标系偏振滤波[J].石油地球物理勘探,2010,01:10-14+164+167.
[30]郭维,殷雅侠,张亚利,万立骏,郭玉国.LiFeSO_4F/石墨烯复合材料的制备与电化学性能[J].电化学,2012,02:125-130.
[31]曹鑫,辜智慧,陈晋,刘晋,史培军.基于遥感的草原退化人为因素影响趋势分析[J].植物生态学报,2006,02:268-277.
[32]何金.大气压射频放电等离子体活性粒子演化特性的数值模拟研究[D].山东大学,高电压与绝缘技术,2013,硕士.
[33]宋泽钊.轻骨料混凝土组合楼板剪切粘结性能有限元分析[D].北方工业大学,结构工程,2014,硕士.
[34]杨孝鸿.29颗SiC碳星的ISO SWS光谱分析及其分子、尘埃特征研究[D].中国科学院研究生院（云南天文台）,天体物理,2003,硕士.
[35]缪君,储珺,张桂梅,王璐.基于稀疏点云的多平面场景稠密重建[J].自动化学报.
[36]黄振.高速重载下恒流静压导轨性能研究[D].湖北工业大学,机械电子工程,2014,硕士.
[37]谭欣宜.汶川县阿尔村羌族羊皮鼓舞的民俗符号与文化认同研究[D].西南交通大学,艺术学,2014,硕士.
[38]孙江联.上市公司环境信息公开法律制度研究[D].复旦大学,环境与资源保护法学,2012,硕士.
[39]周新欢.宫颈癌组织中δ1受体核表达的意义[D].郑州大学,妇产科学,2013,硕士.
[40]陈丽玲.在油菜中超量表达拟南芥NPR1基因对油菜抗病性的影响[D].湖北大学,遗传学,2011,硕士.
[41]聂玉藻.林火时空分析方法与风险模型研建[D].北京林业大学,2005.
[42]麻靖宇.榆林市农村金融发展研究[D].西北农林科技大学,农村与区域发展,2012,硕士.
[43]杨凤玲.自增强技术提高大尺度孔疲劳性能机理研究[D].重庆大学,安全技术及工程,2014,硕士.
[44]韩笑.电力行业上市公司自由现金流量与公司绩效关系的实证分析[D].首都经济贸易大学,企业管理,2014,硕士.
[45]高菲.《艺术的本质》前两章翻译实践报告[D].四川外国语大学,德语MTI,2014,硕士.
[46]丁成荣,王现刚,杨志香,张朝阳,张国富.4-醛基-2,2-二氟苯并二噁茂的合成[J].农药,2013,05:331-333.
[47]郑雄枫.纳米材料在润滑脂中的应用及相关工艺[D].广东工业大学,化学工艺,2013,硕士.
[48]刘俊波,渠敬汤.德士古煤气化炉的试制[J].石油化工设备.1992(04)
[49]洪海娟,池晓波,万跃华.国际图书情报领域本体研究的知识图谱分析[J].情报杂志,2013,04:102-107.
[50]苗丰.散见汉代陶文集录[D].复旦大学,汉语言文字学,2012,硕士.