恩替卡韦和强的松对HBV感染小鼠体内病毒复制表达影响的实验研究

【摘要】目的:观察在使用恩替卡韦联合强的松对HBV感染小鼠体内病毒复制表达的影响，了解抗病毒的情况下使用强的松是否会导致HBV复制型小鼠体内病毒复制表达增强。方法：1.检测强的松对HBV感染小鼠体内病毒复制表达的影响采用高压注射体内转染法将HBV复制型重组质粒pAAV/HBV1.2导入雄性BALB/C小鼠，转染后24h按体重、血清HBeAg水平对小鼠进行配对，分为实验组和对照组。实验组给予强的松200μg/只,溶于0.2ml生理盐水灌胃，对照组给予等量生理盐水处理。于处理后第3、7、10、16、22天处死小鼠，每个时间点实验组和对照组各3-4只。采用real-timePCR（实时荧光定量PCR）检测小鼠血清HBV-DNA(HepatitisBvirusDNA,乙型肝炎病毒DNA)、（HBV-DNA检测下限为500copies/ml）；化学发光法检测血清中HBeAg（HepatitisBeAntigen，乙肝病毒e抗原）和HBsAg（HepatitisBsurfaceantigen，乙肝病毒表面抗原）。2.检测恩替卡韦对HBV感染小鼠体内病毒复制表达的影响造模方法同第一步，转染后24h按体重、血清HBeAg水平对小鼠进行配对，分为实验组和对照组。实验组给予恩替卡韦1.5μg/只，溶于0.2ml生理盐水灌胃，对照组给予等量生理盐水处理。于处理后第1、3、6、11天处死小鼠，每个时间点实验组和对照组各3-4只。采用real-timePCR检测小鼠血清HBV-DNA、化学发光法检测血清中HBeAg和HBsAg。3.检测在不同时间给予恩替卡韦和强的松对HBV感染小鼠体内病毒复制表达的影响造模方法同第一步，转染24h后按体重、血清HBeAg水平对小鼠进行配对，分为6组实验组和3组对照组，每组3~4只。其中4组实验组在分组当天（本实验中定为第0天）给予恩替卡韦灌胃，1.5μg/只，溶于0.2ml生理盐水中，并分别于第0、1、3、7天给于强的松处理，400μg/只，溶于0.2ml生理盐水；剩余2组实验组在第0天给予强的松，并于第3、7天给予恩替卡韦；3组对照组分别设为恩替卡韦、强的松、生理盐水对照组；每组均在给予强的松灌胃16天后处死，留存血清。采用real-timePCR检测小鼠血清HBV-DNA。化学发光法检测血清中HBeAg和HBsAg。结果：一、强的松对HBV感染小鼠体内病毒复制表达的影响1、强的松对小鼠血清HBV-DNA影响1、实验第3、7、10天强的松实验组和生理盐水对照组血清HBV-NDA检测均为阳性，其平均值达105copies/ml,无明显差别；而在实验第16天两组平均值分别为1.83×105,3.07×103copies/ml，两组比较相差2lg,实验组明显高于对照组。实验第22天两组平均值分别为：2.03×104,1.99×103copies/ml，实验组明显高于对照组。2、强的松对HBV小鼠血清HBsAg、HBeAg的影响实验第3、7、10天实验组和对照组小鼠血清HBsAg无明显差别；第16天实验组和对照组小鼠血清HBsAg平均值分别为：53.35IU/ml、1.97IU/ml，实验组高于对照组；第22天HBsAg水平仍高于对照组。实验第3、7、10天小鼠血清实验组和对照组HBeAg无明显差别；第16天小鼠血清HBeAg实验组明显高于对照组;第22天小鼠血清HBeAg实验组仍高于对照组。二、恩替卡韦对HBV感染小鼠体内病毒复制表达的影响1、恩替卡韦对小鼠血清HBV-DNA影响实验组和对照组小鼠在第1天血清HBV-DNA均达104copies/ml，无明显差异；第3天实验组和对照组平均值为104copies/ml,105copies/ml,实验组明显低于对照组；第6天检测实验组其中1只为阴性，2只为阳性，其值为102copies/ml，对照组都为阳性，其平均值为5.27×105copies/ml;实验组明显低于对照组；第11天检测实验组均为阴性，对照组检测均为阳性平均值为104copies/ml，对照组明显高于实验组。2、恩替卡韦对小鼠血清HBsAg、HBeAg的影响实验第1、3、6、11天实验组和对照组小鼠血清HBsAg水平无明显差别；实验第1、3、6、11天小鼠血清实验组和对照组HBeAg水平无明显差别。三、恩替卡韦和强的松对HBV感染小鼠体内病毒复制表达的影响1、恩替卡韦和强的松对小鼠血清HBV-DNA的影响生理盐水对照组小鼠血清HBV-DNA平均值为2.1×103copies/ml；预先给予恩替卡韦的4组实验组中，在第7、3、1、0天给予强的松灌胃后，在试验终点HBV-DNA均为阴性；预先给予强的松的2组实验组中，在第3天给予恩替卡韦小鼠血清中HBV-DNA平均值为2.21×103copies/ml，与生理盐水对照组无明显差别；在第7天给予恩替卡韦组，小鼠血清HBV-DNA平均值为1.29×104copies/ml，高于生理盐水对照组也明显高于3天组。2、恩替卡韦和强的松对小鼠血清HBsAg、HBeAg的影响预先给予恩替卡韦，并分别在7、3、1、0天给予强的松的4组实验组，血清HBsAg水平均低于生理盐水组，各组之间无明显差异；预先给予强的松并分别于第3、7天给予恩替卡韦的2组实验组中，小鼠血清HBsAg水平都低于生理盐水组，且两组之间无明显差异。预先给予恩替卡韦，并分别在7、3、1、0天给予强的松的4组实验组血清HBeAg水平都低于生理盐水组，但其水平随着恩替卡韦预先处理的时间延长而降低；预先给予强的松并分别于第3、7天给予恩替卡韦的实验组小鼠，血清HBeAg都低于生理盐水组，7天组稍高于3天组。结论：HBV复制型小鼠在给予强的松处理之前预先给予或同时给予恩替卡韦处理可抑制HBV-DNA复制，有效避免强的松引起的HBV再激活。给予强的松处理后延迟3天给予恩替卡韦即不能阻断强的松对小鼠体内HBV再激活，延迟越久效果越差。
【作者】石瑶；
【导师】周仲辉；
【作者基本信息】川北医学院，内科学，2014，硕士
【关键词】HBV复制型小鼠模型；高压注射体内转染法；强的松；恩替卡韦；HBV-DNA；real-timePCR；化学发光法；

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