嗜肺军团菌DPCK和嗜肺军团菌天冬氨酸转氨酶的初步晶体学研究

【摘要】辅酶A作为一个必要的辅助因子,在细胞代谢中起着重要的作用,它作为酰基载体,介导生物体内各种生化反应。辅酶A合成的最后两个步骤是,4’-磷酸泛酰巯基乙胺在腺苷酰转移酶(PPAT)的作用下形成脱磷酸辅酶A,脱磷酸辅酶A在脱磷酸辅酶A激酶的(DPCK)催化下形成辅酶A。脱磷酸辅酶A激酶包含一个高度保守的P-loop或者WarkerA基序GXXXXGKT/S(X代表任何氨基酸残基),它们作用是与核酸结合,这个基序前端带有一个β链,后端带有一个α螺旋,它可与核苷酸的磷酸基团相互作用。激酶必须防御外在的水分子以保护活性位点,以避免其成为ATP酶。在许多激酶结构中,配体通常诱导结构的变化来保护催化中心。根据以前对大肠杆菌,流感嗜热杆菌,以及嗜热菌HB8中的脱磷酸辅酶A激酶的研究,发现这种类型的结构变化在脱磷酸辅酶A激酶中也起着很重要的作用。因此,研究脱磷酸辅酶A激酶的结构域变化将对于揭示其磷酸化的机制具有关键性意义。嗜肺军团菌中的脱磷酸辅酶A激酶长207个氨基酸,分子量为23.6kDa,与来自大肠杆菌,流感嗜热杆菌,以及嗜热菌HB8中的脱磷酸辅酶A激酶分别具有40%,38%以及31%的同源性。为了更清楚的研究脱磷酸辅酶A激酶的生物学功能和结构域的性质,我们在大肠杆菌中表达了嗜肺军团菌中的脱磷酸辅酶A激酶,在进行蛋白纯化后,使用悬滴的方法进行晶体生长,在100K温度下通过初步X射线衍射收集到数据,并通过分子置换的方法解析了相位,该蛋白晶体的空间群为P21212,晶胞参数是a=36.29A,b=82.20A,c=81.80A。
【作者】于冬敏；
【导师】葛宏华；徐终东；
【作者基本信息】安徽大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】DPCK；嗜肺军团菌；X-ray衍射；晶体结构；天冬氨酸转氨酶；

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