家蚕核型多角体病毒(BmNPV)lef-12基因的功能分析

【摘要】晚期表达因子12（lateexpressionfactor12，LEF-12）是昆虫核型多角体病毒（nuclearpolyhedrosisvirus，NPV）基因组中普遍存在的转录调控因子。研究结果表明LEF-12可影响病毒基因的表达，但其在家蚕核型多角体病毒（BmNPV）基因组中的功能还不清楚。为了研究LEF-12的生物学功能，我们通过Red重组技术敲除了BmNPV的lef-12基因，构建了lef-12缺失型病毒lef12-ko-Bacmid，再利用Bac-to-Bac系统将lef-12基因补回到病毒基因组中，构建了补回型病毒lef12-re-Bacmid。然后将野生型病毒wtBacmid、lef12-ko-Bacmid和lef12-re-BacmidDNA分别转染家蚕BmN细胞，发现三种病毒转染的细胞内均可产生具有感染活性的病毒粒子，但是病毒滴度测定结果显示lef12-ko-Bacmid的病毒产量比wtBacmid下降了3倍左右，而lef12-re-Bacmid基本上恢复到了野生型病毒的水平，表明lef-12基因的缺失可能会延缓病毒的发病时间。此外，我们进一步研究了lef-12基因敲除对病毒基因组的复制和病毒基因转录的影响。结果发现lef-12基因缺失后，BmNPVDNA复制没有受到明显影响，说明lef-12不是病毒基因组复制的必需基因；对病毒早期基因lef-3的转录水平也没有明显变化，但病毒晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平均明显低于野生型和补回型病毒（p<0.05）。晚期蛋白VP39和极晚期蛋白P10的表达水平也明显低于野生型和补回型重组病毒（p<0.05）。透射电镜检测结果也进一步证实了lef-12基因缺失后，病毒仍能进行正常复制和装配，但与野生型病毒相比，病毒的繁殖量有所下降。上述研究结果表明BmNPVlef-12不是病毒基因组复制的必需基因，但其缺失将导致细胞发病延迟，对病毒晚期和极晚期基因的转录和翻译也具有一定的影响。
【作者】袁佳；
【导师】童富淡；
【作者基本信息】浙江理工大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】BmNPV；lef-12；Red重组系统；BactoBac系统；病毒复制；基因转录；蛋白翻译；

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