BmNPV DNA结合蛋白GP88对病毒复制和转录调控机制的研究

【摘要】众所周知，通过基因敲除的方法研究杆状病毒基因的功能是一种很有效的手段，特别是探究基因在病毒感染周期中对病毒复制和基因转录调控的影响方面尤为突出。GP88蛋白是家蚕杆状病毒（BmNPV）基因组中的一种DNA结合蛋白，被认为是一种病毒基因转录调控因子，然而，在病毒DNA复制、转录过程中GP88蛋白是否起着某种调节作用还未可知。在这项工作中，我们运用Red重组技术敲除了BmNPV的gp88基因，构建了gp88缺失型病毒gp88-ko-Bacmid；再利用Bac-to-Bac技术构建了gp88补回型病毒gp88-re-Bacmid，再将三种病毒Bacmid（wtBacmid、gp88-ko-Bacmid和gp88-re-Bacmid）DNA转染BmN细胞，经过实验分析发现，gp88缺失型病毒TCID50为零，而gp88修复型病毒的TCID50则与野生型基本相同（p>0.05），这说明gp88基因缺失会导致不能形成具有感染活性的病毒粒子。为了深入了解GP88的生物学功能，我们利用荧光定量PCR技术分析了三种病毒Bacmid转染细胞后病毒基因组DNA的复制情况以及病毒早期、晚期和极晚期基因的转录情况。结果显示，缺失gp88基因后，病毒基因组DNA的复制水平较野生型和补回型病毒均显著降低（p<0.05）；病毒早期基因lef-3、ie-1和dnapol，晚期基因vp39与极晚期基因p10的转录水平相比较修复型与野生型病毒而言均有显著降低（p<0.05）。WesternBlot检测显示gp88基因的缺失会导致LEF3、VP39以及P10基本不表达，而野生型和gp88补回型病毒则检测到上述三种蛋白表达。透射电镜检测结果也进一步证实了gp88基因缺失后，细胞内无成熟的病毒粒子形成，而gp88基因修复后，电镜观察的情况与野生型病毒相似，有大量成熟的病毒粒子产生。综上研究结果表明：gp88基因的缺失会导致BmNPV基因组复制水平显著降低；敲除gp88后会导致BmNPV各时期基因的转录水平显著下降，同时也会导致病毒早期、晚期和极晚期蛋白表达水平显著降低或不表达，并且不能形成具有感染性的病毒粒子。
【作者】张臣；
【导师】于威；
【作者基本信息】浙江理工大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】BmNPV；gp88基因；Red重组系统；BactoBac系统；基因敲除；基因补回；

【参考文献】
[1]崔秀峰.基于MPI的分布式搜索引擎设计与实现[D].大连理工大学,计算机技术（专业学位）,2013,硕士.
[2]丁建红.我国《新闻法》立法的若干问题[D].云南财经大学,法学理论,2014,硕士.
[3]金雪丽.韩国庆州历史景观保护的经验与启示[D].西安建筑科技大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[4]毕庆员.基于甲酸/甲酸盐制氢及储氢多相催化体系的构建[D].复旦大学,物理化学,2013,博士.
[5]李钱鱼.玉簪属（Hosta）植物的品种资源及其花叶嵌合体特性研究[D].浙江大学,园林植物与观赏园艺,2004,硕士.
[6]刘彬.青藏高原中部玉树二叠纪—三叠纪镁铁质岩石的成因及其地球动力学背景[D].中国地质大学,矿物学、岩石学、矿床学,2014,博士.
[7]王素娜.曹娥江支流水质评价与河流水系环境容量分析[D].浙江大学,2005.
[8]陈小红.人参二醇、三七皂苷对造血细胞糖皮质激素受体核转录因子的诱导作用[D].浙江中医学院,中西医结合临床,2003,硕士.
[9]王明阳.基于SOA的区级电子政务平台系统方案研究[D].天津大学,公共管理,2013,硕士.
[10]李丹.FW月子会所商业模式策划[D].河北工业大学,工商管理,2013,硕士.
[11]朱宇晖.数额犯若干问题研究[D].华东政法学院,刑法学,2003,硕士.
[12]朱群雄,李芳.过程工业中关联规则的采掘[J].计算机工程与应用,2002,14:188-189+214.
[13]王辉.双界面小额支付模块设计与研发[D].吉林大学,软件工程,2014,硕士.
[14]吴丹.股权结构对上市公司社会责任履行情况的影响[D].兰州商学院,会计学,2013,硕士.
[15]贾桐.考虑人为差错影响的桥梁支架安全性研究[D].北京交通大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[16]李臻.民航发动机维修工作范围优化方法及其应用[D].哈尔滨工业大学,机械工程,2014,硕士.
[17]刘东.特约主编寄语[J].电力系统自动化,2012,18:1.
[18]钟华.快速估算国际工程项目成本[D].天津大学,水利工程,2013,硕士.
[19]龙运泓.中国西南航空公司常旅客系统建设[D].四川大学,2004.
[20]赵莉.医生及患者对慢性鼻—鼻窦炎主、客观评价的相关性分析[D].山东大学,耳鼻咽喉科学,2013,硕士.
[21]王华.12V190燃气发动机混合器结构设计与优化[D].合肥工业大学,动力工程,2013,硕士.
[22]黄菲.叶甲科昆虫线粒体细胞色素b基因片段分子系统学研究[D].陕西师范大学,动物学,2004,硕士.
[23]贺毅力.我国房地产投资信托法律制度的研究[D].长安大学,经济法学,2014,硕士.
[24]李琳.浅谈XML及其在MicrosoftOffice中的应用[J].衡阳师范学院学报(自然科学),2003,03:69-72.
[25]陈烨.伊格尔顿意识形态理论及其意义[D].辽宁大学,马克思主义哲学,2012,硕士.
[26]贾瑞强.非平衡负电性离子反应床电源系统的设计与研究[D].西北大学,化工过程机械,2014,硕士.
[27]王秋平.企业核心能力评判研究[D].南京航空航天大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[28]姚志军.祁连山断裂滑动速率的混沌遗传算法反演[D].长安大学,大地测量学与测量工程,2014,硕士.
[29]中国工商银行个人金融业务部课题组.个人金融业务产品交叉销售研究[J].金融管理与研究(杭州金融研修学院学报),2005,11:14-18.
[30]蒋朋.基于内在点强的加权网络演化模型的相关结果[D].南京航空航天大学,概率论与数理统计,2013,硕士.
[31]王彩彩.血清sIL-2R、sTNFRⅡ水平测定在结节病研究中的意义[D].第二军医大学,内科学（专业学位）,2013,硕士.
[32]王桂金,V.VITEK.Cu-Bi合金偏析的原子模拟Ⅱ.偏析引起的晶界结构转变[J].金属学报.1988(01)
[33]尹文梅.超高分子量聚乙烯研究制备[D].西北师范大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[34]侯悦.多项式方式在热轧粗轧短行程控制中的应用[J].冶金自动化,2003,S1:135-136.
[35]董祥英,冯慧,吕洁光,刘昱,苗菊英.通用仪器CAT可视软件开发平台的初步研究、开发和应用[J].宇航计测技术.1997(03)
[36]杨烊.炙甘草汤治疗气血两虚型失眠的理论探讨及临床观察[D].广州中医药大学,中医学（专业学位）,2013,硕士.
[37]庄雪玫.初中语文教学中的情感教育研究[D].华中师范大学,教育管理,2012,硕士.
[38]沈锐龙.宽带射频信号的直接产生系统研究[D].南京航空航天大学,电磁场与微波技术,2013,硕士.
[39]科技.可高度导电和储能的粘土材料研制成功[J].军民两用技术与产品,2015,01:32.
[40]薛少龙.构建纳米顺铂核—铁蛋白和在铁胁迫下斑马鱼铁蛋白H和M亚基的表达水平[D].厦门大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[41]吴山.外资持股与中国企业信息控制权流失[D].华东师范大学,情报学,2013,硕士.
[42]王健龙.锂硫电池正极S/C及S/TiO_2复合材料的制备和性能研究[D].中南大学,2014.
[43]沈玉成.人工颈椎间盘置换术与前路融合术治疗颈椎病的对照研究[D].苏州大学,临床医学（专业学位）,2013,硕士.
[44]张鹏帅.多序列比对优化方法研究[D].西安电子科技大学,2005.
[45]朱晓晴.我国商业银行个人理财业务发展研究[D].浙江大学,2006.
[46]何国雄.基于MapReduce的图聚类算法的研究与实现[D].湖南大学,计算机技术,2012,硕士.
[47]刘敬媛.纳豆芽孢杆菌蛋白酶对SPI功能特性的影响及应用[D].东北农业大学,农产品加工与贮藏工程,2013,硕士.
[48]郝雁.用于可压缩流动的格子Boltzmann模型的数学理论[D].吉林大学,流体力学,2004,硕士.
[49]余东海,王成勇,成晓玲,宋月贤.磁控溅射镀膜技术的发展[J].真空,2009,02:19-25.
[50]荣梅.统一战线与社会主义政治文明建设的关系研究[D].大连理工大学,马克思主义理论与思想政治教育,2004,硕士.