远志对DPN大鼠坐骨神经及其相关神经元胞体的保护作用
【摘要】糖尿病周围神经病变(diabeticperipheralneuropathy,DPN)是糖尿病(diabetesmellitus,DM)最常见的慢性并发症之一,其发病率高达47%～91%,是DM患者致残甚至致死的主要原因之一。由于DPN的高发病率和高致残率,DPN的防治已成为DM研究的重要课题。DPN的发病机制尚不十分明了,进一步探讨DPN发病机制对预防和治疗DPN具有十分重要的意义。近年来,中药多靶点治疗疾病受到越来越多的关注。以往的研究证实,中药远志(Polygala)对中枢神经系统具有保护作用,但关于远志对周围神经病变作用的研究国内外报道较少。本研究采用腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立DPN大鼠模型,探讨远志对DPN大鼠坐骨神经及其相关神经元胞体的保护作用,为预防和治疗DPN提供实验基础和理论依据。第一部分远志对DPN大鼠坐骨神经的保护作用目的：本研究采用腹腔注射STZ诱导建立DPN大鼠模型,通过观察大鼠坐骨神经形态结构和功能的变化,研究远志对DPN大鼠坐骨神经的保护作用,进一步探讨DPN的发病机制,为治疗和预防DPN提供实验基础和理论依据。方法：雄性Wistar大鼠48只,随机分为4组：正常对照组、DPN模型组、远志治疗组和远志预防组,每组12只。DPN模型组、远志治疗组和远志预防组大鼠均建立STZ致DM模型。待DM模型建立后,远志预防组大鼠给予远志(2.7g生药/kg/d)灌胃6周；DPN模型组和远志治疗组大鼠以尾部感觉神经传导速度(sensenerveconductionvelocity,SNCV)<30m/s为标准建立DPN模型。DPN模型建立后,远志治疗组大鼠给予同等剂量远志灌胃6周。分别测定大鼠血糖(bloodglucose,BG)和尾部SNCV,紫外分光光度法测定大鼠坐骨神经醛糖还原酶(aldosereductase,AR)活性,光镜、电镜下观察大鼠坐骨神经的形态结构,免疫组织化学方法观察大鼠坐骨神经神经微丝蛋白(neurofilamentprotein,NFP)的表达。结果：1各组大鼠BGDPN模型组大鼠BG为(25.40±4.22)mmol/L,明显高于正常对照组大鼠(P<0.01)。远志治疗组和远志预防组大鼠BG分别为(15.80±5.60)mmol/L、(17.20±4.56)mmol/L,均明显低于DPN模型组大鼠(P<0.01)。2各组大鼠尾部SNCVDPN模型组大鼠尾部SNCV为(27.45±1.16)m/s,明显低于正常对照组大鼠(P<0.01)。远志治疗组和远志预防组大鼠尾部SNCV分别为(33.01±1.98)m/s、(33.20±1.09)m/s,均明显高于DPN模型组大鼠(P<0.01)。3各组大鼠坐骨神经的形态结构光镜下正常对照组大鼠坐骨神经神经纤维髓鞘结构完整,轴索清晰可见；DPN模型组大鼠坐骨神经神经纤维髓鞘结构模糊,轴索萎缩变性,部分神经纤维横切面呈空泡样；远志治疗组和远志预防组大鼠坐骨神经神经纤维的形态结构均明显好于DPN模型组大鼠。电镜下DPN模型组大鼠坐骨神经有髓神经纤维髓鞘结构散乱、板层分离；部分神经纤维微管及微丝断裂、溶解；轴索内线粒体嵴断裂、肿胀变性。远志治疗组和远志预防组坐骨神经有髓神经纤维的超微结构均明显好于DPN模型组大鼠。4各组大鼠坐骨神经AR活性DPN模型组大鼠坐骨神经AR活性为(1.0695±0.1811)U/mgprot,明显高于正常对照组大鼠(P<0.01)。远志治疗组和远志预防组大鼠坐骨神经AR活性分别为(0.6266±0.1633)U/mgprot、(0.3475±0.1068)U/mgprot,均明显低于DPN模型组大鼠(P<0.01)。5各组大鼠坐骨神经NFP的表达NFP免疫阳性产物为棕黄色细腻颗粒,位于坐骨神经轴索。DPN模型组大鼠坐骨神经NFP的表达明显低于正常对照组大鼠(P<0.01)。远志治疗组和远志预防组大鼠坐骨神经NFP的表达均明显高于DPN模型组大鼠(P<0.01)。结论：1远志可降低DPN大鼠BG,提高DPN大鼠尾部SNCV,改善DPN大鼠坐骨神经形态结构的病理变化,并预防DM大鼠尾部SNCV的下降,延缓DM大鼠坐骨神经形态结构的损伤。2远志可减弱DPN大鼠坐骨神经AR活性,上调DPN大鼠坐骨神经NFP的表达,并预防DM大鼠坐骨神经AR活性的增强和NFP表达的下调。3远志对DPN大鼠坐骨神经损伤具有预防和保护作用。第二部分远志对DPN大鼠坐骨神经相关神经元胞体的保护作用目的：本研究采用腹腔注射STZ建立DPN大鼠模型,通过观察大鼠背根节神经元和脊髓前角运动神经元胞体形态结构和神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)蛋白表达的变化,研究远志对DPN大鼠坐骨神经相关神经元胞体的保护作用,为预防和治疗DPN提供理论依据和实验基础。方法：雄性Wistar大鼠48只,随机分为4组：正常对照组、DPN模型组、远志治疗组和远志预防组,每组12只。DPN模型组、远志治疗组和远志预防组大鼠均建立STZ致DM模型。待DM模型建立后,远志预防组大鼠给予远志(2.7g生药/kg/d)灌胃6周；DPN模型组和远志治疗组大鼠以尾部SNCV<30m/s为标准建立DPN模型。DPN模型建立后,远志治疗组大鼠给予同等剂量远志灌胃6周。光镜、电镜下观察大鼠背根节神经元和脊髓前角运动神经元胞体的形态结构,免疫组织化学方法观察大鼠背根节神经元和脊髓前角运动神经元NGF蛋白的表达。结果：1各组大鼠背根节神经元胞体的形态结构光镜下正常对照组大鼠背根节神经元胞体结构完整,体积饱满,胞核呈圆形居胞体正中,尼氏体呈颗粒状。DPN模型组大鼠背根节神经元胞体体积明显缩小,神经元池明显增宽,尼氏体溶解,部分神经元胞体变性,胞核溶解、消失。远志治疗组和远志预防组大鼠背根节大部分神经元胞体的形态结构接近正常形态,均明显好于DPN模型组大鼠。电镜下DPN模型组大鼠背根节神经元胞浆内线粒体高度肿胀,呈空泡样变性,溶酶体明显增多；粗面内质网断裂,核糖体游离在胞浆中；核膜多处凹陷、皱褶,染色质边集；变性严重的神经元胞核固缩、明显移位且核膜溶解界限不清；胞浆内可见核碎片及大量电子密度较高的致密团块。远志治疗组和远志预防组大鼠背根节神经元胞体的超微结构均明显好于DPN模型组大鼠。2各组大鼠背根节神经元NGF蛋白的表达NGF蛋白免疫阳性产物为棕黄色细腻颗粒,位于背根节神经元胞浆和胞核,以胞浆为主。DPN模型组大鼠背根节神经元NGF蛋白的表达明显低于正常对照组大鼠(P<0.01)。远志治疗组和远志预防组大鼠背根节神经元NGF蛋白的表达均明显高于DPN模型组大鼠(P<0.01)。3各组大鼠脊髓前角运动神经元胞体的形态结构光镜下正常对照组大鼠脊髓前角运动神经元胞体形态完整,突起清晰可见,尼氏体呈斑块状。DPN模型组大鼠脊髓前角运动神经元胞体体积缩小,神经元池增宽,尼氏体未见明显变化。远志治疗组和远志预防组大鼠脊髓前角运动神经元胞体的形态结构基本接近正常形态。电镜下DPN模型组大鼠脊髓前角运动神经元胞体的超微结构未见明显变化,个别神经元尼氏体溶解。远志治疗组和远志预防组大鼠脊髓前角运动神经元胞体的超微结构未见明显变化。4各组大鼠脊髓前角运动神经元NGF蛋白的表达NGF蛋白免疫阳性产物为棕黄色细腻颗粒,位于脊髓前角运动神经元胞浆和胞核,以胞浆为主。DPN模型组大鼠脊髓前角运动神经元NGF蛋白的表达明显低于正常对照组大鼠(P<0.01)。远志治疗组和远志预防组大鼠脊髓前角运动神经元NGF蛋白的表达均明显高于DPN模型组大鼠(P<0.01)。结论：1远志可改善DPN大鼠背根节神经元和脊髓前角运动神经元胞体形态结构的病理变化,并预防DM大鼠背根节神经元和脊髓前角运动神经元胞体形态结构的损伤。2远志可上调DPN大鼠背根节神经元和脊髓前角运动神经元NGF蛋白的表达,并预防DM大鼠背根节神经元和脊髓前角运动神经元NGF蛋白表达的下调。3远志对DPN大鼠坐骨神经相关神经元胞体损伤具有预防和保护作用。
【作者】马洪伟；
【导师】薛景凤；陈志宏；
【作者基本信息】承德医学院，人体解剖与组织胚胎学，2011，硕士
【关键词】远志；糖尿病周围神经病变；血糖；感觉神经传导速度；坐骨神经；背根节；脊髓；
【参考文献】
[1]余雄.当代中国证券市场内幕交易及其监管问题研究[D].华中师范大学,行政管理,2003,硕士.
[2]王严.基于单片机的无刷直流电机控制系统设计与实现[D].南京邮电大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[3]杨捷.基于博弈论的供应链协同收益分配研究[D].燕山大学,企业管理,2013,硕士.
[4]郑凯圆.汉语成语的认知机制研究[D].山东财经大学,外国语言学及应用语言学,2012,硕士.
[5]吕文欣.基于云理念的开放式电力系统数值仿真系统[D].山东大学,电力系统及其自动化,2013,硕士.
[6]刘浩.基于异常模式的入侵检测系统的研究[D].中南大学,2004.
[7]薛菲.沙利度胺对体外培养的人正常真皮成纤维细胞增殖活性、胶原合成及MMP-1、TIMP-1表达的影响[D].河北医科大学,皮肤病与性病学,2014,硕士.
[8]黄素青.基于六西格玛管理法的小微企业贷款流程优化研究[D].暨南大学,金融学,2013,硕士.
[9]万锴.多发性骨髓瘤游离轻链检测若干问题的探讨[D].华中科技大学,血液内科,2013,硕士.
[10]罗小霞.噻吩聚合物的改性及其与CdSe量子点的组装[D].合肥工业大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[11]舒婷.量子点敏化太阳能电池结构调控与性能优化[D].华中科技大学,2012.
[12]李妍.潜在指纹显现与识别的光电化学方法研究[D].浙江大学,化学,2013,硕士.
[13]文丹.湖南宁乡与湘乡边界东段的方言状况[D].湖南师范大学,汉语言文字学,2004,硕士.
[14]周焕银,张永.关联规则候选项频度规律研究[A].中国计算机学会数据库专业委员会.第二十届全国数据库学术会议论文集（技术报告篇）[C].中国计算机学会数据库专业委员会:,2003:3.
[15]眭建华.室内装饰织物设计的研究与产品开发[D].苏州大学,纺织工程,2003,硕士.
[16]陈先梅.ZnO及ZnO：Ag纳米棒的两步法制备研究[D].郑州大学,凝聚态物理,2013,硕士.
[17]张晓宇.我国经济适用房法律制度研究[D].辽宁大学,法律,2012,硕士.
[18]李雪.新时期完善我国妇女权益保障的问题与对策研究[D].渤海大学,科学社会主义与国际共产主义运动,2014,硕士.
[19]朱丽莎.我国社会保障权行政救济探析[D].武汉科技大学,行政管理,2012,硕士.
[20]陈彬.NF-κB圈套策略抗血管内皮细胞氧糖剥夺/复氧炎性损伤及其机制的研究[D].重庆医科大学,神经病学,2004,硕士.
[21]王春晖.肠出血型大肠埃希菌O157:H7 EspF蛋白诱导细胞凋亡功能研究[D].南方医科大学,病原生物学,2012,硕士.
[22]张欢.通信企业员工幸福感测评与影响因素研究[D].北京邮电大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[23]任野.英美朋克音乐发展研究[D].云南艺术学院,西方音乐史,2014,硕士.
[24]王旭博.车联网环境下数据融合信任模型研究[D].长安大学,交通运输工程（专业学位）,2014,硕士.
[25]徐曼姝.重庆市天星桥社区商业街物质环境对行人活动影响研究[D].重庆大学,城市规划与设计,2014,硕士.
[26]王培培.抛锚式教学对缓解高职学生英语课堂焦虑的有效性研究[D].山东师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[27]范高强.《六朝文絜》研究[D].辽宁大学,中国古代文学,2012,硕士.
[28]马庆防.人脑胶质瘤中MMP-9、CD133蛋白的表达及临床意义[D].济南大学,外科学,2012,硕士.
[29]张建琳.县域经济中食用菌产业结构与规模的优化研究[D].南京农业大学,企业管理,2011,硕士.
[30]李明桂.牛睾丸组织b-Boule基因表达的甲基化调控研究[D].南京农业大学,动物遗传育种与繁殖,2012,硕士.
[31]郭伟.中美上市公司独立董事制度比较研究[D].外交学院,国际法,2014,硕士.
[32]傅爱竹.被缚的法官：规训的逻辑与法官绩效考核制度之反思[D].吉林大学,法学理论,2014,硕士.
[33]魏海瑛.熄风止动冲剂治疗儿童抽动秽语综合征的临床观察[D].黑龙江中医药大学,中医学（专业学位）,2013,硕士.
[34]汤奇.荆芥挥发油与主要成分抗流感病毒作用及其机制研究[D].成都中医药大学,药理学,2012,硕士.
[35]许晓明.论民事诉讼第三人制度[D].华中师范大学,民事诉讼法,2012,硕士.
[36]袁斌.物理层网络编码与卷积码的联合设计[D].西南交通大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[37]任中杰.黑穗醋栗果实多糖的提取纯化、结构鉴定及生物活性的研究[D].东北农业大学,果树学,2013,硕士.
[38]唐纪平.海南高校旅游人才培养模式研究[D].海南大学,旅游管理,2014,硕士.
[39]曾璐.房产税计税依据研究[D].中南民族大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[40]蒋伟宏.珠海天然气公司发展战略与实施策略研究[D].大连海事大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[41]叶星辰.厄贝沙坦缓释胶囊的研制[D].广东药学院,药剂学,2012,硕士.
[42]范文.我国NGO筹资困境及其对策研究[D].湖北大学,行政管理,2011,硕士.
[43]陈敏.循环流化床灰与聚羧酸减水剂的相容性研究[D].北京建筑大学,结构工程,2013,硕士.
[44]李蕾.肺癌细胞无血清培养差异蛋白质组学研究方法的建立与应用[D].中国人民解放军军事医学科学院,药物分析学,2003,硕士.
[45]吴荷芳.江苏省水稻纹枯病菌致病力分化及其遗传多样性研究[D].南京农业大学,植物病理学,2012,硕士.
[46]马昕.房地产业融资风险控制与防范研究[D].西安建筑科技大学,结构工程,2004,硕士.
[47]徐伯勋,白旭滨.最大熵子波反褶积[J].石油地球物理勘探,1987,05:590-599.
[48]刘祥林.雷达区域相关匹配技术及其在潘兴Ⅱ战术地地导弹末制导上的应用[J].飞航导弹.1989(05)
[49]熊拥军,刘卫国,张建中.基于资源分类树的读者兴趣模型设计与实现[J].情报理论与实践,2005,03:328-331.
[50]明月.大跨桥梁双拱肋气动干扰效应试验研究[D].大连理工大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
