丙戊酸钠对Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤细胞周期的影响

【摘要】目的：染色体易位产生的AML1/ETO的融合蛋白异常募集组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制AML1靶基因的转录是t(8；21)急性白血病关键的发病机制。本研究探讨HDAC抑制剂丙戊酸钠(valproicacid,VPA)对Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其对细胞周期的影响。为VPA治疗白血病提供更好的理论依据。材料与方法：建立Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤模型,研究VPA对Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用,应用流式细胞仪检测VPA对于瘤组织细胞周期的影响；应用免疫组织化学方法、RT-PCR及WesternBlot等生物化学技术检测瘤体组织细胞周期调节相关基因的mRNA或蛋白表达水平的变化。结果：1.Kasumi-1细胞的移植瘤模型特点裸鼠接种Kasumi-1细胞后,第3天开始成瘤,成瘤率为100%。荷瘤裸鼠随着时间延长,肿瘤体积逐渐增大,绘制肿瘤生长曲线。经病理切片检查,裸鼠的外周血、肝脏、肺脏均未见瘤细胞转移。RT-PCR方法检测Kasumi-1细胞标志性融合基因AML1/ETO,证实其表达存在。2.VPA对于裸鼠移植瘤的生长抑制作用VPA体内用药明显抑制裸鼠Kasumi-1细胞移植瘤的生长,VPA组平均瘤体重为(0.46±0.17)g,相对肿瘤体积比为0.46±0.17,对照组平均瘤体重为(1.57±0.25)g,相对肿瘤体积比为1.57±0.25,VPA用药组瘤体积及重量与对照组相比明显缩小,肿瘤抑制率(IR%)为57.25%。3.VPA对于细胞周期的影响流式细胞仪检测VPA组和对照组细胞周期的改变,结果经统计学分析发现,VPA组G0/G1期细胞比例为(60.93±1.18)%、对照组G0/G1细胞的比例为(74.05±3.06)%,VPA组与对照组相比明显升高,具有明显统计学差异(P<0.01)4.VPA对细胞周期素依赖型激酶(CDK,cyclin-dependentkinase)抑制因子P21WAF1/CIP影响VPA体内用药应用RT-PCR、Western-blot和免疫组化的方法检测P21WAF1/CIP的变化,结果显示：VPA诱导P21WAF1/CIP表达明显增加。对照组和VPA组P21WAF1/CIPmRNA分别为(0.495±0.060)和(0.766±0.104),具有明显统计学差异(P<0.01)。并且VPA诱导P21WAF1/CIP蛋白表达量增加,VPA组P21WAF1/CIP蛋白表达水平(0.900±0.113)明显高于对照组(0.3900±0.012),具有显著性差异(P<0.01)。经免疫组化检测瘤组织中P21WAF1/CIP的表达发现VPA组也明显多于对照组统计学。5.VPA对pRb影响VPA体内用药应用Western-blot和免疫组化的方法检测pRb的变化,结果显示,pRb蛋白表达水平为(0.342±0.062)显著低于对照组的(0.813±0.042),具有明显统计学差异(P<0.01)。经免疫组化检测瘤组织中pRb的表达发现,VPA组明显少于对照组(P<0.01)。结论：HDAC抑制剂VPA体内用药能够抑制Kasumi-1细胞裸鼠移植瘤的生长,并且使细胞阻滞于G0/G1期。VPA诱导pP21WAF1/CIP表达的增加,pRb表达的减少。其机制可能是VPA通过诱导P21WAF1/CIP表达的增加,抑制细胞周期蛋白激酶的活性,pRb的维持在低磷酸化状态,使细胞周期组滞于Go/G1期。该研究为应用VPA临床治疗急性白血病提供了理论基础。
【作者】田霞；
【导师】郝长来；
【作者基本信息】承德医学院，肿瘤学，2011，硕士
【关键词】急性白血病；丙戊酸钠；p21WAF1/CIP；pRb；细胞周期；裸鼠移植瘤；

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