CHO DG44稳定细胞株无血清培养基的研发与优化

【摘要】单克隆抗体药物近年来已进入了高速发展时期,市场潜力十分巨大。而哺乳动物细胞大规模培养工艺的研发也成为我国抗体药物产业化的主要瓶颈之一。哺乳动物细胞大规模培养工艺的研发包括培养基的研发,细胞培养工艺的优化及生物反应器工艺放大等关键环节。由于传统的含血清培养基存在批间差大、潜在污染风险、不利于目的产物的分离纯化等问题,而商业化无血清培养基价格相对昂贵,且配方保密,不利于后续的培养工艺优化。因此,自主研发可支持细胞高密度生长与高表达量的无血清培养基,并进行相应的工艺优化与反应器放大,以满足大量表达单克隆抗体的需求,对于抗体药物的产业化来说至关重要。本研究从CHO细胞培养基库中,快速筛选得到支持CHODG44宿主细胞正常生长与转染的无血清基础培养基BM。在BM基础上,针对稳定表达E6F6嵌合抗体的CHODG44-10G11细胞株,通过硫酸葡聚糖、酵母水解物、柠檬酸铁及起始葡萄糖与氨代谢相关氨基酸浓度的调整,获得其个性化无血清培养基Opti-BM,可支持该细胞株批次培养密度超过7.0×106cells/mL,表达量超过70mg/L。研发得到相应的流加培养基FM与FMplus,两者结合使用可使CHODG44-10G11细胞株流加培养密度超过1.2×107cells/mL,培养时间延长至15天,抗体表达量超过150mg/L。最后,在BIOSTAT(?)B-DCUⅡ2L多联生物反应器上进行通气与搅拌方面工艺的初步摸索,在反应器上得到与摇瓶中一致的培养效果,实现了从摇瓶到反应器的工艺放大。本研究成功研发了针对CHODG44-10G11细胞株的无血清培养基,并开展了相应的细胞培养工艺优化、放大工作,初步建立了无血清培养基筛选与优化平台,为其他稳定细胞株无血清培养基的研发和优化积累经验,同时也为哺乳动物细胞大规模培养工艺的研发奠定基础。
【作者】郭纪元；
【导师】夏宁邵；
【作者基本信息】厦门大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】CHO细胞；无血清培养基；工艺优化；

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