Pokemon基因沉默促进肝癌细胞发生Fas-及线粒体途径介导的Caspase-依赖性细胞凋亡

【摘要】Pokemon是POK转录因子家族中的一员,具有原癌基因的活性,在多种肿瘤中均高表达,但其在肝癌细胞中的深入研究较少。我们实验室前期研究结果已经证实了Pokemon在肝细胞癌中高表达,并且通过AKT及ERK依赖性信号通路促进肝癌细胞的增殖和迁移。肿瘤的发生不仅与细胞的异常增殖和分化有关,也与细胞凋亡的异常相关。细胞凋亡有两条经典凋亡信号途径：一是死亡受体激活途径,另一条是线粒体-细胞色素C途径。两条通路的活化最终均可导致caspase通路的活化。本课题拟验证在第三代铂类化疗药物奥沙利铂的凋亡诱导下,Pokemon通过介导这两条凋亡信号途径从而参与肝细胞癌的发生发展。本课题研究中,我们首先采用短发夹RNA稳定转染HepG2和SMMC-7721两株肝癌细胞株,并筛选稳定沉默Pokemon表达的肝癌细胞株。通过TUNEL凋亡检测及流式凋亡检测证实在奥沙利铂的凋亡诱导下,沉默Pokemon之后肝癌细胞凋亡率明显增加。其次,我们进一步探讨Pokemon沉默促进细胞调亡相关分子信号通路。Westernblots结果显示沉默Pokemon表达的肝癌细胞中P53及其磷酸化水平明显增加,从而启动线粒体及死亡受体介导的凋亡途径。在HepG2肝癌细胞中,线粒体介导的凋亡途径中,Bcl-2凋亡家族中的成员(包括Bad、Bid、Bim、Puma)及AIF的表达增加,线粒体膜势能降低促进细胞色素C的释放。另外,在奥沙利铂的凋亡诱导下,沉默Pokemon表达的肝癌细胞中Fas受体、FADD及其下游的靶基因Caspase10及Caspase8被激活。Caspase8活性片段p18、p10的释放并进一步激活下游的的靶基因如Caspase9及Caspase3。再次,我们还探讨了Pokemon沉默对细胞周期的影响。流式细胞周期分析显示Pokemon基因沉默的HepG2在G1期分布增加,S期细胞分布减少；RT-PCR结果显示抑制细胞周期进展的细胞周期检控点基因在Pokemon低表达的细胞株中表达增加。综上,我们得出结论Pokemon通过死亡受体／线粒体介导的caspase依赖性通路抑制肝癌细胞凋亡,从而参与肝癌细胞内源、外源性细胞凋亡途径的调控；此外,Pokemon可能通过调控细胞周期检控点从而调节肝癌细胞周期的进展。因此,我们推测Pokemon可以作为人类癌症治疗中的新型化疗的靶基因。
【作者】张玉琴；
【导师】任建林；
【作者基本信息】厦门大学，内科学，2014，硕士
【关键词】Pokemon；肝细胞癌；凋亡；

【参考文献】
[1]张文敏.我国上市公司资产剥离动因与时机选择研究[D].山东农业大学,会计（专业学位）,2013,硕士.
[2]赵家伟.DFT计算在荧光分子印记纳米传感器中应用[D].南京医科大学,药物化学,2013,硕士.
[3]陈良伟,唐定兴,桂亮亮.氧化石墨吸附染料阳离子红X-GRL的性能研究[J].广东化工,2014,23:8-9+5.
[4]王晗深,邵江斌,邓云,刘运奎,许响生.钯/铜协同催化合成3,4-二氢香豆素衍生物[J].浙江化工,2012,01:22-24.
[5]王欢欢.俄语法律术语探究[D].黑龙江大学,俄语语言文学,2013,硕士.
[6]祝蕾.国际刑事法院被害人参诉研究[D].哈尔滨工业大学,国际法学,2014,硕士.
[7]潘小星.基于双折射的光学梳状滤波器研究[D].华中科技大学,光学工程,2013,硕士.
[8]张红亮.大型粮食企业全面预算编制管理系统[D].山东大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[9]李玲.增强型血流显像及频谱多普勒对高尿酸血症患者眼动脉的血流动力学研究[D].川北医学院,影像医学与核医学,2014,硕士.
[10]钱晓磊.高容量固定金属亲和膜色谱固定相的制备及其色谱性能[D].西北大学,分析化学,2013,硕士.
[11]李岳霖.可重构系统中基于MMU的软硬件通信机制的研究与实现[D].东北大学,计算机软件与理论,2009,硕士.
[12]胡益民.视觉拼接系统的研究与实现[D].西安科技大学,控制理论与控制工程,2014,硕士.
[13]刘杰,秦成岗,全志臻,刘道理,王秀玲,徐乐意,张忠涛.一种识别陆架坡折带“隐形构造”的时深转换方法[J].石油地球物理勘探,2013,01:128-133+1.
[14]赵欣.猪下肢软组织枪弹伤致肺远达效应的实验研究[D].第四军医大学,放射医学,2013,硕士.
[15]杨庆.滨州移动客户价值评估研究[D].山东大学,工业工程（专业学位）,2012,硕士.
[16]符丁元.基于FLUENT的涡轮增压器流场分析与优化[D].武汉理工大学,动力机械及工程,2013,硕士.
[17]白威峰.延胡索及其有效成分抗吗啡成瘾多巴胺系统作用机制研究和效果比较[D].遵义医学院,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[18]包娟.中国城镇居民主要食物消费的净碳排放估算与趋势分析[D].南京农业大学,农业经济管理,2012,硕士.
[19]谢启顺.水资源监测物联网平台的设计[D].哈尔滨工业大学,计算机技术,2014,硕士.
[20]郑惠伶.高校图书馆个性化信息推荐服务的研究与发展[J].河南图书馆学刊,2003,02:9-11.
[21]钟岚.洗钱犯罪问题研究[D].四川大学,刑法学,2003,硕士.
[22]彭晓梅.红外图像的超分辨率算法研究[D].南京理工大学,物理电子学,2013,硕士.
[23]薛旦.Allman Ⅲ度肩锁关节脱位 锁骨钩钢板固定与张力带固定的比较[D].浙江大学,外科学,2004,硕士.
[24]程林,常垚,刘满君,李伟,王志慧.基于伪时序状态转移抽样法评估含储能电力系统可靠性[J].电力系统自动化,2014,07:53-59.
[25]杨会军.特定网络出口信息监控系统研究与实现[D].四川大学,2004.
[26]王严.论中国共产党先进性建设的理论与实践[D].沈阳理工大学,马克思主义中国化研究,2012,硕士.
[27]冀坤.基于KP模型的磁控形状记忆合金执行器位移控制方法研究[D].吉林大学,控制理论与控制工程,2014,硕士.
[28]关丽丽.威胁性信息影响自我面孔优势效应的认知神经机制探究[D].西南大学,基础心理学,2013,硕士.
[29]邹火儿,韩国栋.机载低剖面卫通天线的发展与未来[J].现代雷达,2014,03:53-56+61.
[30]黄云鹤.当代视觉文化传播的问题与对策[D].吉林大学,社会学,2004,硕士.
[31]岳丽鑫.我国城市居民生活垃圾收费问题研究[D].河北经贸大学,产业经济学,2012,硕士.
[32]谢昕未.企业两化融合测评体系模型完善研究[J].仪器仪表与分析监测,2014,04:37-41.
[33]潘晓玥.微生物燃料电池用于餐厨废水前处理的效能研究[D].哈尔滨工业大学,环境科学与工程,2014,硕士.
[34]胡宪中.马钢原料场自动控制系统评介[J].冶金自动化,1997,03:18-21.
[35]符静.数据挖掘:情报学的发展[J].大学图书情报学刊,2005,04:44-45+55.
[36]程鑫鑫.直驱式伺服阀直线力马达性能测试系统研制[D].哈尔滨工业大学,机械制造及其自动化,2014,硕士.
[37]刘莉敏.并网光伏电站分布式数据采集监测系统的研究[D].中国科学院研究生院（电工研究所）,电力电子与电力传动,2004,硕士.
[38]杨远.基于神经网络的目标图像识别方法研究[D].南京航空航天大学,模式识别与智能系统,2004,硕士.
[39]王亮.通钢薄板坯连铸机二级计算机控制系统的设计与实现[D].东北大学,计算机技术,2011,硕士.
[40]彭丽莎,孙健栋,史艳云,朱光宁,李卫芬,余东游.三丁酸甘油酯对肉鸡生长性能、养分表观消化率、屠宰性能、肠道形态及微生物菌群的影响[J].动物营养学报,2014,02:466-473.
[41]郑卫.交通走廊对城镇形态演变的影响研究[D].浙江大学,城市规划与设计,2004,硕士.
[42]王洪森.基于竞争型ISPO双胞支持向量回归短期负荷预测[D].广东工业大学,电气工程（专业学位）,2014,硕士.
[43]王涛.菌式穿孔机及Accu－Roll型轧机阶梯形轧制过程控制系统[J].冶金自动化,1995,05:20-23.
[44]杨静.手性有机催化剂的结构、光谱性质以及催化不对称迈尔克加成反应机理的理论研究[D].曲阜师范大学,有机化学,2013,硕士.
[45]韩静玉.中铁隧道集团有限公司发展战略研究[D].西南交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[46]陈宝霞.血管内超声在冠心病介入性诊疗中的临床应用研究[D].青岛大学,内科学,2004,硕士.
[47]宋贞.低影响开发模式下的城市分流制雨水系统设计研究[D].重庆大学,市政工程,2014,硕士.
[48]白贺.邮储银行吉林省分行发展战略研究[D].吉林大学,工商管理,2012,硕士.
[49]秦凯.Android开源社区应用项目开发的效率研究[D].华南理工大学,项目管理,2012,硕士.
[50]王晓静.产品召回制度研究[D].河北经贸大学,经济法学,2012,硕士.