特殊生境真菌的分离、活性筛选和次级代谢产物研究

【摘要】天然产物一直是新药的重要来源,微生物是天然产物的重要来源。生活在特殊生境中的微生物经过生物进化形成一系列的生理适应机制,被认为具有产生新型活性物质和先导化合物的巨大潜能。本论文采用孟加拉红培养基和添加多菌灵、甲基托布津或腐霉利的LCA、PDA培养基作为分离培养基,进行红树林真菌的分离,共分离到红树林真菌116株。添加腐霉利的PDA培养基对红树林真菌有良好的分离效果。采用孟加拉红培养基、MediumA、PDA三种培养基和14℃、28℃两个温度梯度对南极土壤真菌进行分离,共分离得到南极真菌142株。大部分菌株分离自14℃,28℃只分离到7株真菌。采用PDA和GPY两种培养基,对178株特殊生境真菌进行固体发酵或液体发酵,以6株细菌和2株真菌作为指示菌,对发酵粗提物进行抗菌活性筛选。178株真菌中,有114株(64.8%)对8种指示菌中的一种或几种具有抑制作用。以9株肿瘤细胞株作为指示细胞,采用MTT法对部分发酵粗提物进行体外抗肿瘤活性测定,当粗提物样品浓度为50μg/mL时,有82株(46.1%)对9种指示细胞中的一种或几种有抑制作用(抑制率≥50%)。选取38株红树林真菌和37株南极真菌进行ITS基因序列分析,分析结果表明38株红树林真菌至少分布于20个不同的属中,而37株南极真菌至少分布于7个不同的属中,除青霉属(Penicillium)外,两种来源的真菌没有别的交叉种属,表现出各自独立的分类特异性。选取一株南极真菌和一株红树林内生真菌进行次级代谢产物的初步研究,共分离到5个化合物,其中1个为新化合物。从菌株N14-21(Pseudeurotiumsp.)中分离到3个化合物,其中化合物N14-21-1为pseurotinA,含有一个高度取代的螺环母核(1-oxa-7-azaspiro[4.4]non-2-ene-4,6-dionecore),化合物N14-21-3为吲哚乳酸甲酯,N14-21-4为吲哚乳酸。从菌株0221-39(Phomasp.)中分离到2个化合物,均为氯代二苯醚类化合物,其中化合物LLX-3为旧结构,而化合物LLX-1为新化合物。对5个化合物进行生物活性测定。结果显示化合物LLX-1具有微弱的抗菌活性,其对Staphlococcusaureus(S.a)、Bacillussubtilis(B.s)、Bacilluspumilus(B.p)和Aspergillusniger(A.n)的抑菌圈直径分别为7mm、6.5mm、7mm和6.5mm；化合物LLX-3具有中等强度的抗菌活性,其对S.a、B.s、B.p、Micrococcusluteus(M,l)和A.n的抑菌圈直径分别为9mm、1Omm、6.5mm和6.5mm。化合物N14-21-3、N14-21-4、LLX-1和LLX-3表现出弱的抗氧化活性。研究结果表明,红树林、南极等特殊生境中真菌资源丰富,大量菌株具有抗菌与体外抗肿瘤活性,并能产生结构新颖的次级代谢产物,是天然产物开发的重要来源。
【作者】连莲香；
【导师】郑忠辉；
【作者基本信息】厦门大学，微生物学，2014，硕士
【关键词】特殊生境真菌；生物活性；次级代谢产物；

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