红豆杉单组份多糖的分离，结构特性分析和对心肌细胞作用的研究

【摘要】由于植物多糖的来源广泛且无毒副作用,植物多糖的相关生物学研究逐渐受到关注,近年来,越来越多的植物多糖被分离、鉴定出来,而且研究发现这些植物多糖具有免疫调节、降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗病毒、抗凝血等生物学活性。本论文以珍贵的药用植物红豆杉的枝叶为样品,对其DEAESepharoseFastFlow离子交换色谱分离工艺进行了优化,确定了该工艺最终条件Tris-HCl缓冲液pH约为8.5,盐浓度为0.01M,梯度洗脱的盐浓度梯度选取0.1M、0.3M、0.5M(用平衡缓冲液配制),梯度洗脱流速为11.5mL/min。其次,对离子交换色谱分离得到的红豆杉多糖组份峰进行G-]00与G-10凝胶过滤分离纯化,最终得到重均分子量(MW)分别为135276Da、8862Da、73527Da的红豆杉多糖CPTC-1a、CPTC-1b与CPTC-2；而且为高纯度。这三个红豆杉多糖的红外光谱分析表明它们都在893cm-1处有吡喃环的β-型C-H变角振动的特征峰,即β-型糖苷键特征峰；而且单组份多糖CPTC-1b与单组份多糖CPTC-2在838cm-1处有吡喃环的α-型C-H变角振动的特征吸收峰,即α-型糖苷键特征峰；单组份多糖CPTC-2可能含有D-半乳糖；而单组份多糖CPTC-1a在838cm-1与957cm-1两个光波附近都不含有相应吸收峰。随后,本论文对红豆杉总糖、红豆杉多糖组份CPTC-1a、CPTC-1b、CPTC-2做了关于心肌细胞的MTS测试,结果表明红豆杉总糖在低浓度范围内对正常心肌细胞的增殖影响不大,当浓度大于125μg/mL时,对心肌细胞的增殖具有抑制作用。红豆杉多糖组份CPTC-2在大于8μg/mL的浓度范围内,对心肌细胞的增殖具有抑制作用。红豆杉多糖组份CPTC-1a和CPTC-1b不仅抑制心肌细胞增殖,而且对增殖的抑制作用具有浓度依赖性,对心肌细胞不具有保护作用。最后,利用流式细胞术分析了红豆杉总糖、红豆杉多糖组份CPTC-1a、CPTC-1b、CPTC-2对心肌细胞细胞周期的影响,表明这几种多糖都不会诱导凋亡,而且单组份多糖CPTC-2在低浓度条件下(<8μg/mL)对心肌细胞增殖无抑制作用；在100μg/mL的浓度时,红豆杉总糖可以使心肌细胞细胞周期变慢,对其具有保护作用,红豆杉多糖组份CPTC-1a、CPTC-1b、CPTC-2对心肌细胞可能具有协同机制。
【作者】王如涛；
【导师】吴绵斌；
【作者基本信息】浙江大学，生物化工，2013，硕士
【关键词】红豆杉多糖；色谱分离纯化；心肌细胞；MTS；流式细胞术；

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