肝星状细胞通过AKT信号通路促进小鼠肝癌细胞增殖

【摘要】背景目的原发性肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)作为一个世界性的医学难题,正以其高发病率、高转移侵袭力和高病死率时时刻刻威胁着人类健康。原发性肝细胞癌位居难治性恶性肿瘤前五,肝细胞癌发病率正逐年升高。肝癌微环境作为肿瘤免疫治疗的新方向,正逐渐走入人们的视野,在癌症发生发展中,肝癌微环境起了重要作用,通过采用各种手段影响肝癌微环境达到抑制肝癌发生发展的目的为原发性肝细胞癌的治疗提供了新的思路。越来越多的证据显示HCC的发生发展与其所处的肝癌微环境有着紧密联系。肝星状细胞(Hepaticstellatecells,HSCs)是间质细胞的一种,广泛存在于人体肝脏组织中,其在肝脏受到病理因素侵袭时会发生活化,参与各种病理过程,同时也参与组成肝癌的微环境,影响细胞外基质的代谢,与原发性肝癌的发生和进展密切相关。本实验旨在探讨活化肝星状细胞在体内实验和体外实验中对肝癌细胞增殖的影响及其产生作用的机制,为后续继续探讨HSCs在生物学、免疫学相关领域的作用,以及以HSCs为靶标的肝癌治疗方法提供实验及理论基础。实验方法选取生长情况相同的BALB/c雄性小鼠,并将其随机分为两组,并在两组小鼠肝包膜下分别注射小鼠肝癌细胞H22及H22+HSCs,构建小鼠原位肝癌移植模型,10天后处死荷瘤小鼠,收集对照组小鼠和共移植组小鼠的肝脏肿瘤组织。通过Westernblot技术检测两组小鼠肿瘤组织中ERK,AKT信号通路的表达情况。收集所培养的小鼠肝星状细胞的上清液,过滤纯化后制成条件培养基(Conditionedmedia,CM),在体外实验中检测HSCs对H22细胞增殖的影响及其与AKT信号通路之间的关系,并使用另一种小鼠成纤维细胞NIH3T3作为对照,最后,我们将用2种CM处理过的H22细胞分别接种到BALB/c雄性小鼠皮下,观察皮下肿瘤的生长情况。结果我们在小鼠体内肝癌模型中稳定的模拟了HSCs在体内对HCC的影响；在体内、体外实验中证实了接受HSCs处理的H22细胞的增殖能力均明显提高,差异具有统计学意义；同时,HSCs处理后的H22细胞AKT信号通路下游蛋白β-catenin-CyclinD2和GSK3β-CyclinD1的表达明显升高,在加入AKT信号通路特异性阻断药物LY294002后,H22细胞的AKT信号通路相关蛋白的表达与增殖能力均受到明显抑制。结论在体内外实验中证明,HSCs均能通过激活H22细胞AKT信号通路的方式促进H22细胞增殖；这种激活能力具有一定的特异性,这对于后续开展HSCs相关研究奠定了基础。
【作者】唐凯；
【导师】王效民；
【作者基本信息】厦门大学，外科学，2014，硕士
【关键词】肝星状细胞；肝癌；增殖；

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