紫花牡荆素诱导结肠癌干细胞样细胞凋亡作用的研究
【摘要】目的研究多甲氧基黄酮即紫花牡荆素(casticin，CAS)诱导源自人结肠癌HCT116细胞系肿瘤球形成细胞即结肠癌干细胞样细胞(coloncancerstemcelllikecells,CCSLCs)凋亡作用。探讨CAS诱导CCSLCs凋亡是否涉及其降低细胞Akt蛋白磷酸化水平作用。方法体外培养人结肠癌HCT-116细胞，干细胞条件培养基成球培养法分离和富集CCSLCs为受试对象。采用肿瘤球形成法检测不同浓度CAS对CCSLCs自我更新的影响。碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染色流式细胞术(flowcytometry,FCM)定量分析CAS对CCSLCs细胞凋亡率的影响。DNA琼脂糖凝胶电泳观察CAS对CCSLCs细胞DNA核小体间断裂的影响。荧光标记CD133抗体FCM分析CAS对CCSLCs干细胞标志物CD133表达的影响。最后，采用WesternBlot分析CAS对CCSLCs细胞Akt蛋白磷酸化水平的影响。结果体外培养和扩增人结肠癌HCT116细胞系细胞，采用干细胞条件培养基悬浮培养10天，细胞呈典型非粘附三维结肠癌肿瘤球体生长。肿瘤球形成法检测结果显示，在5.0～10.0μM浓度范围内，CAS以浓度依赖方式减少CCSLCs的肿瘤球数目(P＜0.05)。PI染色FCM分析结果表明CAS(5.0和10.0μM)增加CCSLCs凋亡率，呈浓度依赖趋势(P＜0.05)。CAS(5.0和10.0μM)处理CCSLCs24小时，DNA琼脂糖凝胶电泳呈现核小体间DNA断裂的梯形条带图谱。荧光标记CD133抗体FCM分析结果发现CAS以浓度依赖方式降低干细胞标志蛋白CD133表达(P＜0.05)。WesternBlot检测提示CAS抑制CCSLCs细胞Akt蛋白磷酸化，成浓度依赖性(P＜0.05)。结论1.CAS具有抑制CCSLCs自我更新及诱导CCSLCs凋亡作用。2.CAS可能通过抑制细胞Akt蛋白磷酸化进而抑制CCSLCs的肿瘤干细胞特性。
【作者】黄丽萍；
【导师】曾斌；
【作者基本信息】南华大学，临床医学、内科学，2012，硕士
【关键词】结肠癌；结肠癌干细胞样细胞；紫花牡荆素；细胞凋亡；自我更新；
【参考文献】
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