初生仔猪腹泻两种相关病毒分子流行病学调查及病毒分离和鉴定

【摘要】2011年底以来,我国很多省市初生仔猪出现腹泻性疾病。病猪以腹泻、脱水、厌食、迅速消瘦为主要特征。一些研究结果显示,其主要病原包括猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒和博卡病毒等。为了进一步研究该类疾病的病原流行毒株特性,本研究收集了2012年2月-2013年3月临床发病猪群发病哺乳仔猪肠道粪便样品,进行了猪流行性腹泻病毒(PEDV)和呼肠孤病毒(REOV)检测,明确了PEDV分子流行病学特性,并分离获得2株REOV,为该病防控奠定了一定基础。本研究主要研究内容如下：1.猪流行性腹泻病毒检测与S基因分子流行病学调查本研究收集自2012年2月至2013年3月,江苏、上海、浙江等省市31个规模猪场共102份腹泻病料样品,采用RT-PCR检测PEDV,结果为：猪场阳性率67.74%,病料样品阳性率46.08%。测序获得8个流行毒株S全基因序列。8个流行毒株D基因同源性为95.3%-99.5%,与欧洲代表毒株CV777基因的同源性为94.2%-95.7%；与DR13弱毒疫苗毒株比较,其同源性为94.0%-95.8%;与2006年国内流行的LZC毒株比较,其同源性为93.6%-95.1%。S基因遗传进化树分析表明,国内外PEDV毒株可分为3群,本研究7个流行毒株属于第2群,与中国使用的疫苗毒株存在较大差异,只有1个毒株属于第1群,与韩国疫苗毒株以及欧洲毒株CV777共同组成一个分支。研究结果表明,PEDV是目前中国仔猪腹泻的主要病原之一,中国PEDV流行毒株存在明显的基因变异。2.猪呼肠孤病毒的分离鉴定与仔猪致病性研究采用上述31个规模猪场102份腹泻病料样品,应用RT-PCR检测REOV,结果为：REOV的猪场阳性率为45.16%,病料样品阳性率为26.47%。选择2份病料无菌处理后接种Vero细胞,维持液中添加5μg/mL胰酶,传代2-3次,出现细胞病变,经过RT-PCR扩增和基因序列分析,病毒粒子负染电镜观察,证明其为REOV,命名为ZJ120101和AH120411毒株。将其分别口服接种2日龄商品健康仔猪,DMEM为对照组,5mL/头,接种后隔离饲养,人工哺乳,观察临床症状,接种后5-7天进行病理观察,并检测病原。结果为：两个病毒接种组仔猪接种后不同时间出现短时的食量下降,但均无腹泻症状,对照组仔猪未见明显发病症状。病理观察结果显示,AH120411毒株组小肠有轻微鼓气,组织病变观察,盲肠肠绒毛上皮细胞破损、脱落,其余肠段未见明显病理变化,ZJ120101和对照组仔猪没有明显的病理变化。肠道组织RT-PCR检测REOV结果为：ZJ120101组和AH120411组阳性,对照组为阴性。表明两个分离株有轻度致病作用,不同REOV毒株对仔猪致病性有所差异。
【作者】谈晨；
【导师】姜平；
【作者基本信息】南京农业大学，预防兽医学，2013，硕士
【关键词】猪流行性腹泻病毒；呼肠孤病毒；流行病学；分离鉴定；

【参考文献】
[1]陶菊良.五年一贯制高职数学中“学案导学”教学模式的探索研究[D].苏州大学,教育（专业学位）,2012,硕士.
[2]袁照.原子转移自由基聚合促进剂的研究[D].浙江工业大学,2013.
[3]曹雯婷.《英语（牛津上海版）》与《国际少儿汉语》对比研究[D].上海外国语大学,汉语国际教育,2013,硕士.
[4]刘君强,潘云鹤.基于混合投影的频繁模式挖掘算法[J].计算机研究与发展,2003,10:1488-1498.
[5]王益玲.基于DCS实时信息的智能故障诊断系统的研究与设计[D].南京工业大学,2003.
[6]焦君玲.论我国虚假广告的刑事规制[D].吉林大学,法律,2014,硕士.
[7]王菊平.矩阵Frobenius范数及Hadamard型行列式不等式问题研究[D].重庆大学,应用数学,2014,硕士.
[8]王玉宝.对设计单位知识管理的探讨[J].中国有色建设,2004,02:25-28.
[9]许家响.永磁偏置型故障限流器的磁建模与经济性研究[D].山东大学,高电压与绝缘技术,2013,硕士.
[10]刘滨锐.连续刚构桥常见病害分析及防治措施[D].重庆交通大学,桥梁与隧道工程,2012,硕士.
[11]彭少艾.《孟子》泰译研究[D].北京外国语大学,亚非语言文学,2013,硕士.
[12]肖建华,彭苏萍.论地震勘探中的断层反射解释问题[J].石油地球物理勘探,2002,04:322-327+432.
[13]陈晨.中美新闻报道中关于钓鱼岛争端的批评性语篇分析[D].华中科技大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[14]姜富华.水利农村节水大有可为[J].中国投资.2007(07)
[15]徐礼祯.永修县面向外出务工人员的职业技能培训发展对策研究[D].江西农业大学,农村与区域发展,2012,硕士.
[16]房秋兰,沙丽清.西双版纳热带季节雨林与橡胶林土壤呼吸[J].植物生态学报,2006,01:97-103.
[17]林為為.阮刻《毛詩注疏》校議[D].南京师范大学,中国古典文献学,2012,硕士.
[18]魏志敏.山莨菪碱对急性下壁心肌梗死合并糖尿病肾病患者直接PCI术后肾功能的保护效应[D].河北医科大学,内科学（专业学位）,2014,硕士.
[19]戴琨.基于PLC的数控滚压成型机控制系统研究[D].燕山大学,电力电子与电力传动,2012,硕士.
[20]任月芳.美国犹太族裔的政治参与概况及其文化根源探究[D].北京林业大学,英语语言文学,2013,硕士.
[21]啜韦伟.AMT选换档策略仿真验证研究[D].吉林大学,车辆工程,2012,硕士.
[22]李连.填石英微米晶粒电泳微柱的制备及其电泳分离[D].中国科学技术大学,2009.
[23]李德文.甘蓝型油菜隐性核不育亲本材料的遗传多样性分析及杂种优势研究[D].西南大学,作物遗传育种,2013,硕士.
[24]徐爽.我国民事诉讼行为保全制度研究[D].广东财经大学,诉讼法学,2014,硕士.
[25]王争庆.山西省R&D经费投入研究综述[D].山西大学,2004.
[26]杨君,黄芳芳,叶超凡,邵平,孙培龙.铜藻多糖的提取工艺优化及其保润性能[J].烟草科技,2013,04:37-41.
[27]李晓燕.SWMM模型在西北典型城镇雨洪系统规划中的应用[D].西安建筑科技大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[28]朱博融.基于GIS的延安市吴起县耕地后备资源开发潜力评价[D].长安大学,土地资源管理,2013,硕士.
[29]牛明伟.机电产品功能安全关键度研究[D].沈阳航空航天大学,安全技术及工程,2013,硕士.
[30]韩雪.论日军731部队的细菌战实验[D].黑龙江省社会科学院,专门史,2012,硕士.
[31]刘永刚,顾斌,张军.正挤横轧工艺参数对力与金属流变规律的影响[J].热加工工艺,2015,07:179-182+186.
[32]秦玉珍.手性光纤光栅偏振特性研究[D].华中科技大学,光电信息工程,2013,硕士.
[33]常笑丛.氧化物基复合电极材料在超级电容器中的应用研究[D].北京化工大学,2011.
[34]马永伟.熔盐反应法制备原位TiB_2/2024Al复合材料的研究[D].吉林大学,材料加工工程,2014,硕士.
[35]王盼.托吡酯和左乙拉西坦对学龄期癫痫患儿骨代谢的影响[D].河北医科大学,儿科学,2014,硕士.
[36]吕虎.活性氧参与背根神经节慢性压迫致镜像痛的外周机制研究[D].第二军医大学,麻醉学（专业学位）,2013,硕士.
[37]樊昌晋.杭州市都市圈发展策略探析[D].南京农业大学,公共管理,2012,硕士.
[38]许海霞,王耀南,袁小芳,朱江,周维.基于矢量差分的未标定摄像机P5P问题的求解[J].自动化学报,2009,08:1140-1144.
[39]记者刘霞.普通打印机首次打印出石墨烯薄膜电路[N].科技日报,2011-11-30001.
[40]李琪.我国农村民事纠纷解决中存在的问题及其对策[D].广西师范大学,法学理论,2013,硕士.
[41]张小倩.南沙参多糖的提取、降解优化及其单糖组成分析[D].河北大学,药物分析学,2014,硕士.
[42]周蕊.李权时统制经济思想研究[D].华中师范大学,社会史,2013,硕士.
[43]刘烨.变形镁合金表面防腐涂层裂纹产生后的耐蚀性研究[D].重庆大学,材料科学与工程,2014,硕士.
[44]朱辉杰.制造业信息化需求步入深水区存储业呼唤“活性”存储方案[J].CAD/CAM与制造业信息化,2005,11:82-83.
[45]黄炜.蓝藻水华显著相关因素识别、短期预测与区域合作治理研究[D].上海大学,管理科学与工程,2014,博士.
[46]边境.基于谐波平衡及Floquet理论的光伏逆变器的稳定性分析[D].北京交通大学,2015.
[47]范卫宁.信息栅格的功能和信息去耦合技术研究[D].沈阳理工大学,通信与信息系统,2012,硕士.
[48]楚天琳.产业技术联盟中政府作用机制研究[D].吉林大学,政治经济学,2013,硕士.
[49]赵黎君.当代文明背景下的民间信仰[D].广西民族大学,中国少数民族语言文学,2013,硕士.
[50]师展.基于预测控制算法的三容水箱液位控制[D].沈阳理工大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.