血管紧张肽Ⅱ对猪有腔卵泡与卵母细胞体外发育的影响

【摘要】哺乳动物卵巢上存在有大量的各级卵泡,但绝大部分卵泡与卵母细胞都在发育的不同阶段发生闭锁、凋亡和退化,只有极少卵泡能够最终发育至成熟并排卵。现代转基因技术、核移植技术等辅助生殖技术的快速发展,使得仅仅依靠雌性动物自然条件下产生的成熟卵子远不能满足人们对其数量的实际需求。因此,研究有腔卵泡与卵母细胞的体外发育,对于探索充分利用母畜遗传资源的有效途径,扩大优质卵母细胞来源等都具有重要意义。作为重要卵源的卵母细胞体外成熟技术目前仍存在一些问题,如卵母细胞核质成熟不同步、受精后发育能力降低等。血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)是哺乳动物卵巢组织中肾素-血管紧张肽系统(RAS)的主要活性物质之一,与其特异性受体结合不仅能够调节动物机体水盐代谢、血压及心血管系统的稳态,在动物卵巢中也发挥重要的调节作用。AngⅡ能够诱导家兔排卵、调节大鼠卵泡颗粒细胞凋亡及类固醇激素的合成、促进牛颗粒细胞环加氧酶2(PTGS2)基因的表达等,但有关AngⅡ在猪卵巢功能调节上的作用少有报道。本试验旨在研究AngⅡ对分离培养的猪有腔卵泡及卵母细胞体外发育的影响,以期了解AngⅡ的相关功能作用与机理,为猪卵泡与卵母细胞体外培养的新尝试提供参考。试验内容和结果如下：1.分离猪卵巢3-5mm直径健康、完整有腔卵泡,分为对照组、10-7mol/LAngⅡ剂量组、10-6mol/LAngⅡ剂量组和10-5mol/LAngⅡ剂量组进行卵泡体外培养。分别培养12h和24h后,分离收集各组卵泡颗粒细胞,流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡。结果表明,体外培养猪有腔卵泡12h,添加不同浓度的AngⅡ对颗粒细胞凋亡率无显著影响(P>0.05)；培养24h,仅10-7mol/LAngⅡ组的早期颗粒细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。2.猪3-5mm有腔卵泡分为对照组和AngⅡ组(10-7mol/L),体外培养24h后,检测两组卵母细胞透明带外径；FDA染色检查卵母细胞存活率。结果显示,猪有腔卵泡添加10-7mol/LAngⅡ体外培养24h,对卵泡卵母细胞透明带外径及卵母细胞的存活率均无显著的影响(P>0.05)；表明添加10-7mol/LAngⅡ并未改善猪完整卵泡的体外发育状况。3.从直径3-5mm健康有腔卵泡分离COC,对照组和AngⅡ组(10-7mol/L)COC体外培养24h,检测两组卵母细胞透明带外径；FDA染色检查卵母细胞存活率。结果显示,对照组和AngⅡ组的卵母细胞存活率分别为91.30%和93.33%,直径分别为140.70±2.36μm和138.00±1.09μm,但两组的卵母细胞直径与存活率差异不显著(P>0.05)。4.对照组和AngⅡ(10-7mol/L)组猪COC体外培养44-46h后,检测卵母细胞第一极体(pbI)排出率,统计卵母细胞体外成熟率。两组所获成熟卵母细胞分别进行体外受精,48h观察体外受精卵裂率。结果表明,添加10-7mol/LAngⅡ能较对照组显著提高猪卵母细胞体外成熟率(72.12%对82.21%；P<0.05)和体外受精卵裂率(71.43%对82.09%;P<0.05)。5.采集猪COC以对照组和AngⅡ(10-7mol/L)组进行体外培养,分别于培养0、4、8和12h采样,用实时荧光相对定量PCR检测COC中表皮调节因子(EREG)mRNA表达。结果显示,添加AngⅡ可显著增加COC培养4及8h的EREGmRNA(?)对表达量(P<0.05)。本试验表明,AngⅡ促进猪卵母细胞成熟与发育的作用,可能是通过诱导EREG的表达来实现的。
【作者】周伟；
【导师】芮荣；
【作者基本信息】南京农业大学，临床兽医学，2013，硕士
【关键词】血管紧张肽Ⅱ；猪；卵泡；卵丘-卵母细胞复合体；表皮调节因子；

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