应用多重PCR及实时荧光PCR方法鉴别食品中肉类成分

【摘要】肉与肉制品掺假是食品质量控制面临的重要挑战。食品中肉类成分的鉴别与分析技术已逐步形成了以核酸检测为基础的方法体系,其鉴别精度可达属与亚属水平。本研究主要利用多重PCR技术鉴别市场上常见的猪肉、牛肉、鸡肉、羊肉,另外,本研究还建立了添加有扩增内标的食品中猪肉和鸡肉成分的实时荧光PCR检测方法。具体研究和结果如下：1.建立快速可靠的用于食品中4种肉类成分(鸡、牛、羊、猪)快速鉴别的通用引物多重PCR(Universalprimers-multiplexPCR,UP-M-PCR)方法。基于动物线粒体细胞色素b基因的差异性位点,设计两组各5条长度不同的多重PCR引物,建立并优化多重PCR反应体系,通过电泳检测扩增产物分子量差异实现4种肉类的快速鉴别；应用优化的多重PCR方法对80份市售食品样本进行盲样检测,验证鉴别方法的准确性。结果显示,在优化的反应条件下,选择特异性高、序列较长的多重PCR引物可有效地进行食品中猪、牛、羊、鸡源性成分的快速鉴定,检测灵敏度达到皮克级DNA；对市售食品样本的鉴别验证了方法的实用价值。该方法精确稳定,可用于食品中多种动物源性成分的快速鉴别。2.建立含有扩增内标(IAC,Internalamplificationcontrol)的用于食品中猪肉和鸡肉成分鉴别的Taqman探针实时荧光PCR检测方法。分别基于猪的betaactin基因和鸡的transforminggrowthfactor基因设计引物和探针；考察引物和探针的特异性与灵敏度；设计并构建扩增内标,优化体系中扩增内标浓度,建立内标实时荧光PCR系；使用该检测体系对生肉和熟肉来源的DNA模板进行检测评价；应用该体系对市售38份样本进行盲样检测。结果显示,含有扩增内标的Taqman探针实时荧光PCR体系能有效地进行食品中猪肉和鸡肉成分的快速检测,非目标物种在40个循环内均无出现扩增,检出限均为0.5ngDNA;该体系对生肉和熟肉来源的DNA模板检测无显著差异；对市售食品样本的鉴别验证了方法的实用价值。因此,该方法准确稳定,可用于食品中猪肉和鸡肉成分的快速检测。
【作者】何玮玲；
【导师】黄明；
【作者基本信息】南京农业大学，食品科学，2013，硕士
【关键词】肉类成分；多重PCR；实时荧光PCR；鉴别；

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