通过两种不同载体表达的猪细小病毒VP2生物学特性的比较研究

【摘要】猪细小病毒（Porcineparvovirus,PPV）是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一。PPV感染呈世界性分布，在许多地方已经成为地方性疾病，给养猪业造成严重的经济损失。PPV属于细小病毒科细小病毒属，为单股负链DNA病毒，无囊膜，衣壳蛋白包括VP1、VP2和VP3，其中VP2为主要的结构蛋白。VP2决定着PPV的组织嗜性、毒力和血凝活性，并且能够诱导机体产生中和抗体。VP2在杆状病毒表达载体系统（BEVS）中能够自我组装成病毒样颗粒（VLPs），是亚单位疫苗研究的首选蛋白。为评价VP2作为亚单位疫苗的潜力，本研究分别利用BEVS和pET表达系统表达VP2，比较其反应原性和免疫原性的差异。应用电子显微镜观察两种VP2的形态，发现BEVS表达的VP2能够自我组装成VLPs，而pET表达系统表达的VP2不能组装成VLPs。westernblot试验发现这两种VP2均能够与PPV阳性血清发生特异性反应。血凝试验（HA）发现BEVS表达的VP2具有血凝活性，血凝效价为210，而pET表达系统表达的VP2无血凝活性。将两种VP2作为免疫试剂分别免疫豚鼠，将豚鼠随机分Ⅰ组（灭活疫苗1.5mL/只）、Ⅱ组（灭活疫苗0.5mL/只）、Ⅲ组（VLPs300μg/只）、Ⅳ组（VLPs100μg/只）、Ⅴ组（VP2300μg/只）、Ⅵ组（VP2100μg/只）和Ⅶ组（非免疫）共七组。每周采血应用血凝抑制试验（HI）测定血清中PPV抗体效价。Ⅲ组和Ⅳ组的抗体水平相近，高于Ⅱ组，但是低于Ⅰ组。Ⅴ组和Ⅵ组的抗体水平最低。Ⅰ组、Ⅲ组和Ⅴ组的抗体水平分别高于Ⅱ组、Ⅳ组和Ⅵ组。攻毒后，MTT淋巴细胞增殖试验结果表明，各种免疫试剂均能不同程度地诱导产生细胞免疫应答。纳米PCR检测结果表明仅有对照组豚鼠内脏中检出PPV。可见BEVS表达的VP2反应原性和免疫原性较好，适用于亚单位疫苗的研制。
【作者】崔宇超；
【导师】崔尚金；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，预防兽医学，2014，硕士
【关键词】猪细小病毒；VP2；杆状病毒表达载体系统；pET表达系统；生物学特性；

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