羊口疮病毒的分离鉴定及B2L囊膜蛋白单克隆抗体的制备

【摘要】羊传染性脓疱病（Orf）由羊口疮病毒（OrfVirus，ORFV）引起，是世界范围内危害养羊业发展的人畜共患疾病之一。ORFV不仅能引起小型反刍动物和部分野生动物感染，还可能污染环境，造成与受污染环境密切接触的人员感染发病。目前，一般采用ORFV灭活苗或弱毒苗接种，但效果并不理想，有时会出现免疫羊感染ORFV的情况。由于细胞免疫应答是ORFV引起宿主的主要免疫类型，因此，研制T细胞表位和B细胞表位组合的多表位基因工程疫苗，能够强化细胞免疫途径以及激活高效的体液免疫应答途径，对Orf的防控将有重要的应用价值。本研究在黑龙江大庆地区发现Orf疑似病例，通过病原分离、病毒形态学观察、间接免疫荧光检测（IFA）、DNA序列和氨基酸序列比对、家兔和小鼠的感染试验以及回归动物试验等，最终确定获得一株ORFV，命名为OV/HLJ/04。流行株之间遗传关系分析证明OV/HLJ/04与2011年山西株（HQ221964）之间遗传关系密切。此外，基于B2L基因的系统发育进化树表明OV/HLJ/04应当归类于基因Ⅲ型ORFV。继而，本研究选择ORFV的囊膜蛋白B2L基因为靶基因，构建原核表达载体，将表达产物纯化后用于免疫4~6周龄的雌性BALB/c小鼠，制备单克隆抗体。通过杂交瘤技术获得了3株能够稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株，其中2E4具备中和ORFV毒力的能力。抗体的间接ELISA试验和WesternBlot证明，2E4能够特异性识别B2L蛋白，显示出良好的抗体—抗原特异性。B2L蛋白单抗的制备、生物学特性分析和单抗腹水制备，为ORFV的实验室诊断提供了更为便捷的方法。
【作者】谭强；
【导师】崔玉东；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，预防兽医学，2014，硕士
【关键词】羊口疮病毒；病毒分离鉴定；囊膜蛋白；单克隆抗体；

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