VC、VE及Gln复合营养素对大鼠抗冷应激能力的影响及最佳剂量的筛选

【摘要】本试验旨在分析低温条件下，日粮中联合添加不同水平的VC、VE以及Gln复合营养素在大鼠抗冷应激中的作用，确定其适宜添加量，对新型饲料复合营养素的研发提供基础数据，为更深层次的揭示寒冷环境对动物应激反应和对抗低温损伤提供更多的理论依据。试验对象选取12周龄左右，体质量（200±10）g清洁级健康雌性Wistar大鼠110只，随机分为冷应激对照组、常温对照组和9个复合营养素试验组，每组10只，根据L9（34）正交试验设计表确定每组灌胃剂量。正常饲养温度设置为21±0.05℃，湿度40±0.1％，采食饮水不限。预饲一周后对大鼠进行灌胃，试验组为VC、VE、Gln复合营养素，两对照组灌等体积水。伺服一周后利用人工智能气候室将温度迅速降至11±1℃，24h后腹主动脉采血，分离血清和淋巴细胞。采用双抗夹心Elisa方法检测血清激素去甲肾上腺素（NE）、血清生化指标（SOD、GSH-PX、MDA、T-AOC）和血清免疫指标（IgA、IgG、IgM、IL-2）含量的变化；采用q-PCR及WesternBlotting方法检测HSP70mRNA及蛋白表达水平的变化；采用主成分分析（PCA）和综合平衡法对各指标数据进行分析筛选，确定复合营养素的最佳配伍剂量。试验结果如下：（1）VC、VE及Gln复合营养素对冷应激大鼠血清NE和抗氧化指标的影响经24h低温应激后大鼠血清NE含量普遍上升，即冷应激组与常温组相比差异极显著（p<0.01），试验组与对照组相比，第6组与常温组无明显差异性变化，其他试验组与冷应激组之间差异极显著（p<0.01）。血清氧化还原指标SOD浓度变化：冷应激组与常温组相比，含量极显著下降（p<0.01），试验组与冷应激组相比普遍有上升趋势；其中，2、3、8组无明显差异变化，4和7、5和6组间也无显著性差异。血清抗氧化指标GSH-PX浓度变化：冷应激组与常温组相比，含量极显著下降（p<0.01）；试验组与冷应激组相比普遍有升高趋势，其中，8组、9组与常温对照组差异显著（p<0.05）。血清总抗氧化能力T-AOC浓度变化：冷应激组与常温组相比，血清含量极显著下降（p<0.01）；试验组与冷应激组相比，血清浓度均有上升趋势；其中，1、2、3、4、5、8、9组间不存在差异，与冷应激对照组相比差异显著（p<0.05）。血清氧化还原指标MDA浓度变化：冷应激组与常温组相比，含量极显著升高（p<0.01），试验组与冷应激组相比，血清浓度有下降趋势；第5组与常温对照组无特异性差异，其余各组与冷应激对照组差异极显著（p<0.01）。（2）VC、VE及Gln复合营养素对冷应激大鼠血清免疫指标的影响细胞因子IL-2血清含量：冷应激组与常温组相比，血清浓度含量极显著降低（p<0.01），试验组与冷应激组相比，血清浓度普遍有上升趋势；其中，第2组与冷应激组不存在差异显著性，第6组与冷应激对照组存在显著性差异（p<0.05）。血清免疫球蛋白IgA浓度变化：冷应激组与常温组以及各试验组相比，含量差异极显著下降（p<0.01），试验组与冷应激组相比，血清免疫球蛋白浓度普遍有上升趋势；其中，第6、7组无明显差异，1、3、4组有显著性差异，其他各组间存在极显著性变化（p<0.05）；关于血清IgG含量，第8组与常温对照组无特异性差异，3与5组差异显著（p<0.05），6与7组差异不显著，其他各组含量差异极显著不同；关于血清IgM的含量：4、6与冷应激组相比，血清含量无明显差异性，1、7、8组与冷应激组比差异显著性升高（p<0.05），3、5与常温组相比，血清含量呈现差异性显著变化（p<0.05）。（3）VC、VE及Gln复合营养素对冷应激大鼠淋巴细胞HSP70表达的影响HSP70q-PCR检测结果：冷应激对照组HSP70mRNA转录量与常温组相比极显著升高（p<0.01），试验组与冷应激组相比，有下降趋势。其中，6、9、8组与常温对照组相比无明显变化，其他各组与常温对照组相比差异极显著（p<0.05）。经过冷应激后，HSP70表达变化为：冷应激对照组与常温对照组相比表达量极显著升高（P<0.01），与q-PCR检测结果相一致，其中，8、9组与常温对照组相比呈显著性差异变化（P<0.05），其他组与常温对照组相比差异极显著（P<0.01），降低趋势明显。（4）抗应激复合添加剂最优配伍剂量的筛选采用主成分分析（PCA）与综合平衡法相结合，利用SPSS19.0，经过对11项指标原始数据进行PCA分析与综合平衡法验证，最终确定复合营养素最佳剂量：VC:300mg/kg，VE:100mg/kg，Gln:2500mg/kg。结论如下：抗冷应激复合营养素对降低大鼠冷应激敏感性、抵抗冷应激作用具有较理想的保护效果。四种添加剂饲料添加的最佳配伍剂量为VC:300mg/kg，VE:100mg/kg，Gln:2500mg/kg。
【作者】刘丛；
【导师】李士泽；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，兽医，2014，硕士
【关键词】冷应激；复合营养素；大鼠；主成分分析；

【参考文献】
[1]高勃.图和有向图的边连通与点连通性研究[D].山东师范大学,应用数学,2013,硕士.
[2]周畅.在役桥梁状态评估和养护管理方法的研究[D].浙江大学,2008.
[3]金　杰1,王丽叶1,黄晓林1,孟祥宇1,陈蕴博2,高克玮3.复合离子束制备氮化物多层膜的抗冲蚀性能*[J].中国表面工程.
[4]王倩.大气CO_2遥感探测仪器的关键指标和敏感性分析研究[D].中国气象科学研究院,自然地理学,2014,硕士.
[5]马辰.黄单胞菌（Xanthomonas campestris pv.campestris）葡萄糖转运系统的改造及其应用研究[D].上海交通大学,微生物学,2013,硕士.
[6]李丹霞.杭白菊不同栽培类型遗传差异性、稳定性和质量评价研究[D].南京农业大学,中药学,2013,硕士.
[7]荣卫鹏.EH-4大地电磁法在A盆地铀矿勘察中的应用研究[D].成都理工大学,固体地球物理,2013,硕士.
[8]尹敬敬.建筑安装工程人工单价构成及计算研究[D].北京交通大学,2014.
[9]张海俊.基于RFID烟花爆竹批发企业信息系统[D].山东大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[10]王峰.社区教育数字化学习资源应用研究[D].上海师范大学,成人教育学,2013,硕士.
[11]李顺.HCNG发动机怠速性能研究与数值模拟[D].清华大学,动力工程及工程热物理,2013,硕士.
[12]汤鹏.类石墨烯二硫化钼的制备及其光电器件研究[D].南京邮电大学,光学,2013,硕士.
[13]刘丽.“十一五”以来我国报纸肺癌报道的内容评估[D].吉林大学,新闻学,2013,硕士.
[14]陆美芳,闫晓丽,王一方,季雪婧.农业科研事业单位实施绩效工资制度的若干思考[J].经济师,2015,01:82-83.
[15]曾海颖.客户关系管理中的数据挖掘[D].南京航空航天大学,2003.
[16]曹欣然.燃煤电厂脱碳技术模拟优化及CO_2捕获就绪电厂效能分析[D].北京交通大学,2014.
[17]赵刚.垄沟筑垱机工作参数的试验研究[D].东北农业大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[18]谭伟.基于组件GIS的造林决策支持模型的研究[D].北京林业大学,2005.
[19]李君科.轮撬式越障机器人设计与分析[D].西南大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[20]陈帆,曾振柄.几何定理自动证明的一种数值测试辅助算法[J].计算机应用,2002,10:21-23.
[21]师成虎.加速失效模型及其在医学研究中的应用[D].山西医科大学,流行病与卫生统计学,2003,硕士.
[22]赵予兵.人力资源开发的现状、问题及对策研究—以吉化公司为例[D].吉林大学,行政管理,2004,硕士.
[23]刘竹,周卫华.变频器在转炉倾动抱闸控制系统中的应用[J].冶金自动化,2010,05:65-68.
[24]马颖亿.1990年以来江苏省人口空间格局与演化机理研究[D].南京师范大学,人文地理学,2012,硕士.
[25]李身锋.纳米金原位合成生物传感器的构建及其对慢性粒细胞白血病BCR/ABL融合基因检测的研究[D].重庆医科大学,2012.
[26]郑颖楠,魏艳君,任少林.小型线材轧钢生产自动化技术[J].冶金自动化,1998,06:7-9+19.
[27]柴平瑄,程时端.入侵检测技术分析[J].计算机工程与应用,2003,14:164-166.
[28]刘俊萍.基于AHP和GIS的海塘工程安全评价研究[J].浙江工业大学学报,2014,04:383-387.
[29]胡坚.NLRP3炎症小体在咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样模型中的表达及芥菜籽对其影响的研究[D].中国人民解放军医学院,皮肤病与性病学,2013,硕士.
[30]张学君,钟建华,刘刚,郭万有.热轧卷板机成形辊压紧力的确定[J].一重技术.1999(01)
[31]唐珍珍.论约翰·厄普代克《夫妇们》中的享乐主义思想[D].湖南科技大学,英语语言文学,2013,硕士.
[32]黄宜宝.马克思主义理论指导下的村民自治制度研究[D].安徽农业大学,马克思主义基本原理,2012,硕士.
[33]周军.生猪养殖规模与主产地移动、温室气体排放研究[D].南京农业大学,农业经济管理,2012,硕士.
[34]任仁仁.北宋嘉祐、治平年間理財思潮探析[D].华东师范大学,中國古典文獻學,2013,硕士.
[35]李盛韬,余智华,程学旗,白硕.Web信息采集研究进展[J].计算机科学,2003,02:151-157+171.
[36]王理厦.分布式发电单元储能定容研究[D].华南理工大学,电气工程,2012,硕士.
[37]邹迪.基于状态监测信息的风力发电机故障预警与短期可靠性评估研究[D].重庆大学,电气工程,2014,硕士.
[38]王旭琴.比较文学与中学语文外国文学教学研究[D].山西师范大学,比较文学与世界文学,2014,硕士.
[39]钟琳.青春期亲子间冲突性话语语用分析[D].山东师范大学,英语语言文学,2013,硕士.
[40]范增辉,欧阳诚,刘树根,蒲莉萍,韩小俊,孙玮.塔里木盆地西南部黄土塬地区地震采集技术[J].石油地球物理勘探,2014,04:627-633+1.
[41]唐珍芳.生物循环过滤工艺净化城市景观湖水试验研究[D].河北工程大学,市政工程,2012,硕士.
[42]童翾.我国部分地区HIV-1传播耐药分析及深度测序对继发性耐药的研究[D].北京协和医学院,临床医学,2014,博士.
[43]李若萱.环圈式扩弓矫治器扩弓疗效的实验研究[D].第四军医大学,口腔临床医学,2004,硕士.
[44]李怀祖.“不当出生”损害赔偿研究[D].中国社会科学院研究生院,民法学（专业学位）,2014,硕士.
[45]朱灿群.奉节县黄莲树滑坡稳定性及治理分析[D].重庆大学,建筑与土木工程（专业学位）,2014,硕士.
[46]邓粉亚.小学生在美术学习中的语言智能现状研究[D].南京师范大学,美术教育研究,2012,硕士.
[47]孙中悦.车辆路径问题的仿真优化方法研究[D].北京交通大学,2012.
[48]徐静.基于区间直觉模糊集的动态多属性决策方法研究[D].西安电子科技大学,运筹学与控制论,2012,硕士.
[49]王端.双层厢式自动装卸车的研制及动态特性研究[D].重庆大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[50]王凤娟.JEV多表位基因重组痘苗病毒安卡拉株（rMVA-mep）及其免疫效果评价[D].南京农业大学,预防兽医学,2011,硕士.