牛轮状病毒固相竞争ELISA及双抗体夹心ELISA方法的建立与应用

【摘要】牛轮状病毒（Bovinerotavirus，BRV）是引起新生犊牛腹泻的主要病原之一，感染多发生在1月龄以内，引起腹泻的严重程度差别很大，包括无症状感染、温和的自限性腹泻以及伴有严重脱水和电解质失衡的重度腹泻。危害主要表现在饲料利用率下降、治疗成本增加、生长率的降低以及不同程度的死亡而造成的经济损失。为建立BRV感染牛血清抗体的固相竞争ELISA（SPCE）检测方法，本研究选取G6/G10共享型单克隆抗体（MAb）1F7为检测抗体，兔抗VP6多克隆抗体为包被抗体。结果表明：SPCE检测血清最佳稀释倍数为1:8，PI=40.32为反应的临界值。敏感性试验检测190份BRV抗体阳性血清，其中184份为阳性，敏感性为96.8%。SPCE与病毒中和试验（VNT）、间接ELISA、商品化试剂盒的符合率均高于97%。批内和批间重复试验的变异系数均小于9%，表明所建立的SPCE有良好的重复性。统计每次检测的阴、阳性对照血清的PI值，绘制质控图，监测试验中每次血清检测的准确性和可控性，结果表明检测结果准确可控。该方法的建立为BRV抗体的检测提供了有效的技术手段。为建立BRV的快速检测方法，本研究以兔抗VP6多克隆抗体为包被抗体、针对VP7蛋白的G6/G10型MAb1F7为检测抗体。敏感性试验结果显示，建立的ELISA方法最低可以检出104.2TCID50病毒。特异性试验结果显示，该ELISA方法与牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒、牛细小病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛腹泻/粘膜病病毒以及阿卡斑病病毒均无交叉反应。组内和组间的变异系数均小于10%，表明重复性良好。符合性试验结果表明，该ELISA方法与RT-PCR方法、商品化试剂盒的符合率达100%。本研究建立的双抗体夹心ELISA方法可用于BRV的规模化检测，为BRV的病原流行病学调查提供了技术手段。
【作者】张佳昕；
【导师】崔玉东；于力；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，兽医学，2014，硕士
【关键词】固相竞争ELISA；BRV抗体检测；双抗体夹心ELISA；BRV抗原检测；

【参考文献】
[1]张晓瑛.班干部轮换制研究[D].内蒙古师范大学,教育管理（专业学位）,2012,硕士.
[2]李欣.数据挖掘在寿险防欺诈中的应用[D].河北大学,电子与通信,2013,硕士.
[3]冯宁宁.姜树民教授治疗胃癌癌前病变经验总结[D].辽宁中医药大学,中医内科学（专业学位）,2012,硕士.
[4]崔文宇.有关中国光瓶酒包装设计的研究[J].艺术科技,2013,10:194.
[5]张秀菊.时代自觉与马克思主义中国化研究[D].长春工业大学,马克思主义中国化研究,2013,硕士.
[6]王力.灌注桩钻孔泥浆的高效脱水技术研究[D].浙江工业大学,化工过程机械,2012,硕士.
[7]崔小文.因地制宜开发研究型课程及课程资源[D].陕西师范大学,2002.
[8]李瑾.光波导光学相控阵光束分析与优化[D].西安电子科技大学,光学,2012,硕士.
[9]张虹.骨肉瘤大剂量化疗后重度骨髓抑制的临床研究[D].山东大学,外科学（专业学位）,2013,硕士.
[10]吴锦前.“私人助理”应用一二三(3)[J].中国传媒科技.2002(04)
[11]刘红.大规模软件可信度量参数的研究与分析[D].东北大学,计算机系统结构,2010,硕士.
[12]宋静.IGF-1和FGF-2对牙周膜干细胞向成骨细胞分化的影响[D].兰州大学,口腔临床医学,2013,硕士.
[13]丁宝苍,李少远,席裕庚.基于Popov定理的输入非线性广义预测控制系统的稳定性分析(英文)[J].自动化学报,2003,04:582-588.
[14]王星.基于双目视觉的人腿检测关键技术的研究[D].浙江理工大学,计算机技术（专业学位）,2012,硕士.
[15]李隽怡.基于空间分析法的航线检测与航路监控[D].大连海事大学,航海科学与技术,2013,硕士.
[16]边茜.面向期刊论文的知识挖掘研究[D].河北大学,计算机应用技术,2014,硕士.
[17]李涛.基于WSN的智能气象传感器设计及应用[D].苏州大学,计算机应用技术,2014,硕士.
[18]任可.不同剂量辛伐他汀对慢性心力衰竭家兔CTGF、OPG的影响[D].新乡医学院,内科学,2012,硕士.
[19]林潇琪.976例少数民族中学生学习压力问卷编制及相关研究[D].贵州师范大学,应用心理学,2014,硕士.
[20]李坤.海因里希·伯尔小说《九点半弹子戏》中的家庭记忆问题[D].四川外国语大学,德语语言文学,2013,硕士.
[21]何昱雯.芍药甘草汤对子宫腺肌病细胞ER/MAPK通路的干预机制研究[D].广州中医药大学,中医学（专业学位）,2013,硕士.
[22]鲍而文.食管癌分次放疗中不确定性因素的影响及其控制研究[D].苏州大学,临床医学（专业学位）,2013,硕士.
[23]李祥.基于使用实态调查的旅游背景下土楼公共空间研究[D].华侨大学,建筑学（专业学位）,2014,硕士.
[24]王冠齐.饶余燕钢琴音乐作品初探[D].西安音乐学院,钢琴演奏,2014,硕士.
[25]程耀清,蔡冬梅.地震相技术应用实例[J].石油地球物理勘探,2007,S1:79-82+140+9.
[26]耿实.全自动高炉紧急拨风系统[J].冶金自动化,1993,01:19-22+60.
[27]李雪.墨西哥湾漏油和渤海湾漏油事件语篇的批评性对比分析[D].吉林大学,英语语言文学,2013,硕士.
[28]张贺.AQP2与AQP5在小鼠生殖系统水平衡中的作用[D].西北农林科技大学,临床兽医学,2014,博士.
[29]梁亮.中国工商银行M分行信贷风险管理研究[D].兰州大学,工商管理,2012,硕士.
[30]崔冠男.我国光伏产业市场绩效研究[D].山东大学,产业经济学,2013,硕士.
[31]陈超.基于互联网的二元实体关系抽取研究[D].华东师范大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[32]崔焕星.核废料固化桶数控转运系统的关键技术研究[D].西南交通大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[33]袁稳.辣椒细胞质雄性不育相关基因的克隆及表达研究[D].南京农业大学,蔬菜学,2012,硕士.
[34]欧文珍.体育教育专业本科生教育实习现状与对策研究[D].湖南师范大学,体育教学（专业学位）,2013,硕士.
[35]王卒成.中国共产党执政方式改革研究[D].东北大学,马克思主义中国化研究,2009,硕士.
[36]焦世东.再聪明的脑壳也要信息化[N].中国计算机报,2003-06-02B13.
[37]李丁.苏里格气田致密砂岩储层流动单元研究[D].吉林大学,地球探测与信息技术,2014,硕士.
[38]徐南平,高从堦,金万勤.中国膜科学技术的创新进展[J].中国工程科学,2014,12:4-9+2.
[39]范谷雨.安徽省大中型工业企业技术创新能力研究[D].安徽大学,产业经济学,2014,硕士.
[40]吴丹.盲校中学数学课堂循环导学方法的研究与应用[D].华中师范大学,学科教学,2014,硕士.
[41]徐晓云.卫星轨道姿态动力学仿真软件平台研究与开发[D].清华大学,一般力学与力学基础,2002,硕士.
[42]周峤.基于移动GIS技术的管道智能巡检系统开发与研究[D].东北石油大学,油气储运工程,2013,硕士.
[43]蔡迪.TBCC超级燃烧室掺混技术研究[D].南京航空航天大学,航空宇航推进理论与工程,2014,硕士.
[44]马海兵,张成洪,张锦,胡运发.基于IS~±树模型的频繁模式挖掘[J].计算机研究与发展,2005,04:588-593.
[45]沈睿芳,时希杰,吴育华.基于数据仓库的数据预处理过程模型[J].计算机与数字工程,2005,09:73-74+128.
[46]郑杨.EAP教学研究对我国大学英语教学的启示[D].哈尔滨工业大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[47]张玮.SiC高温热解制备石墨烯及其拉曼表征[D].西安电子科技大学,2013.
[48]钟百书,杨根仁,张胜,汪启东,许顺良,阮凌翔.自身免疫性胰腺炎患者胰腺内外CT和MRI表现[J].浙江大学学报(医学版),2014,01:94-100.
[49]古旭.上海城市公园游客结构、行为与需求特征及其影响因素研究[D].华东师范大学,生态学,2013,硕士.
[50]徐亚凤.基于Web的高校网络办公系统的设计与实现[D].黑龙江大学,计算机技术,2012,硕士.