pMGA1.2与ApoA-Ⅰ相互作用的功能结构域研究

pMGA1.2与ApoA-Ⅰ相互作用的功能结构域研究

作者:师大云端图书馆 时间:2016-09-29 分类:硕士论文 喜欢:1998
师大云端图书馆

【摘要】鸡毒支原体(Mycoplasmagallisepticum,MG)能够引起鸡的慢性呼吸道疾病(Chronicrespiratorydisease,CRD),该病分布广泛,给世界各地养鸡业带来巨大的经济损失。研究表明,MG主要通过表面的黏附蛋白pMGA(ProteinMycoplasmaGallisepticumAdheA-In)与机体的受体结合而产生致病作用。课题组前期研究发现载脂蛋白ApoA-I是pMGA1.2的相互作用蛋白。本研究主要对pMGA1.2与ApoA-I相互作用的的功能结构域进行了研究,为进一步研究pMGA1.2与ApoA-I相互作用的的功能位点奠定了基础,主要研究成果如下:1.生物信息学预测pMGA1.2共有4个功能结构域,分别位于25-77位、105-166位氨基酸之间的两个FIVAR(UncharacterisedSugar-bindingDomain)结构域;位于171-596位氨基酸之间的Myco-haema(MycoplasmahaemagglutininDomain)结构域,位于491-595位氨基酸之间的Galactose-bindingdomain-like结构域。2.根据预测的功能结构域将pMGA1.2分为4段,片段1:25-77aa→73-231bp,即159bp;片段2:105-166aa→313-498bp,即186bp;片段3:171-491aa→511-1473bp,即963bp;片段4:491-595aa→1471-1785bp,即315bp。成功克隆了含有pMGA1.2功能结构域的4个片段pMGA1.2-N(N=1,2,3,4)。3.成功构建了原核表达质粒pGEX-KG-pMGAl.2-1和pGEX-KG-pMGA1.2-2。将原核表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG浓度1mmol/L,22℃诱导8h,获得了pMGAl.2-1和pMGAl.2-2的融合蛋白;经GST亲和层析柱纯化,获得了纯度为95%的pMGAl.2-1和pMGAl.2-2的融合蛋白。Westernblot研究表明,pMGAl.2-1和pMGAl.2-2融合蛋白有明显显色带,pGEX-KG空载体对照无显色带,说明获得的pMGAl.2-1和pMGAl.2-2融合蛋白具有良好的免疫学活性。病毒铺覆蛋白印迹(VOPBA)结果显示,pMGAl.2-1和pMGAl.2-2融合蛋白有明显显色带;pGEX-KG空载体对照无显色带,说明pMGAl.2-1和pMGAl.2-2融合蛋白能与纯化的ApoA-I融合蛋白发生特异性反应,说明pMGAl.2-1和pMGAl.2-2蛋白包含与ApoA-I结合的功能结构域,与生物信息学预测的结果一致。4.成功构建了真核表达质粒PG-3(pCDNA3.1-GFP-pMGAl.2-3),PR-3(pCDNA3.1-RFP-pMGAl.2-3),PG-4(pCDNA3.1-GFP-pMGA1.2-4),PR-4(pCDNA3.1-RFP-pMGA1.2-4),分别转染Hela细胞后,均产生了相应的红/绿色荧光,PR-2、PR-4的转染效率优于PG-3、PG-4,因此选用PR-3、PR-4和PG-AI(pCDNA3.1-GFP-ApoA-I)单转/共转Hela细胞,流式细胞仪检测ApoA-I、pMGAl.2-3、pMGAl.2-4蛋白的表达量,结果表明:与单转相比,共转染组ApoA-I、pMGAl.2-3、pMGAl.2-4的表达量均极显著下调(P<0.01),说明在细胞内1MGA1.2-3、pMGAl.2-4与ApoA-I蛋白之间存在相互作用,pMGAl.2-3.pMGAl.2-4蛋白包含与ApoA-I结合的功能结构域,与生物信息学预测的结果一致。
【作者】胡明明;
【导师】彭秀丽;
【作者基本信息】华中农业大学,动物遗传育种与繁殖,2014,硕士
【关键词】鸡毒支原体;pMGA1.2;ApoA-I;结构域;

【参考文献】
[1]裴立明.开放式FTIR光谱仪结构优化及系统集成[D].合肥工业大学,精密仪器及机械,2014,硕士.
[2]杜鑫龙.多通道ARMA信号加权信号融合Kalman反卷积滤波器[D].黑龙江大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[3]张斌.全反式维甲酸对球囊损伤大鼠胸主动脉后内膜增生及平滑肌细胞PCNA和MMPs表达的影响[D].青岛大学,内科学,2004,硕士.
[4]王一鑫.从批评话语角度对营养品广告英语的分析[D].山西师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[5]姚周虹.预后营养指数对恶性胸膜间皮瘤预后的影响及黄连素诱导其凋亡、自噬的机制研究[D].山东大学,内科学,2014,博士.
[6]张绮琼.两种新型饲料添加剂对肉猪生产性能的影响[D].湖南农业大学,养殖,2003,硕士.
[7]刘玉娜.第三届亚洲沙滩运动会背景下山东省海阳市体育旅游资源开发研究[D].新疆师范大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[8]赵静.事业单位人员绩效薪酬满意度与工作绩效关系研究[D].河北经贸大学,行政管理,2012,硕士.
[9]佟柏楠.原发性炎症性脉络膜毛细血管病变的临床特征分析[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[10]乐清洪.智能工序质量控制的理论与方法研究[D].西北工业大学,2002.
[11]刘辉,董晓楠,孙超超.石墨烯/二氧化钛复合光催化剂的制备及可见光催化性能研究[J].陕西科技大学学报(自然科学版),2013,01:23-28.
[12]朱元祥.城市场景VANET中协助下载和仿真研究[D].大连理工大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[13]冯玉才,桂浩,孙碧容.国际最新数据库SQL标准的相关研究[J].信息技术与标准化,2004,Z1:43-47.
[14]益宏斌.产品质量行政处罚案件之证明标准探析[D].兰州大学,法律,2012,硕士.
[15]张天娇.吉林省城镇化与生态环境协调发展研究[D].吉林大学,区域经济学,2013,硕士.
[16]王建超.美国尼克松政府的医疗保险制度改革[D].苏州大学,世界史,2014,硕士.
[17]杜杰,杜昌文,申亚珍,周健民.碳纳米管/聚合物复合材料及其在包膜控释肥料中的应用[J].材料保护,2013,S2:125-128.
[18]黄国四.计算机和自动化技术在鞍钢的应用[J].冶金自动化,1981,04:52.
[19]张笮晦.微生物催化肉桂醛、肉桂醇和潜手性芳香酮的反应研究[D].广西大学,化学工艺,2014,博士.
[20]董佳琦.基于曲面分片的五轴刀具轨迹规划研究[D].广东工业大学,机械电子工程,2013,硕士.
[21]李道国,苗夺谦,张红云.粒度计算的理论、模型与方法[J].复旦学报(自然科学版),2004,05:837-841.
[22]朱江.单轴压缩条件下张开裂纹扩展和连接过程的模型试验研究[D].重庆大学,交通运输工程,2014,硕士.
[23]卢东.房地产企业的市场营销策划研究[D].西南交通大学,工商管理,2003,硕士.
[24]马向宇.基于应力状态的金属材料变形行为研究[D].太原科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[25]严峰军.不同支付函数下少数派博弈的效率问题研究[D].西安电子科技大学,应用数学,2011,硕士.
[26]孙丽萍.维吾尔族英语专业大学生心理语言距离和英语学习动机的相关性研究[D].浙江大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
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[28]马可可,周宁,袁梦,杨德仁,李东升.单分散氧化铟锡纳米晶的合成及其增强表面拉曼性能的研究[J].光散射学报,2014,02:140-143.
[29]姜环宇.保险法上的告知及说明义务[D].吉林大学,法律,2012,硕士.
[30]申英利.社会资本视野下城市社区矛盾的化解机制研究[D].浙江工商大学,行政管理,2013,硕士.
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[32]尹华群.烟草青枯病(Ralstonia solanacearum)内生细菌及根围拮抗细菌研究[D].湖南农业大学,植物病理学,2004,硕士.
[33]武文波,杨志高,秦前清.基于小波变换的地震信号压缩[J].石油地球物理勘探,2005,03:349-352+20-372.
[34]郭文革,陈丽,陈庚.互联网基因与新、旧网络教育——从MOOC谈起[J].北京大学教育评论,2013,04:173-184.
[35]陈骅.城市老龄人群阅读现状与公共图书馆服务模式研究[D].南京农业大学,图书馆学,2011,硕士.
[36]杨杭.甲基溴土壤消毒替代技术对温室土壤原生动物群落的影响[D].中国农业大学,生态学,2004,硕士.
[37]刘杰.行星采样机械臂的设计与分析[D].江苏科技大学,机械设计及理论,2013,硕士.
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[39]魏宇菲.女性农民工从事家政服务的就业机制研究[D].四川省社会科学院,人口学,2014,硕士.
[40]郭福燕.护理管理伦理及其实践路径[D].河北师范大学,伦理学,2014,硕士.
[41]张晓颖.唐人传奇女侠形象研究[D].辽宁大学,中国古代文学,2012,硕士.
[42]何丹.论国际组织对国际条约的影响[D].中国政法大学,法律(专业学位),2013,硕士.
[43]任福全,李娟,魏明月.高校教学秘书工作存在的问题与对策探究[J].四川工程职业技术学院学报,2015,01:51-53.
[44]蒋童.合作学习在高中英语阅读教学中的应用研究[D].首都师范大学,学科教学,2013,硕士.
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[46]李晶波.耐高温型环氧上浆剂乳液的制备及其对碳纤维的作用[D].哈尔滨工业大学,2013.
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[50]曹雨婷.游戏化设计在旅游体验中的设计与研究[D].湖南大学,品牌传播,2013,硕士.

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