mir-381在小鼠卵泡不同发育阶段的表达及其对颗粒细胞的影响
【摘要】MicroRNAs是一种内源性的小非编码单链RNA。在人类基因组中,超过60%的基因会受到microRNAs的调控。研究表明microRNAs能够调控细胞的增殖、分化、凋亡以及胚胎的早期发育等过程。本课题以小鼠为实验动物模型,根据小鼠出生后不同日龄以及超数排卵激素(PMSG、hCG)处理后卵巢中mir-381的表达模式,通过real-timePCR进一步检测mir-381在不同发育阶段卵泡和卵泡颗粒细胞中的表达水平,从而揭示mir-381在卵泡发育中的表达规律并推测其可能发挥的作用。利用颗粒细胞体外培养模型和mir-381的模拟物和抑制物,进一步研究了mir-381对颗粒细胞的增殖、周期和凋亡的影响,并初步验证了mir-381在颗粒细胞中潜在的靶基因。实验结果如下：(1)mir-381在小鼠卵泡不同发育阶段的表达具有明显的差异性。Real-timePCR结果表明：与小腔前卵泡(90μm-130μm)相比,mir-381在较大的腔前卵泡(150μm-250μm)中的表达水平显著下调(P<0.05),而在较小的有腔卵泡(450μm-550μm)中的表达水平明显上调(P<0.05),之后在成熟卵泡(500μm-600μm)中表达水平显著下调(P<0.05)。(2)mir-381在小鼠不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达具有明显的差异性。mir-381在小腔前卵泡(90μm-130μm)颗粒细胞中的表达水平较高,此后在大腔前卵泡(150μm-250μm)和较小的有腔卵泡(450μm-550μm)颗粒细胞中的表达水平显著下降(P<0.05),而在成熟卵泡(500μm-600μm)颗粒细胞中的表达水平又显著升高(P<0.05)。由此可见,mir-381在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达规律与其在不同发育阶段卵泡中的表达规律并不一致(有腔卵泡及其后),这些结果暗示mir-381在有腔卵泡形成后,由于卵泡腔的形成和卵丘细胞分化,mir-381在有腔卵泡的壁层颗粒细胞和卵丘细胞中的表达也可能存在一定的差异性。(3)mir-381抑制颗粒细胞的增殖。21日龄小鼠卵巢中获取腔前卵泡颗粒细胞,经过体外培养和传代后转染mir-381的模拟物或抑制物,利用酶标仪检测细胞增殖水平。结果发现：mir-381模拟物能够显著促进mir-381的表达水平,而抑制物则显著抑制其表达水平。此外,mir-381模拟物能够显著抑制颗粒细胞的增殖,而mir-381抑制物则显著促进颗粒细胞的增殖。这些结果表明mir-381可能在体内卵泡颗粒细胞增殖过程中具有抑制作用,这与其表达水平随着卵泡的增长而下降的结果是一致的。(4)mir-381影响颗粒细胞的周期。原代培养的颗粒细胞经过转染mir-381模拟物后检测细胞周期情况。结果发现：mir-381模拟物能够显著提高颗粒细胞G1期水平,同时使S期水平略有下降。这一结果暗示mir-381能够使颗粒细胞阻滞于G1期,而不进入S期(DNA合成期),从而使颗粒细胞的增殖过程受到抑制。(5)mir-381不影响颗粒细胞的凋亡。原代培养的颗粒细胞经过转染mir-381模拟物后检测细胞凋亡情况。结果发现mir-381模拟物对颗粒细胞的凋亡水平没有显著影响。这一结果表明mir-381可能不参与颗粒细胞的凋亡过程。(6)mir-381在颗粒细胞中靶基因的初步研究。为了深入揭示mir-381参与调控颗粒细胞增殖和周期的机制,我们首先利用microRNAs靶基因预测软件(TargetScan、DIANA-microT和PicTar),对mir-381的靶基因进行了预测。并初步筛选了与细胞增殖相关的靶基因acvr1、acvr2a以及与细胞周期相关的靶基因cdk2ap2、cdk-4、cdk-6。进一步通过转染模拟物或抑制物检测对这些靶基因表达水平的影响。结果发现：acvr1、acvr2a、cdk2ap2、cdk-4、cdk-6在颗粒细胞中的表达水平被mir-381模拟物显著下调,而被mir-381抑制物显著上调,这一结果初步暗示这些基因可能为mir-381在颗粒细胞中的靶基因。我们初步推测mir-381可能通过调控靶基因acvrl和acvr2a的表达水平抑制颗粒细胞的增殖,通过cdk2ap2、cdk-4、cdk-6而调控颗粒细胞的细胞周期。总之,本论文揭示了mir-381在小鼠不同发育阶段卵泡及对应颗粒细胞中的表达规律,研究了其在颗粒细胞的细胞增殖和细胞周期调控中的重要作用,并初步揭示了mir-381在颗粒细胞中的靶基因。该研究结果为进一步深入理解卵泡发育和颗粒细胞增殖的调控机制提供了理论参考。
【作者】李倩；
【导师】霍立军；
【作者基本信息】华中农业大学，特种经济动物饲养，2014，硕士
【关键词】mir-381；小鼠；颗粒细胞；细胞增殖；细胞周期；
【参考文献】
[1]罗映南.紫金山金矿露天采场平硐溜井技术分析[J].金属矿山.2004(11)
[2]石利娟.Kontrastive Strukturanalyse des chinesischen und deutschen Sportberichts[D].西安外国语大学,德语语言文学,2014,硕士.
[3]郑园.基于提升小波变换和奇异值分解的视频水印算法[D].中南民族大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[4]张静波.基于空间数据库的数据挖掘技术研究[D].西安电子科技大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[5]李金彪.钢管混凝土拱桥施工控制与动力特性分析[D].武汉理工大学,结构工程,2013,硕士.
[6]王嫱.基于牛顿变换图形的超现实主义风格服饰图案设计方法[D].浙江理工大学,染织艺术设计（专业学位）,2014,硕士.
[7]刘树芳.攀钢2号高炉热风炉的大修改造[J].炼铁.1998(05)
[8]郝佳慧.物流配送车辆路径问题算法的研究[D].哈尔滨工业大学,计算机科学与技术,2014,硕士.
[9]胡晓赟.小肽抗氧化性及协同作用研究[D].江南大学,食品科学,2012,硕士.
[10]魏洋.我国建筑业资质监管法律问题研究[D].西南大学,民商法学,2013,硕士.
[11]孙明玮,陈增强,袁著祉.典型工业过程的无超调预测控制设计[J].控制与决策,2000,02:213-216.
[12]黄落成.基于有效值谐波检测新方法的大容量APF研究[D].中国矿业大学,电力电子与电力传动,2014,硕士.
[13]李佳.他莫昔芬处理子宫内膜癌细胞后ARID1A、ERα、ERβ、PR、P53变化的研究[D].河北医科大学,妇产科学,2014,硕士.
[14]李俊杰.多轴系统高精度同步控制[D].西安电子科技大学,机械电子工程,2012,硕士.
[15]李纯辉.二环石油公司关系营销研究[D].西安理工大学,2003.
[16]周中质.论民主的工具性及对我国民主建设的导引[D].浙江大学,行政管理,2003,硕士.
[17]李虔全.中国鼠尾草属植物的分子系统发育及其亚属间关系的研究[D].内蒙古科技大学包头医学院,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[18]白静.继电保护可靠性的基础数据分析[D].华北电力大学,电力系统及其自动化,2012,硕士.
[19]刘富元.2326kW轻型快装管式加热炉[J].油田地面工程.1989(04)
[20]仇志中.延期支付环境下考虑变化需求率和利率的EOQ模型[D].合肥工业大学,电子商务,2013,硕士.
[21]刘红.我国土地征用问题研究[D].首都经济贸易大学,区域经济学,2004,硕士.
[22]王路红.板栗花期喷硼对其光合特性和结实情况的影响[D].中南林业科技大学,果树学,2014,硕士.
[23]李瑞杰.配送中心布局规划仿真与评价[D].北京交通大学,2010.
[24]赵军.基于粗集理论的KDD技术研究[D].重庆大学,2003.
[25]孙荣川,马书根,李斌,王明辉,王越超.基于分治法的同步定位与环境采样地图创建[J].自动化学报,2010,12:1697-1705.
[26]周芳.文化强国建设视阈下的《在延安文艺座谈会上的讲话》研究[D].西北师范大学,马克思主义中国化,2013,硕士.
[27]郑淑梅.Probe和Spectrum后处理法对肝脏占位~1H-MRS的影响[D].大连医科大学,影像医学与核医学,2012,硕士.
[28]倪宇恒.水在M/TiO_2（110）（M=3d过渡金属）表面吸附的第一性原理研究[D].上海大学,凝聚态物理,2013,硕士.
[29]黄珊珊.大学生恋爱观研究[D].安徽农业大学,思想政治教育,2012,硕士.
[30]樊亚明.英国华威大学走向卓越的内因分析[D].沈阳师范大学,教育史,2014,硕士.
[31]张金国.基于三电平SVPWM有源电力滤波器的研究[D].华南理工大学,电气工程,2012,硕士.
[32]张冬森.历史教师集群共进方式的实践研究[D].广西师范大学,学科教学,2013,硕士.
[33]吴肇贵.台湾最大食品集团“统一”的经营战略(上)[J].中外管理.1998(06)
[34]康成.国有企业集团固定资产投资与企业价值关系研究[D].山东大学,会计学,2012,硕士.
[35]王成.基于OpenSees的型钢再生混凝土短柱抗震性能研究[D].西安建筑科技大学,结构工程,2013,硕士.
[36]王莉.饭店外包业务服务质量控制对策研究[D].浙江大学,2007.
[37]卢娜.大病保险中政府与市场关系研究[D].苏州大学,社会保障,2014,硕士.
[38]王静.FDI对浙江省碳排放的影响研究[D].宁波大学,国际贸易学,2014,硕士.
[39]印久青.经济报道中如何运用好经济数据[J].数据,2005,08:42-44.
[40]黄海鹰.中小企业法律问题研究[D].东北财经大学,经济法学,2003,硕士.
[41]金皓阳.基于黄金货币属性的金价变动研究[D].浙江大学,金融学,2013,硕士.
[42]郑熠煜.贝叶斯分类方法及其在冠心病诊疗中的应用研究[D].大连海事大学,计算机科学与技术,2013,硕士.
[43]王洋.不同退化程度下高寒草甸土壤有机碳及团聚体特征研究[D].南京农业大学,土壤学,2012,硕士.
[44]刘泽民.三系统卫星导航接收机关键技术研究[D].北方工业大学,电路与系统,2014,硕士.
[45]王倩倩.混合发酵剂及超高压处理对发酵鸡肉品质的影响[D].齐鲁工业大学,食品科学,2014,硕士.
[46]吕华侨.《管子》思想初探——以法律思想为主[D].中国社会科学院研究生院,中国古代史,2003,硕士.
[47]郑宜城.高速率LDPC编译码器的FPGA实现[D].西安电子科技大学,通信与信息系统,2010,硕士.
[48]侯国龙.基于拓扑优化的热几何稳定性设计方法[D].大连理工大学,工程力学,2013,硕士.
[49]汤丽.飞行数据管理记录系统关键技术研究[D].西北工业大学,2004.
[50]杨程.功能化石墨烯/聚合物复合材料的介电性能研究[A].中国仪表功能材料学会、重庆材料研究院、哈尔滨工业大学、《功能材料》期刊社.第八届中国功能材料及其应用学术会议摘要[C].中国仪表功能材料学会、重庆材料研究院、哈尔滨工业大学、《功能材料》期刊社:,2013:1.
