鸡肠道微生物的体外培养与分离鉴定及其对宿主健康的影响

【摘要】目前在畜禽养殖业中抗生素滥用已经成为一大安全隐患,为寻找其有效替代物,肠道益生菌的开发和应用一直是研究热点。此外,近几年源于肠道内的一些正常微生物菌群也为开发新型微生态制剂开辟了新的方向,研究发现在动物肠道微生态系统中,厌氧菌占99%以上。我们着力于从鸡肠道原著厌氧菌群中开发一种益生功能显著、耐受能力强且易于扩大培养的微生态制剂。本试验第一部分为鸡肠道内部分微生物的体外分离培养,首先采用传统细菌分离培养的方法结合体外静置厌氧培养,从鸡的盲肠中分离得到两株梭菌属细菌C1和B5,通过分子鉴定发现两者都是报道很少的新型梭菌菌株,利用DAPI染色和革兰氏染色确定其形态特异且两株菌差别很大,生理生化指标检测结果虽然显示两株菌均具有梭菌属细菌所特有生理生化特性,但具体分类还需进一步研究,体外试验发现C1对沙门氏菌没有明显抑制作用；其次利用体外厌氧连续发酵模型对成年鸡的盲肠内容物进行连续发酵培养,采用PCR-DGGE技术对每天的发酵产物进行检测,发现所得产物中的菌群结构保持基本稳定,说明能够在体外连续获得成熟稳定的鸡肠道菌群。本试验第二部分研究了体外培养的肠道微生物对鸡健康状况的影响,分别用一株乳酸菌、梭菌C1、鸡盲肠内容物发酵产物和四环素对新生小鸡的肠道菌群进行干扰,阳性对照组小鸡则正常生长,5天后对所有小鸡攻击沙门氏菌,每周称取体重并解剖取盲肠内容物进行检测。体重结果显示四环素组与梭菌组之间差异不明显,但平均体重均显著高于阳性对照组(P<0.05)；沙门氏菌活菌数检测结果发现乳酸菌组、梭菌组、发酵组和四环素组较阳性对照组差异显著(P<0.05)；运用PCR-DGGE技术对菌群结构检测的结果显示发酵组对小鸡菌群结构影响较大；通过Q-PCR方法对肠道内的不同细菌进行定量分析结果显示每组鸡肠道内主要菌群的含量差异不明显。可以得出如下结论：这株乳酸菌在体内具有抑制沙门氏菌的作用,但对小鸡生长作用不明显；梭菌C1虽然在体外对沙门氏菌的生长没有抑制作用,但动物保护实验显示梭菌C1不仅能抑制沙门氏菌在小鸡肠道中的定植,而且其增重效果与四环素效果接近,说明其对鸡的促生长作用明显；成熟鸡的肠道菌群能加快小鸡的肠道菌群发育,对沙门氏菌也有一定的抑制作用,但对小鸡的增重效果不明显。
【作者】方丹；
【导师】吴健；
【作者基本信息】华中农业大学，基础兽医学，2014，硕士
【关键词】鸡；肠道微生物；梭菌；PCR-DGGE；沙门氏菌；体外培养模型；

【参考文献】
[1]张艳钗.热镀锌生产线的自动化设计与研究[D].天津大学,控制工程,2013,硕士.
[2]申燕君.我国宅基地流转法律制度研究[D].首都经济贸易大学,经济法,2013,硕士.
[3]唐宇翔.同步解析支撑液膜技术提取浓缩S-腺苷蛋氨酸的实验研究[D].华中科技大学,生物化工,2013,硕士.
[4]董晗.钙离子拮抗剂预防性治疗偏头痛有效性及安全性的meta分析[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[5]史艳梅.个性化服务中挖掘用户兴趣的CMPS[J].现代图书情报技术,2005,03:85-87+28.
[6]杨菁慧.社会阶层固化中的政府责任研究[D].南京大学,行政管理,2013,硕士.
[7]杨婧婷.产业资本和金融资本融合模式选择分析[D].山东财经大学,企业管理,2013,硕士.
[8]张岚.大德客家古村落空间营造对水体环境的适应性研究[D].华侨大学,建筑学（专业学位）,2014,硕士.
[9]周韵.基于SNA的我国ICT专利许可对经济影响的研究[D].华中科技大学,经济法学,2012,硕士.
[10]曾晖,张振川,井元伟.网络流量系统的有限拍控制[J].控制与决策,2005,07:737-740+745.
[11]马淑芳,吴昊,邱梦真.国外高速铁路运价策略及启示[J].中国铁路,2014,07:12-15+19.
[12]阮剑均.米糠毛油的氧化稳定性及其营养价值评估的研究[D].南京农业大学,动物营养与饲料科学,2012,硕士.
[13]宛花.论刑事缺席审判制度在我国的构建[D].黑龙江大学,诉讼法学,2013,硕士.
[14]李含.中国重型血友病A临床表现异质性及其影响因素研究[D].南方医科大学,内科学,2012,硕士.
[15]蔡剑华,胡惟文.Hilbert时频谱在大地电磁数据处理中的应用[J].石油地球物理勘探,2011,06:984-988+1012+836.
[16]王微微.中国企业跨国并购对策研究[D].对外经济贸易大学,国际贸易,2004,硕士.
[17]黄亚军.DZ型运动监控系统[J].机电一体化.1996(05)
[18]王法骥.激光扫描织物图案处理系统及其应用[J].自动化学报,1984,01:54-57.
[19]欧阳娟.稀土上转换纳米材料的制备及其性能与细胞成像研究[D].上海大学,应用化学,2014,硕士.
[20]汤寅净.地铁风道施工对周围环境影响分析及安全风险评估[D].西安建筑科技大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[21]余建.人骨髓间充质干细胞对外周血T淋巴细胞体外活化影响的研究[D].浙江大学,内科学,2004,硕士.
[22]李云涛.李贽“童心”说与阳明心学[D].云南大学,文艺学,2014,博士.
[23]谢博文,祁瑞敏.基于LabVIEW和MCGS的行车机械手检测系统设计[J].电子制作,2015,15:5.
[24]奚虹.专利侵权的惩罚性赔偿制度研究[D].上海大学,民商法学,2014,硕士.
[25]莫君飞.基于Sip的Android音视频通信系统研究与设计[D].广东技术师范学院,系统理论,2013,硕士.
[26]胡泽春,王锡凡.配电网无功优化的分时段控制策略[J].电力系统自动化,2002,06:45-49.
[27]彭春燕.国家免费提供宫内节育器使用现状分析[D].吉林大学,社会医学和卫生事业管理,2013,硕士.
[28]张海波.基于地平式望远镜的图像消旋控制研究[D].中国科学院研究生院（长春光学精密机械与物理研究所）,机械电子工程,2012,硕士.
[29]赵雅雯.村镇银行竞争力问题研究[D].河北经贸大学,金融学,2013,硕士.
[30]刘凤红.大学生勤工助学在思想政治教育中的作用研究[D].东北石油大学,思想政治教育,2013,硕士.
[31]胡铭,傅闯,王俊生,黎小林,刘海彬.并联型四端直流输电系统实时数字仿真分析[J].电力系统自动化,2013,05:87-92+116.
[32]吴兵兵.人力资本对创业板企业绩效影响的实证研究[D].江西财经大学,金融学,2013,硕士.
[33]杨琴.玉石沟地区铜锌矿床多元信息模糊决策评价模型研究[D].中国地质大学（北京）,测绘工程,2014,硕士.
[34]薛晓军.燃料乙醇合成及应用过程热力学研究[D].中北大学,化学工程,2014,硕士.
[35]蔡庆喜.大型结构试验模态分析方法研究与软件开发[D].大连理工大学,机械设计及理论,2004,硕士.
[36]杨颖东.社区学院：21世纪中国高等教育值得努力的一个方向[D].华东师范大学,比较教育学,2004,硕士.
[37]郎东春.机场跑道异物识别扫描控制算法及系统设计研究[D].吉林大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[38]化晓锋.河道采空区地质环境灾害与生态处理技术研究[D].山东大学,水利工程（专业学位）,2013,硕士.
[39]侯小娟.与小胸鳖甲抗冻蛋白（MpAFP149）相互作用的蛋白质的筛选及鉴定[D].新疆大学,生物学,2013,硕士.
[40]钱华芳.数控机床温度传感器优化布置及新型测温系统的研究[D].浙江大学,2006.
[41]王勇平.TH公司基于财务视角的企业可持续增长研究[D].兰州大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[42]李志杰.13t液压挖掘机工作装置的运动仿真及结构分析[D].广西科技大学,机械设计及其理论,2013,硕士.
[43]张三喜.双作用液压变矩器的理论研究[D].燕山大学,机械电子工程,2014,硕士.
[44]雷凡.主体论视角下《诗经》两个英译本的对比研究[D].成都理工大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[45]张超,孟令君,金磊,郭柳贞,张芬莉.铁路枢纽通过能力计算方法[J].中国铁道科学,2014,02:86-90.
[46]吴迪.上海市外来流动人口社区卫生服务现状分析与对策研究[D].上海工程技术大学,社会保障,2013,硕士.
[47]吴有铭.我国图书出版产业安全问题初探[J].科技与出版,2014,03:35-37.
[48]M.FazilMOUSSA.负荷剂量西洛他唑对合并糖尿病的急性冠脉综合征患者介入治疗预后的影响[D].大连医科大学,心脏病学,2012,硕士.
[49]贾超.基于ArcGIS的配电调度指挥系统的设计与实现[D].东北石油大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[50]常非,杨晓峰,贾海林,罗雨,操丰梅,许树楷.适用于现场可编程门阵列的MMC电容电压平衡控制方法[J].电网技术,2015,05:1246-1253.