不同日龄仔猪胃肠道Obestatin蛋白含量及GHRL基因转录水平测定

【摘要】Obestatin是一种Ghrelin相关肽,来源于胃生长素前体肽(GHRL)基因。Obestatin的分子量为2516.3Da,有23个氨基酸残基,位于GHRL的76-98多肽片段。Obestatin的氨基酸区域具有高度保守性,其生物活性依赖于C端的酞胺化修饰。Obestatin在鼠胃肠道、胰腺、睾丸间质细胞、下丘脑、脑垂体等部位均有表达,可以和(G-蛋白偶联受体39)GPR39结合,能够抑制动物饥饿感、食物摄取、胃排空、空肠的蠕动及体重的增加。此外,Obestatin还能够抑制饮水、保护心肌细胞、调节胰岛素抵抗、缓解焦虑、促进睡眠、提高学习及空间记忆能力等。Obestatin与Ghrelin是由相同的基因、mRNA和相同的前体多肽衍生的,但两者的生物学效应表现出相互拮抗的作用,因此Obestatin称认为是Ghrelin的阴阳活性多肽或生物学拮抗剂。Obestatin的发现丰富了翻译后修饰在基因表达调控过程中的作用,具有很重要的研究意义。Obestatin已经被证明在能量稳态和体质量控制的复杂机制中起着很重要的生物学效应,而Obestatin在猪消化系统中的作用研究以及表达差异还很少；而仔猪阶段是肉猪生产育肥过程中的关键时期。因此我们检测了不同生长阶段仔猪胃肠道Obestatin的蛋白浓度及GHRL基因的表达水平,以探讨其表达规律。我们的工作为仔猪胃肠道发展以及能量代谢过程中Obestatin所发挥的生物学作用的深入研究提供了实验依据和参考价值。本实验选用初生仔猪(1d)、哺乳仔猪(15d)、断奶仔猪(30d)和保育仔猪(45d),并采取胃贲门、胃窦部、十二指肠、空肠和结肠组织。所取组织一部分用于总蛋白的提取,检测各组织总蛋白浓度并用磷酸盐缓冲液稀释至2.000ng/mL,最后用ELISA试剂盒检测不同日龄仔猪胃肠道组织Obestatin的蛋白浓度。另一部分组织用于提取总RNA,并在反转录之后采用实时荧光定量PCR法对不同日龄仔猪胃肠道组织GHRLmRNA的表达水平进行测定。运用SPSSStatistics17.0分析实验结果。结果显示：1.Obestatin蛋白在仔猪胃肠道变化趋势相同：即在15d其浓度显著低于1d(p<0.05),随后从第30d至45d呈渐进地增加。2.不同生长阶段仔猪的不同胃肠道组织间Obestatin的浓度差异不显著。3.GHRLmRNA在仔猪胃贲门第1d表达量最高,15d显著下降(p<0.05),随后在30d和45d呈渐进性增多的趋势,而在胃窦则表现为渐进增长的趋势；其在肠道的表达变化趋势大体一致,即自初生后先增长后下降。4.不同日龄的仔猪,GHRLmRNA的表达量在胃组织均显著高于肠道组织。结论：胃肠道Obestatin的表达在仔猪不同生长阶段有差异；GHRLmRNA在不同生长阶段仔猪胃肠道组织的表达具有时空特异性,且在胃组织的表达水平显著高于肠道组织；Obestatin蛋白与其前体肽基因的表达不具有时空同步性。
【作者】孙晓转；
【导师】郭定宗；
【作者基本信息】华中农业大学，临床兽医学，2014，硕士
【关键词】Obestatin；仔猪；GHRL；胃肠道；ELISA；荧光定量PCR；

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