沙海蜇ACE抑制肽制备及预防高血压效果与机理研究

【摘要】我国沙海蜇资源丰富，近年来甚至频繁出现爆发，但由于目前沙海蜇的加工方式比较单一，使沙海蜇资源没有得到充分利用。本文试图建立一种新的沙海蜇加工方法，即将其酶解、脱腥、脱盐、喷雾干燥后制成一种新的食源性ACE抑制肽，并对沙海蜇ACE抑制肽预防高血压的效果和机理进行研究。首先，对用碱性蛋白酶酶解新鲜沙海蜇制备ACE抑制肽的酶解条件进行了研究。先后以水解度（DH）和ACE抑制率为指标，经单因素实验和正交实验得到最佳的酶解条件为：酶解温度50℃、加酶量5%、酶解起始pH9.5。采用改进的高效液相色谱法测定ACE抑制率，发现新鲜沙海蜇在以上条件下酶解7h时所得多肽的ACE抑制率最大。所得ACE抑制肽脱盐冻干后，测定在0.5mg/mL浓度时ACE抑制率为54.53%。最后，通过排阻色谱法测得其相对平均分子量约为500Da。然后，对沙海蜇ACE抑制肽酶解液进一步加工制备成ACE抑制肽的工艺条件进行了研究。该工艺条件主要包括脱腥、脱盐和喷雾干燥三个过程，并对制得的沙海蜇ACE抑制肽的成分进行了分析。以蛋白质损失率(%)和三甲胺含量（mg/L）为指标，经单因素实验和正交实验得到最佳的脱腥条件为：活性炭添加量（w/v，g/mL）0.2%，脱腥温度20℃、脱腥时间40mim。脱腥后的沙海蜇酶解液经减压浓缩、0.45μm滤膜抽滤，200纳滤膜脱盐，喷雾干燥（进风温度165-175℃，出风温度85-95℃）后得到白色沙海蜇ACE抑制肽粉，并测得其蛋白质含量为81.50±0.42%、水分含量为6.23±0.24%、盐分含量为2.88±0.11%、脂肪含量为0.21±0.03%、糖分含量为5.97±0.21%，为低脂低糖的健康功能性食品。最后，研究了所得沙海蜇ACE抑制肽对L-NAME致高血压发生的预防作用和机理。80只大鼠随机分成5组，对照组灌胃蒸馏水（0.5mL/d），L-NAME组灌胃L-NAME（20mg/Kg.bw），低、高剂量沙海蜇ACE抑制肽组（简称低、高剂量组）灌胃L-NAME（20mg/Kg.bw）的同时分别灌胃100mg/Kg.bw和500mg/Kg.bw的沙海蜇ACE抑制肽，卡托普利组灌胃L-NAME（20mg/Kg.bw）的同时灌胃10mg/Kg.bw的卡托普利。灌胃前和灌胃1、2、3周时测量大鼠体重和血压。灌胃1周后，5组大鼠血压差异明显。为研究大鼠血压和血浆中血压相关因子的关系，5组大鼠各处死一半（8只），测定血浆中ACE、肾素（PRA）、NO、NO合成酶(NOS)、AngⅡ的活性或含量。灌胃3周后，处死剩余大鼠，测定大鼠血浆和尿液中ACE、NO、NO合成酶(NOS)及尿微量蛋白（MAU/ALB）的含量，并计算心脏和肾脏指数。结果发现，灌胃L-NAME可使大鼠血浆中NO和NOS含量降低，同时激活RAAS，并导致血压的显著升高。但可能是由于L-NAME的灌胃剂量不够高，灌胃L-NAME后大鼠血压先上升然后下降并逐渐趋于正常水平。沙海蜇ACE抑制肽在L-NAME致高血压模型中可以起到抑制ACE活性、AngⅡ含量上升，促进L-NAME导致的高血压向正常水平回复的作用，还可以减小因灌胃L-NAME导致心脏和肾脏的损伤。高剂量组效果强于低剂量组。
【作者】李伟伟；
【导师】李八方；
【作者基本信息】中国海洋大学，食品科学，2014，硕士
【关键词】沙海蜇；ACE抑制肽；大鼠；L-NAME；血压；预防作用；

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