诱导大鼠晶状体上皮细胞去分化生成诱导多潜能干细胞的初步研究

【摘要】第一章大鼠晶状体上皮细胞的原代培养目的：建立一种简单快速有效的体外培养大鼠晶状体上皮细胞的方法,进一步认识其生长、分化规律。方法：取初生3-5天SD大鼠,在无菌环境下撕取其晶状体前囊膜和赤道周边部囊膜,采用胰酶消化法培养。在显微镜下观察细胞生长规律及形态学特征；免疫荧光化学法对晶状体上皮细胞进行鉴定及分析其纯度MTT法分析各代细胞的生长速率及细胞的生长曲线。结果：酶消化法培养的大鼠晶状体上皮细胞生长迅速,呈扁平不规则多边形,镶嵌状排列；第二代细胞开始细胞呈单层贴壁生长,分布均匀；从第四代细胞开始出现纤维化的趋势,细胞形态呈梭形成纤维细胞样；第六代细胞开始出现老化。从第一代细胞到第十代细胞几乎100%表达aA-crystallin,从第五代细胞开始胞浆内aA-crystallin表达量下降；第四代第五代细胞生长速率最大,第三代细胞次之；第三代细胞在培养约24h后达到对数期。结论：酶学消化法是一种高效、实用、简便的晶状体上皮细胞原代培养方法,第3代大鼠晶状体上皮细胞是进行细胞学及相关研究理想的实验对象。第二章原代培养的大鼠晶状体上皮细胞诱导去分化生成诱导多潜能干细胞的初步研究目的：将第三代大鼠晶状体上皮细胞在生长对数期导入Oct4、c-Myc、Sox2、Klf4四个具有多能性的转录因子诱导去分化为诱导多潜能干细胞。方法：用携带四个具有多能性的转录因子的仙台病毒对处于对数期生长的原代培养的晶状体上皮细胞进行诱导去分化,转染后的第七天移植至饲养层细胞上,显微镜下观察胚胎干细胞样克隆团块的形成以及其生成的效率。将生成的胚胎干细胞样克隆团块进行免疫荧光细胞化学染色鉴定胚胎干细胞标志性蛋白SSEA-1、OCT4的表达,以及qRT-PCR鉴定胚胎干细胞标志性基因NANOG、REX1、OCT4的表达。结果：诱导后的晶状体上皮细胞可生成RLEC-ES样细胞克隆团块,转染效率为0.034%±0.0092%,取RLEC-ES样细胞克隆团块进行胚胎干细胞标志性蛋白SSEA-1以及OCT4免疫荧光组织化学染色呈阳性；用qRT-PCR法检测胚胎干细胞标志性基因NANOG、REX1、OCT4表达呈阳性。结论：大鼠晶状体上皮细胞可由携带Oct4、c-Myc、Sox2、Klf4四个具有多能性转录因子的仙台病毒诱导去分化生成RLEC-ES样细胞克隆团块,并在形态学、蛋白、RNA水平得到鉴定。
【作者】喻一心；
【导师】夏晓波；
【作者基本信息】中南大学，临床医学，2014，博士
【关键词】晶状体上皮细胞；诱导多潜能干细胞；细胞培养；病毒转染；重编程；

【参考文献】
[1]潘登奎.La（Ⅲ）促进光合作用的机理研究[D].山西农业大学,作物栽培与耕作学,2013,博士.
[2]孟倩.丹参组织培养及原生质体分离的研究[D].河南科技大学,植物学,2013,硕士.
[3]谢晓锋,张文俊,杨之廉.一种防止浮点遗传算法早熟收敛的父代选择策略[J].控制与决策,2002,05:625-628+634.
[4]陈华,章兢,张小刚,胡义函.一种基于Parzen窗估计的鲁棒ELM烧结温度检测方法[J].自动化学报,2012,05:841-849.
[5]荣晨.WT集团财务运营管理方案研究[D].大连理工大学,MBA（专业学位）,2013,硕士.
[6]孙秀艳.高中英语作业的设计及应用研究[D].山东师范大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[7]刘建国.掺饵光纤放大器的平坦性优化研究[D].西安电子科技大学,光通信,2012,硕士.
[8]魏春敏.CYP2E1酶在去甲斑蝥素代谢和环孢素诱导肝损伤中的作用研究[D].山东大学,药理学,2014,博士.
[9]王丹鹭.海南高等职业教育发展探析[D].华中师范大学,教育经济与管理,2003,硕士.
[10]杨曦.文化资产导向下台湾精致酒店的营建与设计研究[D].西安建筑科技大学,建筑学,2013,硕士.
[11]杨雨薇.受损钢框架结构受力性能研究[D].中南林业科技大学,结构工程,2014,硕士.
[12]马伟红.税收激励对高新技术企业技术创新影响的实证研究[D].南京财经大学,财政学,2012,硕士.
[13]向能超.上市公司高管激励机制与企业业绩研究[D].湖北大学,会计学,2011,硕士.
[14]张琦.蚕茧自动筛选计数系统关键技术的研究[D].浙江理工大学,信号与信息处理,2014,硕士.
[15]张素.环氧/酸化碳纳米管/玻纤微纳复合材料的制备工艺及性能[D].天津大学,2014.
[16]姜涵.“从来”类时间副词的多视角探讨[D].吉林大学,汉语国际教育,2012,硕士.
[17]舒娟娟.基于词性统计的中文文本零水印研究[D].湖南大学,信息与通信工程,2012,硕士.
[18]刘红新.基于图割理论的立体匹配算法研究[D].湖南大学,计算机科学与技术,2011,硕士.
[19]刘卉圻.异步电机定子绕组匝间短路故障建模与检测方法研究[D].西南交通大学,轨道交通电气化与自动化,2014,硕士.
[20]王莹莹.外语学术型硕士研究生个体培养质量评估量表的编制[D].四川外国语大学,英语语言文学,2014,硕士.
[21]赵先.基于现金股利支付视角的中小股东利益保护研究[D].山东财经大学,会计学,2012,硕士.
[22]杨天.《体坛周报》2012年欧洲足球锦标赛报道研究[D].苏州大学,新闻传播学（专业学位）,2013,硕士.
[23]葛顺祥.晶闸管装置的过电压保护[J].冶金自动化,1984,01:17-24.
[24]周晓岭.异质生境下克隆植物羊草和光稃茅香的空间拓展策略[D].东北师范大学,草业科学,2012,硕士.
[25]王道兵,钟其顶,李国辉,程涛,武竹英,戴祁,黄占斌,陈文斌.发酵乙醇中13C/12C分布的影响因素研究[J].酿酒科技.
[26]刘斤锵.期权定价二叉树算法收敛阶研究[D].西南财经大学,金融学,2014,博士.
[27]张敏.基于国内施工合同范本条件的项目支付管理的研究[D].湖南大学,项目管理,2010,硕士.
[28]陈震.混凝土拆除装置的动力学分析[D].南京理工大学,机械工程,2013,硕士.
[29]马胜龙.高职院校OA办公系统的设计与实现[D].南京理工大学,计算机技术,2011,硕士.
[30]宁永军.社区消防安全管理研究[D].华中师范大学,公共管理,2013,硕士.
[31]刘乃嘉.拒不支付劳动报酬罪若干问题解析[D].东北师范大学,刑法学,2012,硕士.
[32]马伯娟.论WTO的竞争政策及中国的立场和对策[D].华东政法学院,法律,2004,硕士.
[33]王庆艳.异质外延的二维Pb薄膜与FeSe薄膜超导电性的研究[D].清华大学,2012.
[34]于金振.基于CBR-RBR的滚动轴承磨削工艺专家系统研究[D].湖南大学,机械制造及其自动化,2010,硕士.
[35]栾芳.案例六券商研报的法律规制——中国宝安“石墨矿门”案的启示[J].公司法律评论,2012,00:362-369.
[36]余萍.骨干教师示范引领促进幼儿教师专业发展的个案研究[D].西南大学,学前教育学,2013,硕士.
[37]张青.空间阻隔视角下小学步行网络的可达性评价[D].重庆大学,城市规划与设计,2014,硕士.
[38]张冬.花色苷与蛋白质作用对抗氧化性的影响[D].山东师范大学,食品科学,2013,硕士.
[39]孙捷.企业的社会资本研究[D].浙江大学,2003.
[40]吴会洋.村级财务制度运行的调查研究与优化思路[D].山东财经大学,会计学,2013,硕士.
[41]吴丽君.刑法必然因果关系与相当因果关系[D].吉林大学,法律,2013,硕士.
[42]朱鹏艳.老年人健身路径锻炼方式及健身效果的实验研究[D].山东体育学院,体育教育训练学,2012,硕士.
[43]陈璇.毒品犯罪的系统分析与侦查控制[D].甘肃政法学院,诉讼法学,2012,硕士.
[44]王思.上市公司归因信息披露质量及监管研究[D].沈阳工业大学,会计学,2012,硕士.
[45]张欣.自动呼吸—滴定测量系统开发及其在监测短程硝化反硝化中的应用[D].重庆大学,2010.
[46]高坤光,刘毅,张振,王德禧.石墨烯的制备及其应用进展[J].工程塑料应用,2012,12:102-107.
[47]刘洋.技术复杂度的网络测算及其对真实汇率影响的研究[D].华东理工大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[48]王迪.辽宁省地市级党报特色民生新闻专栏研究[D].渤海大学,新闻学,2014,硕士.
[49]林春.骨料级配对自密实混凝土性能的影响[D].华南理工大学,材料工程,2012,硕士.
[50]常战芳,安丰涛.宣钢高、焦炉煤气计算机网络监测系统[J].冶金自动化,2004,02:51-53.