C型钠肽对牛卵母细胞体外成熟的影响以及牛早期胚胎凋亡、印记基因表达的研究

【摘要】卵母细胞的体外成熟(invitroMaturation,IVM)技术和胚胎体外培养(invitroCulture,IVC)是生殖生物学中的关键技术,在畜牧业生产中有广泛的应用。为了提高牛卵母细胞体外成熟质量以及提高早期胚胎发育的质量,本论文研究了减数分裂抑制剂C型钠肽(C-typenatriureticpeptide,CNP)预处理牛卵母细胞后对卵母细胞的成熟质量的影响,同时研究了不同氧气浓度对胚胎细胞凋亡的影响以及父源与母源性印记基因在牛早期胚胎体外发育过程中的差异性表达。本研究得到以下几点结论：1、以常规的牛卵母细胞体外成熟24h为对照,研究了CNP预处理牛卵母细胞6h,再进行成熟培养28h后的成熟情况。发现经CNP预处理组获得的成熟卵母细胞,从线粒体分布、线粒体DNA拷贝数水平以及受精后胚胎发育成囊胚的质量均优于常规成熟的卵母细胞,表明C型钠钛预处理可以有效改善牛卵母细胞体外成熟的质量。2、分别检测了常规方法成熟卵母细胞和CNP预处理组的成熟卵母细胞的ROS水平和GSH浓度,结果显示利用C-型钠肽对牛卵母细胞预处理6h然后体外成熟28h会导致牛卵母细胞内ROS水平的提高,但是,由于GSH在此过程中对活性氧的清除作用保护了卵母细胞的受精能力及受精后胚胎的发育能力。表明利用CNP预处理进行的牛卵母细胞两步成熟过程没有引起卵母细胞老化。3、研究了不同氧气浓度对牛早期胚胎细胞的凋亡以及凋亡基因表达水平的影响,结果表明在低氧环境中培养的胚胎的凋亡水平明显低于高氧环境中的胚胎,表明低氧环境更有利于牛体外受精胚胎的发育；并且培养环境中的氧气浓度在一定程度上影响了牛胚胎细胞中凋亡相关基因Mcl-1、Bad、Bak、Bik和Caspase-3的表达,这些基因表达产物可能相互协同影响了胚胎细胞凋亡的发生。4、利用Real-timePCR技术分别检测三个父源性印记基因Gnas、Grb10、Xist和三个母源性印记基因Mage12、Sgce和SNRPN在牛孤雌激活(ParthenogeneticActivation,PA)胚胎和体外受精(InVitroFertilization,IVF)胚胎中的表达水平。结果显示在IVF和PA胚胎发育过程中,父源性印记基因和母源性印迹基因表达模式存在一定的差异,这对牛早期胚胎的正常发育可能发挥重要作用。总之,以C型钠钛预处理为基础的两步成熟法可以有效改善牛卵母细胞的体外成熟质量；低氧环境降低了牛胚胎体外发育过程凋亡的发生,更有利于牛体外受精胚胎的发育；牛早期胚胎的正常发育是培养环境、凋亡基因和印记基因等基因相互协同的结果。
【作者】张春强；
【导师】张家新；
【作者基本信息】内蒙古农业大学，动物遗传育种与繁殖，2014，博士
【关键词】牛；卵母细胞；C型钠肽；线粒体；ROS-GSH；印记基因；胚胎发育；

【参考文献】
[1]乔小红.公共教育学课教师的教学活动对教学效果的影响[D].河北师范大学,教育经济与管理,2012,硕士.
[2]刘伊生.建设工程项目管理的发展趋势——集成化[J].建筑经济,2008,01:13-16.
[3]粟琳.面向超级计算机的自适应故障预测算法研究[D].重庆大学,计算机软件与理论,2014,硕士.
[4]祝文沙.玻璃表面无钯活化及化学镀镍磷工艺研究[D].燕山大学,材料学,2013,硕士.
[5]王沙.埋地水管泄漏检测系统时间同步算法的研究[D].西安科技大学,信号与信息处理,2014,硕士.
[6]马峻.城市旅游景区游客满意度测评研究[D].浙江大学,2007.
[7]张成杰.空肠弯曲菌联合百日咳毒素致Hartley豚鼠周围神经损伤的研究[D].河北医科大学,神经病学（专业学位）,2014,硕士.
[8]张宁宁.葡萄籽大豆提取物软胶囊的研究[D].山东师范大学,细胞生物学,2013,硕士.
[9]张晓军.面向多学科优化过程的柴油机本体模型建模与应用研究[D].江苏科技大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[10]陈玉福,宋明华,董鸣.鄂尔多斯高原覆沙坡地植物群落格局[J].植物生态学报,2002,04:501-505.
[11]苏航.玻璃空心微珠/Al多孔材料压缩及阻尼性能研究[D].哈尔滨工业大学,材料工程,2013,硕士.
[12]范汉秀.土质边坡地震破坏机理及稳定性研究[D].重庆交通大学,防灾减灾工程及防护工程,2012,硕士.
[13]杨洪军.中小企业B/S架构OA系统的分析与设计[D].山东大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[14]王韧韬.全氟化碳对脂多糖诱导急性肺损伤A549细胞表面活性蛋白的影响[D].中国人民解放军医学院,内科学,2013,硕士.
[15]梁美珠.基于嵌入式系统的无线Mesh AP的研究[D].山东建筑大学,检测技术与自动化装置,2013,硕士.
[16]卢政营.品牌延伸的溢出效应研究[D].天津财经学院,企业管理,2004,硕士.
[17]崔延群.微波—水热法制备石墨烯量子点及其氨基功能化研究[D].哈尔滨理工大学,2015.
[18]朱君.上市公司对区域经济发展的影响研究[D].东北师范大学,区域经济学,2014,博士.
[19]郭林.福清民俗文化调查及思考[D].华中师范大学,农村与区域发展,2012,硕士.
[20]邹立明.金融开放条件下我国商业银行利率风险管理研究[D].青岛大学,金融学,2004,硕士.
[21]段春伟.建筑项目绿色施工评价体系建立研究[D].北京交通大学,2008.
[22]储慧林.鱼雷在波浪中入水的数值模拟[D].江苏科技大学,流体力学,2014,硕士.
[23]王铭明.基于无线传感器网络的智能家居系统设计[D].中国科学院研究生院(长春光学精密机械与物理研究所),机械电子工程,2013,硕士.
[24]黄星.色彩的地域文化特性在包装设计中的应用研究[D].湖北工业大学,平面设计,2014,硕士.
[25]王祺.敦煌写本类书《语对》词汇研究[D].西北师范大学,中国古典文献学,2014,硕士.
[26]王英婷.晋韵与各代书法风格比较[D].山西师范大学,美术学,2014,硕士.
[27]范园生.高温内切纤维素酶突变体晶体结构解析及功能进化关系分析[D].吉林大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[28]季伟.影子银行对中国商业银行体系稳定性影响实证研究[D].南京大学,政治经济学,2013,硕士.
[29]戎金荣.中美国企简介文本中的文化差异研究[D].天津商业大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[30]梁晨.粉防己碱对三阴乳腺癌细胞HCC1937作用及生物学特性的影响[D].北京中医药大学,中医外科学,2013,硕士.
[31]颜志敏,王承民,连鸿波,衣涛,时志雄,张宇.计及缺电成本的用户侧蓄电池储能系统容量规划[J].电力系统自动化,2012,11:50-54.
[32]唐红珍.基于文献的针灸治疗肥胖症规律研究[D].南京中医药大学,中医医史文献学,2013,博士.
[33]巫星星.出租车行业政府管制的行政法问题研究[D].苏州大学,宪法学与行政法学,2013,硕士.
[34]王柔钧.中药联合视网膜光凝治疗糖尿病视网膜病变Ⅳ期（肝肾阴虚兼血瘀型）临床研究[D].云南中医学院,中西医结合临床,2012,硕士.
[35]赵新.蛇葡萄素体外对人膀胱癌J82细胞的抑制作用及机制研究[D].兰州大学,药理学,2013,硕士.
[36]林晓海.基于ARM FPGA可编程网络型四轴运动控制卡的设计与实现[D].华侨大学,电气工程,2014,硕士.
[37]裴建忠,李晓明.中国联通3.5GHz固定无线接入系统的建设发展思路[J].世界电信.2003(04)
[38]熊新阶,杨族桥,尹章才.数据库中的知识发现[J].黄冈师范学院学报,2002,06:70-72.
[39]胡中杰.论法律理性的逻辑基础转换[D].山东大学,法学理论,2013,硕士.
[40]谢婷.钯纳米颗粒的形貌控制合成及催化性能研究[D].中南民族大学,无机化学,2013,硕士.
[41]马越.富氮炭基材料电容电化学性能研究[D].华东理工大学,化学工艺,2013,硕士.
[42]杨芳.我国中小企业发展与女性就业[D].东北财经大学,产业经济学,2003,硕士.
[43]高波,张钦宇,梁永生,刘宁宁,黄程波,张乃通.基于EMD及ARMA的自相似网络流量预测[J].通信学报,2011,04:47-56.
[44]郑波,张伟,陈泓.空间数传链路中虚拟信道动态管理的研究[J].空间电子技术.1999(03)
[45]索增强.压缩感知理论及混沌加密算法在图像中的应用[D].太原科技大学,电路与系统,2013,硕士.
[46]孙丽.咪唑二羧酸衍生物基配合物的合成及性能研究[D].中北大学,无机化学,2014,硕士.
[47]徐峰.中职教师形象研究[D].华东师范大学,职业技术教育学,2013,硕士.
[48]陈慧娟.山东省威海、菏泽两市县级公立医院卫生技术人员抑郁状况比较研究[D].山东大学,公共卫生（专业学位）,2013,硕士.
[49]王瑞花.湘江大跨度预应力连续梁桥的仿真计算和收缩徐变研究[D].北京交通大学,2008.
[50]赵金栋.基于FPGA的多路脉冲信号同步测量技术研究[D].哈尔滨工业大学,仪器科学与技术,2013,硕士.