rhddADAM15抗肿瘤及抗血管新生作用研究

rhddADAM15抗肿瘤及抗血管新生作用研究

作者:师大云端图书馆 时间:2015-09-07 分类:毕业论文 喜欢:3195
师大云端图书馆

【摘要】ADAMs(ADisintegrinAndMetalloproteinase)是一类具有跨膜结构的、含有七个主要结构域的细胞外基质蛋白,具有金属蛋白酶活性及细胞间信号介导等功能。目前已发现的四十多种ADAM家族成员中,人ADAM15是唯一一个在其去整合素区域含有整合素结合位点RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)序列的成员。研究表明,重组人ADAM15去整合素区域(recombinanthumandisintegrindomainofADAM15,rhddADAM15)具有抗肿瘤活性,但是对其结构与作用机制,目前尚不清楚。本研究在前人的研究基础上,揭示了大肠杆菌表达纯化出的rhddADAM15的结构具有混合性,利用毕赤酵母表达系统表达了rhddADAM15与人血清白蛋白的融合蛋白HSA-rhddADAM15-His;检测了大肠杆菌表达的rhddADAM15对八株常见肿瘤细胞增殖与迁移的影响,初步解释了rhddADAM15对细胞增殖抑制的机理,评价了其对斑马鱼体内移植肿瘤的作用,并评价了rhddADAM15对斑马鱼血管生成的抑制作用。具体研究结论如下:(1)同源建模模拟提示ADAM15去整合素区域结构松散,圆二色谱分析发现rhddADAM15二级结构中存在90%的不规则卷曲,二硫键交联是维持其稳定构象的主要因素。非还原性与还原性电泳比较分析发现,大肠杆菌可溶性表达产物rhddADAM15为不同构象的混合型蛋白,液相色谱分析呈三个独立峰,提示至少存在三种不同构象的rhddADAM15;经计算,在检测到的三种不同构型rhddADAM15中,两种结构在分子内形成6对二硫键,一种形成7对二硫键;大肠杆菌表达rhddADAM15的分子量较理论分子量偏大,利用二硫苏糖醇处理后进行短肽分析发现rhddADAM15中偏大的原因为单独的巯基与谷胱甘肽缩合;对rhddADAM15进行不同条件的体外重折叠,活性筛选发现按照以下重折叠缓冲液组分折叠:盐酸胍、L-精氨酸、EDTA、GSH、GSSG的浓度分别为1.4、0.4~0.8、0.001、0.002、0.0002~0.0004molL-1,rhddADAM15的活性提高约5倍。液相色谱分析折叠后rhddADAM15呈单一峰,与折叠前第三峰具有相近的保留时间,提示7对二硫键形成的rhddADAM15构型可保持其高活性。(2)ADAM15去整合素区域是ADAM15七个主要结构域之一,该单独结构域在大肠杆菌表达结构的不均一,论文以人血清白蛋白(humanserumalbumin,HSA)作为辅助折叠分子,实现了在巴斯德毕赤酵母中分泌表达均一稳定的HSA-rhddADAM15-His融合蛋白。经Blue-sepharose亲和层析、Ni2+螯合层析及DEAE离子交换层析分离纯化获得具有人ADAM15去整合素区域蛋白免疫原性的融合蛋白。细胞划痕实验表明HSA-rhddADAM15-His对小鼠黑色素瘤细胞B16的迁移和增殖均有明显的抑制作用,且其干扰细胞迁移的活性较大肠杆菌表达产物高2~3倍。(3)大肠杆菌表达的rhddADAM15对于乳腺癌、肝癌、黑色素瘤、胰腺癌、胃癌、宫颈癌等多种肿瘤细胞均有增殖及迁移的抑制作用,抑制增殖的IC50在1.0到6.0μmolL-1之间,其中肝癌细胞Bel-7402最为敏感,IC50为1.04μmolL-1。移植Bel-7402细胞到斑马鱼体内,给予rhddADAM15可抑制其在斑马鱼体内的生长和转移,说明rhddADAM15在体内也有抑制肿瘤细胞增殖及迁移的作用。(4)rhddADAM15可抑制血管内皮细胞Eahy926的增殖与迁移,并能干扰Eahy926细胞参与的体外Matrigel成管试验。细胞周期分析显示受rhddADAM15干预的Eahy926细胞被阻滞于G0/G1期,高剂量可诱导Eahy926细胞凋亡。实验研究首次发现rhddADAM15也具有干扰胰腺癌细胞8988细胞参与的体外Matrigel成管试验,提示rhddADAM15具有抑制肿瘤血管生成的作用。研究还发现给予每条鱼20.0pmol的rhddADAM15时,对斑马鱼肠下血管生成抑制率为(72±1.26)%;每鱼5.0pmol时,节间血管生成抑制率为(48±2.92)%。与已在临床使用的血管生成抑制剂恩度相比,rhddADAM15的血管生成抑制能力明显高于恩度。(5)以Bel-7402细胞为研究材料,研究发现受rhddADAM15干预的Bel-7402细胞出现G2及S期阻滞,其机理为下调周期蛋白CDC2的表达量和提高CDC2-Tyr15的磷酸化程度。rhddADAM15可以诱导Bel-7402细胞出现典型的凋亡现象,并可强烈诱导斑马鱼发生体细胞凋亡,rhddADAM15作用后,Bel-7402细胞的caspase8、9、3的活性均有不同程度提高,提示rhddADAM15不是通过单一途径诱导细胞凋亡。rhddADAM15作用于Bel-7402细胞1h、2h后,Src蛋白Tyr416位磷酸化减弱,Tyr527位磷酸化增强,Src蛋白总量变化微弱,即Src蛋白活性降低,提示rhddADAM15对细胞的增殖抑制与Src参与的信号通路有关。
【作者】侯颖;
【导师】金坚;
【作者基本信息】江南大学,发酵工程,2014,博士
【关键词】rhddADAM15;肿瘤;细胞周期阻滞;血管生成;斑马鱼;

【参考文献】
[1]朱水媚.中国信用评级标准变化研究[D].上海交通大学,金融,2013,硕士.
[2]王娜.美国公务员财产申报制度研究[D].辽宁大学,中外政治制度,2012,硕士.
[3]贾静.饭店对员工的社会责任与员工离职倾向关系的实证研究[D].西安外国语大学,旅游管理(专业学位),2014,硕士.
[4]高龙英.痔灵冲剂治疗外痔的临床研究[D].黑龙江中医药大学,中西医结合临床,2004,硕士.
[5]宋英波.沙河口区初中教师参与学校管理的调查研究[D].黑龙江大学,教育管理,2013,硕士.
[6]魏玮.汉赋与汉代风俗[D].西北师范大学,中国古代文学,2013,硕士.
[7]赵艳青.静电纺丝技术用于制备聚偏氟乙烯六氟丙烯复合电解质[D].吉林大学,材料学,2014,硕士.
[8]张磊.基于虚拟现实技术的公共建筑火灾人员逃生训练系统研究[D].中国矿业大学,安全技术及工程,2014,硕士.
[9]董宁.基于神经网络的球杆控制系统的设计[D].东北大学,控制理论与控制工程,2010,硕士.
[10]赵敏.科学发展观中的创新性研究[D].中北大学,思想政治教育,2013,硕士.
[11]曹波.新疆阿克苏地区少数民族汉语使用状况调查与研究[D].渤海大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[12]范小康.云存储网关中可扩展的目录服务系统的研究与实现[D].国防科学技术大学,计算机科学与技术,2012,硕士.
[13]栗学磊.基于高斯束的弹性波场计算方法研究[D].吉林大学,固体地球物理学,2013,硕士.
[14]麻虎.骨痹止痛液对兔膝骨性关节炎软骨中IL‐1、TNF‐α表达影响的实验研究[D].甘肃中医学院,中医骨伤科学,2014,硕士.
[15]张恒.基于数据驱动的转子故障特征信息建模方法研究[D].兰州理工大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[16]王凯.基于LabVIEW的农业轮式拖拉机驾驶员全身振动测评系统的研究[D].内蒙古农业大学,农业电气化与自动化,2013,硕士.
[17]康俊杨.金融业转征增值税的法律问题探讨[D].华中科技大学,法律,2013,硕士.
[18]刘刚.铁族纳米材料的制备及性质研究[D].安徽大学,材料物理与化学,2013,硕士.
[19]卓淑娟,陈禄扬,张勇骏,金广夏.石墨烯量子点荧光探针在磷酸盐检测中的应用[J].安徽师范大学学报(自然科学版),2015,03:250-253+259.
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[21]杨卫东.呼和浩特金谷农村合作银行基层网点营销策略研究[D].内蒙古大学,高级管理人员工商管理,2013,硕士.
[22]葛水生.我国铁路列车有线电视的发展[J].中国铁路.1997(11)
[23]王昊斌.浅析我国成年意定监护制度的构建[D].山东大学,法律(专业学位),2013,硕士.
[24]时蕾.建筑规范翻译中平行文本的应用[D].河北师范大学,翻译,2013,硕士.
[25]李仁璞,黄道.基于RS理论的不完备信息系统处理方法[J].华东理工大学学报(自然科学版),2005,02:227-231.
[26]张延勇.功能翻译理论视角下旅游景点的语篇英译[D].天津财经大学,英语语言文学,2012,硕士.
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[28]赵维伟.异种钢点焊过程动态特性测试及控制模式研究[D].吉林大学,材料加工工程,2014,硕士.
[29]张文东.新时期普通高校成人教育管理的探析[D].吉林大学,行政管理,2004,硕士.
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[35]樊伟,卞战强,田向红,张娟.巯基硅烷改性氧化石墨对砷的吸附性能[J].环境化学,2013,05:810-818.
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[47]雷家琪.古典戏曲中“寒窑故事”研究[D].西北大学,中国古代文学,2014,硕士.
[48]楼啸.高话务密度区的网络容量及资源评估方法探讨[J].移动通信,2005,08:77-81.
[49]郑玉山.基于辅助决策技术与J2EE架构的企业CRM系统的研究与设计[D].西北工业大学,计算机软件与理论,2004,硕士.
[50]张颖.拉莫三嗪治疗育龄期女性癫癎患者临床疗效观察[D].第四军医大学,神经病学,2014,硕士.

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