microRNA-363通过下调S1PR1抑制肝癌细胞增殖

【摘要】1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1)是一种G蛋白偶联受体，属于1-磷酸鞘氨醇受体家族，是重要的信号分子，通过与其配体1-磷酸鞘氨醇(S1P)结合调解下游信号通路活性。S1PR1广泛表达与各种组织和器官细胞表面，参与了多种生物学功能。前期研究证实S1PR1作为癌基因，通过上调很多信号通路，促进了肝癌的发生发展。首先，相对正常的人胎肝细胞，肝细胞癌细胞高表达S1PR1分子。而相对正常的人胎肝细胞，肝癌细胞则低表达mir-363。其次，S1PR1调节了很多经典信号通路的活性，例如ERK和STAT3。第三，ERK和STAT3信号通路调控了很多下游靶基因表达，涉及了多种肿瘤的发生发展。因此，我们尝试研究肝癌细胞中S1PR1高表达的机制，并将研究聚焦于microRNA对S1PR1的调控机制上，取得以下的结果：1.通过生物信息学预测，S1PR1mRNA3′-UTR上有mir-363的结合位点，并通过荧光素酶报告基因实验证实mir-363在S1PR13′-UTR上的结合位点位于nt1256-1262处，并具有生物学功能。2.我们通过qPCR和WesternBlot发现，相对人胎肝细胞系，肝癌细胞系高表单S1PR1而低表达mir-363。3.通过qPCR和WesternBlot，我们发现mir-363能够在mRNA和蛋白水平下调S1PR1的表达。4.通过CCK-8实验，我们证实mir-363能够抑制肝癌细胞增殖。5.转染mir-363mimics后，伴随ERK和STAT3的磷酸化水平的降低，他们下游靶基因的表达也被下调。6.通过转染靶向S1PR1的siRNA，我们能观察到与转染mir-363类似的结果。综上所述，mir-363是S1PR1的负性调控因子并抑制肝癌细胞增殖，提示mir-363/S1PR1通路可能是肝细胞癌发病的机制之一，并为治疗提供新的靶点。
【作者】周鹏；
【导师】何凤田；
【作者基本信息】第三军医大学，生物化学与分子生物学，2014，博士
【关键词】1型1-磷酸鞘氨醇受体；microRNA-363；肝细胞癌；细胞增殖；

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