养阴清热法对MRL/lpr狼疮鼠调节性T细胞、Th17细胞和肾脏病理的作用

【摘要】目的：探讨以青蒿鳖甲汤加减为代表的养阴清热法对MRL/lpr狼疮鼠调节性T细胞、Th17细胞和肾脏病变的影响；从影响调节性T细胞和Thl7细胞平衡的角度解释养阴清热法治疗系统性红斑狼疮的机制。方法：32只8-10周龄的雌性MRL/Ipr狼疮鼠分为4组：模型组、中药组、泼尼松组和联合用药组,每组8只。正常对照组为周龄、体重与上述MRL/lpr小鼠相仿的C57BL/6小鼠8只。模型组与正常对照组小鼠予生理盐水按17.5mL·kg-1·d-1剂量灌胃；泼尼松组小鼠予醋酸泼尼松片加生理盐水配成0.5mg/ml的溶液,给小鼠灌胃的剂量为8.75mg·kg-1·d-1;中药组予青蒿鳖甲汤加减水煎剂浓缩液(药物组成及剂量比例：青蒿l0g[后下]、鳖甲30g[先煎]、水牛角20g[先煎]、牡丹皮l0g、生地20g、秦艽l0g、玄参l0g,浓缩液浓度相当于1.1g生药/m1),给小鼠灌胃的剂量为19.25g·kg-l·d-1；联合用药组予上述浓度的中药浓缩液及泼尼松溶液分别按19.25g·kg-l·d-1以及8.75mg·kg-1·d-1的剂量分次灌胃。连续用药7周。每周测量小鼠体重。用药前和用药结束后分别测小鼠24小时尿蛋白含量；用药结束后采集小鼠静脉血用ELISA法检测血清抗ds-DNA抗体含量；取小鼠脾脏制备脾脏单个核细胞悬液,用流式细胞技术检测CD4+CD25+/CD4+、Foxp3+/CD4+CD25+、Foxp3+/CD4+、IL-17+CD4+;取小鼠肾脏制作病理切片,分别进行H&E染色、PAS染色、Masson染色和六胺银染色(PASM)染色,镜下观察肾组织病理变化并进行狼疮肾炎肾组织活动性指数(AI)评分和肾组织慢性化指数(CI)评分。用Stata11.0软件和ConciseStatiatics14.0软件对实验结果进行统计分析。成果：各组小鼠CD4+Foxp3+细胞、CD4+CD25+Foxp3+细胞、CD4+CD25-Foxp3+细胞和Th17细胞表达率均有显著性差异(均为P<0.05)。中药组和泼尼松组CD4+Foxp3+细胞和CD4+CD25+Foxp3+细胞表达率均显著高于模型组(P<0.05),CD4+CD25+Foxp3+细胞和Th17细胞表达率均显著低于模型组(P<0.05)。模型组小鼠肾脏病理切片镜下见肾小球毛细血管基底膜增厚,系膜细胞和内皮细胞明显增生,部分肾小球内见白细胞浸润,偶见肾小球内新月体形成、囊壁粘连及透明血栓或白金耳样改变,偶见肾小球玻璃样变、硬化,肾间质呈不同程度炎细胞浸润,间质血管扩张充血；各组小鼠肾组织AI评分有显著性差异(均为P<0.05),中药组、泼尼松组和联合用药组的病理改变均较模型组轻且肾组织AI评分均显著低于模型组(P<0.05)。全部MRL/lpr小鼠肾组织AI评分与CD4+Foxp3+细胞(Spearman’srho=-0.5934,P<0.05)和CD4+CD25-Foxp3+细胞(Spearman’srho=-0.5914,P<0.05)表达率呈负相关；肾组织AI评分与Th17细胞(Spearman’srho=0.4958,P<0.05)表达率呈正相关。各组小鼠血清抗ds-DNA抗体含量差异有显著性(P<0.05),中药组小鼠血清抗ds-DNA抗体含量显著低于模型组(P<0.05),泼尼松组和联合用药组小鼠血清抗ds-DNA抗体与模型组无显著性差异(P>0.05)。各组小鼠用药前后尿蛋白变化(减少)量有显著性差异(P<0.05),中药组小鼠尿蛋白用药前后变化(减少)量显著高于泼尼松组。各组小鼠用药前后体重的增加量(△Weight)有显著性差异(P<0.0025),模型组△Weight显著低于正常对照组(P<0.05),泼尼松组△Weight显著低于正常对照组(P<0.05),中药组、联合用药组△Weight与正常对照组相比均无显著性差异(P>0.05)结论：(1)养阴清热法和泼尼松均可以显著改善MRL/lpr狼疮鼠的肾脏病变,特别是活动性病变。养阴清热法在控制狼疮鼠血清抗ds-DNA抗体增加方面可能较泼尼松有优势,同时可能减少泼尼松对小鼠体重增长方面的不利影响。(2)养阴清热法和泼尼松可能并不能上调MRL/lpr狼疮鼠CD4+CD25+Foxp3+细胞(即传统的Treg细胞)的表达,但能上调CD4+T细胞的Foxp3分子的表达,使得可能具有免疫抑制作用的CD4+CD25-Foxp3+细胞的表达率增高,同时下调具有促发自身免疫反应作用的Th17细胞的表达。(3)养阴清热法对上述细胞表达的调节作用可能是其减轻MRL/lpr狼疮鼠肾脏病变、治疗SLE的作用机制之一。
【作者】林宁；
【导师】钟嘉熙；
【作者基本信息】广州中医药大学，中医临床基础，2014，博士
【关键词】系统性红斑狼疮；养阴清热；Treg；Th17；狼疮肾炎；

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