基于FXR探讨利胆退黄法治疗肝内胆汁淤积的的机制及临床研究

【摘要】研究背景我国肝病发病率高,各种肝病都有可能导致胆汁淤积,肝内胆汁淤积又可诱发肝脏的炎症和纤维化甚至肝硬化,因此治疗胆汁淤积对于延缓肝病的进程具有重要意义。胆汁淤积主要是指胆汁酸的浓度异常升高。FXR作为胆汁酸代谢的调节因子参与转录调控多种胆汁酸代谢相关膜转运体。NTCP将胆盐输入到肝细胞,BSEP将肝细胞分泌的胆盐泵到胆小管。肝内胆汁淤积属于祖国医学中的“黄疸”,利胆退黄是基本治疗法则。现代中医药研究大部分将FXR及BESP等膜转运体作为同一层次的指标,对这两个层次的相关性研究报道不多。回顾文献,中医临床观察前瞻性研究少,大部分是少量的临床病例观察,随机、双盲、多中心对照研究不多,循证医学证据不足。研究目的：采用“内湿+外湿+药物”建立病症结合模型,研究利胆退黄中成药茵栀黄注射液对肝内胆汁淤积湿热证模型大鼠FXR、NTCP、BESP表达的影响,观察大鼠血清生化指标、肝脏组织病理变化,明确茵栀黄注射液治疗肝内胆汁淤积中的具体作用靶点。结合临床实验,评价利胆退黄中药茵栀黄注射液治疗胆汁淤积性肝炎的临床疗效。研究内容与方法：实验部分：1造模：根据肝内胆汁淤积湿热证的中西医理论,在长夏湿热季节将大鼠置放于湿热造模箱内,喂饲葡萄糖和猪油脂混合液,之后一次性灌胃ANIT造成急性药物性肝内胆汁淤积。2分组及干预方法：将51只SPF级三月龄雄性SD大鼠随机分为7组：正常对照组(7只)、模型组(7只)、茵栀黄注射液组(7只)、GW4064组(7只)、Guggulsterone组(7只)、茵栀黄+GW4064组(8只)、茵栀黄+Guggulsterone组(8只)。正常对照组(N)：每天上午予0.9%生理盐水1mL/100g灌胃。模型组(M)：每天上午予0.9%生理盐水1mL/100g灌胃。茵栀黄注射液组(Y):ANIT灌胃48小时后,1mL/100g/天的茵栀黄注射液腹腔注射,连续7天。GW4064组(G):ANIT灌胃48小时后,GW4064按照100mg/kg/天灌胃,连续7天。Guggulsterone组(GS):ANIT灌胃48小时后,Guggulsterone按照100mg/kg/天灌胃,连续7天。茵栀黄+GW4064组(+G):ANIT灌胃48小时后,1mL/100g/天的茵栀黄注射液腹腔注射,100mg/kg/天的GW4064灌胃,连续7天。茵栀黄+Guggulsterone组(+GS)：ANIT灌胃48小时后,1mL/100g/天的茵栀黄注射液腹腔注射,100mg/kg/天Guggulsterone灌胃,持续一周。3检测指标：3.1检测大鼠的TB、DB、IB、ALT、AST、ALP、γ-GT。3.2各组大鼠肝脏苏木精-伊红染色,观察肝脏形态结构变化。3.3蛋白质印迹法检测大鼠肝脏FXR、BSEP、NTCP蛋白表达。3.4RT-PCR检测大鼠肝脏FXR、BSEP、NTCPmRNA表达。临床部分：茵栀黄注射液治疗肝内胆汁淤积的临床研究：本课题依据西医肝内胆汁淤积的诊断标准和中医肝胆湿热证的诊断标准共纳入60名患者,全部来自于广州中医药大学第一附属医院脾胃科住院患者。采用随机数字表法将患者随机分为两组,对照组予还原型谷胱甘肽1.2g/d,静脉滴注,注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸1g/d,静脉滴注,同时口服熊去氧胆酸胶囊250mg/次,2次/d,治疗组在对照组的基础上加用茵栀黄注射液20ml/d静脉滴注。观察患者中医症候、肝功能(TB、DB、IB、AST、ALT、TBA、ALP、γ-GT)以及中西医临床综合疗效比较,评价茵栀黄注射液治疗肝内胆汁淤积的临床疗效。研究结果：1茵栀黄组较模型组可改善大鼠肝内胆汁淤积湿热证的症候,降低TB、DB、ALP、γ-GT的水平优于模型组,并且能够减轻肝脏病理损害。2茵栀黄注射液可以促进模型组大鼠FXR蛋白和基因表达,促进BESPmRNA表达,对NTCP蛋白和基因表达与模型组比较无明显差别。发现FXR、BESP高表达值时NTCP低表达,NTCP高表达时,FXR、BESP低表达。BESP与FXR具有显著相关性,NECP与FXR无显著相关。3临床研究发现茵栀黄组在降低患者血清胆红素和肝酶方面均有显著疗效,与对照组比较无明显差异。在改善中医证候积分方面茵栀黄注射液联合西药基础疗效优于对照组。两组用药对血分析、肾功无明显影响。研究结论：1采用“内湿+外湿+药物”建立的病症结合大鼠模型,是符合中西医理论的肝内胆汁淤积湿热证大鼠模型。茵栀黄注射液可有效改善肝内胆汁淤积湿热证大鼠的相关症候群,降低TB、DB、ALP、γ-GT及减轻胆汁淤积造成的肝脏损害。2茵栀黄注射液可以通过干预FXR上调BESP的表达来治疗肝内胆汁淤积。3茵栀黄注射液联合西药基础药物在改善中医证候方面优于对照组,两组在降低患者TB、DB、IB、ALT、AST、GGT、ALP方面疗效显著但无显著差异,两组药物对血分析、肾功能无明显影响。
【作者】吴海滨；
【导师】刘友章；
【作者基本信息】广州中医药大学，中医内科学（专业学位），2014，博士
【关键词】肝内胆汁淤积；FXR；BSEP；NTCP；利胆退黄；茵栀黄注射液；临床研究；

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