1、iASPP与Sertad1的相互作用对白血病细胞增殖和凋亡的调控 2、N-cadherin和Tie2作为白血病干细胞标记的研究

【摘要】研究目的：iASPP是P53基因的重要拮抗因子,目前已发现在白血病细胞中高表达,可抑制白血病细胞凋亡。我们通过酵母双杂交技术发现iASPP能够与Sertadl(SEI)结合,因此我们针对iASPP与Sertadl相互作用在急性白血病增殖和凋亡中的作用进行研究。研究方法：采用免疫共沉淀及荧光共聚焦验证iASPP与Sertad1在不同细胞系中的结合,确定结合的结构域及亚细胞定位；在不同白血病细胞中高表达iASPP.Sertadl及两者共同高表达,筛选单克隆细胞,建立稳定高表达上述基因的细胞系；MTT法检测细胞增殖能力；流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡；Westernblot方法检测各单克隆细胞P53靶蛋白的变化。研究结果：1.iASPP能够和Sertadl结合,定位于细胞浆近核膜的位置。iASPP可与Sertadl中CA、PB、C端三段结构域结合,唯独与S区域不结合。2.在K562细胞中过表达Sertadl,可以引起iASPP蛋白表达上调,且呈时间依赖性,但干扰Sertadl并不影响iASPP的蛋白表达。3.K562细胞中过表达iASPP,致细胞增殖加快,细胞周期被阻滞于G2/M期,抵抗化疗药物引起的凋亡能力明显增强,当iASPP和Sertadl同时高表达后细胞增殖明显减慢,细胞周期阻滞于G2/M期,抗凋亡能力下降,此时iASPP蛋白和Sertadl蛋白共定位发生改变,主要位于胞浆中。4.高表达iASPP的K562(K562-iASPPhi)细胞经过化疗药物处理后Puma蛋白表达量逐渐上升,且呈浓度和时间依赖性。研究结论：K562细胞中P53蛋白虽然为突变型,但仍然具有一定的生物学功能,正常情况下iASPP和Sertadl均能在胞浆和胞核中穿梭,过表达的iASPP可以进入胞核,通过与P53结合,激活Puma蛋白,发挥抗凋亡、促进增殖的功能。但当iASPP和Sertadl同时高表达时,Sertadl能够通过在胞浆近核膜的位置结合iASPP,并将其阻滞在胞核外,最终达到抑制iASPP的功能。研究目的：探索N-cadherin和Tie2作为白血病干细胞标记的意义。研究方法：从初诊急性髓系白血病患者骨髓单个核细胞中通过流式分选得到CD34+CD38-CD123+N-cadherin+和CD34+CD38-CD123+Tie2+细胞,按不同剂量接种于NOD/SCID小鼠体内,观察小鼠是否发生白血病,并进行相应分子遗传学和分子标记的检测。研究结果：1.不同初诊AML高白细胞患者中CD34+CD38-细胞群比例具有显著性差别。2.CD34+CD38-CD123+N-cadherin+和CD34+CD38-CD123+Tie2+与相同剂量的阴性组细胞(CD34+CD38-CD123+N-cadherin-和CD34+CD38-CD123+Tie2-)相比,在NOD/SCID小鼠体内确实能够更快,更有效地促进白血病的发生。3.白血病小鼠的骨髓原始细胞进行二次移植依然能够促进白血病的发生。4.FLT3-ITD可能协作N-cadherin参与白血病干细胞的自我更新和扩增。5.N-cadherin组发病小鼠白血病细胞累及多个脏器,而Tie2组发病小鼠白血病细胞多局限在骨髓中。研究结论：N-cadherin和Tie2能够参与白血病干细胞的自我更新和扩增,有望成为白血病干细胞新的标记。
【作者】邱少伟；
【导师】王建祥；
【作者基本信息】北京协和医学院，内科学，2014，博士
【关键词】iASPP；Sertadl；P53；急性白血病；凋亡；白血病干细胞；N-cadherin；Tie2；急性髓系白血病；

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