利拉鲁肽对2型糖尿病非酒精性脂肪肝的作用及机制研究

【摘要】目的：胰高糖素样肽-1(glucagon-likepeptide1,GLP-1)是一个含有30个氨基酸残基的肠道激素,进餐后在食物刺激下,由回肠和结肠粘膜层的L细胞分泌,能够以葡萄糖依赖的方式刺激胰岛素分泌,抑制胰高血糖素分泌来调控血糖,GLP-1的生物学作用通过与胰岛β细胞的GLP-1受体(GLP-1R)结合产生。GLP-1受体广泛分布于各种组织器官(胰腺、肺脏、心脏、血管平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞、单核细胞、肾脏、胃肠道、中枢神经系统、周围神经系统),GLP-1通过GLP-1R发挥作用。GLP-1是一种对许多组织具有抗氧化保护作用的肠道激素。内源性GLP-1分泌后很快被二肽基肽酶-4(dipeptidylpeptidaseDPP-IV)降解,在血液中的半衰期只有1-2min。利拉鲁肽是一种人GLP-1长效类似物,与天然GLP-1有97%的同源性,它在天然GLP-1的分子结构上更换了一个氨基酸,并增加了一个16碳棕榈酰侧链。不仅保留天然GLP-1的功效,而且由于存在脂肪酸侧链,其分子不易被DPP-4降解,并能与白蛋白结合从而增加代谢稳定性。利拉鲁肽是GLP-1酰化类似物,可以在皮下注射部位吸收。2009年在欧洲和日本允许使用,2010年美国FDA批准使用。利拉鲁肽作为新的降糖药物已广泛应用于临床,越来越多的证据表明,利拉鲁肽具有多种降糖外的作用,如保护血管内皮细胞、减少糖尿病肾脏的炎症因子的表达等。最新研究显示,利拉鲁肽可显著减少糖尿病大鼠肝脏内脂质的含量,减轻糖尿病鼠肝脏脂肪变。FGF-19、FGF-21是新的脂肪因子,分别主要由肠道和肝脏细胞分泌。研究证实这两种因子对糖脂代谢,尤其是肝脏脂肪代谢起着极其重要的作用。本研究旨在探讨利拉鲁肽是否可通过影响FGF-19.FGF-21的水平,是否继而通过激活AMPK能量代谢相关信号通路,调节肝脏脂肪代谢关键酶的表达,最终实现对糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝病的保护作用。方法：采用高糖高脂饮食联合小剂量STZ建立糖尿病脂肪肝病动物模型,检测利拉鲁肽对糖尿病大鼠血糖、血脂、胰岛素抵抗的影响,应用ELISA方法监测血FGF-19、FGF-21的水平的变化；计算肝脏指数、HE和油红染色观察肝脏形态学变化和肝脏内脂质蓄积的情况；分析糖尿病大鼠血FGF-19、FGF-21的水平与糖尿病大鼠血生化、肝脏指数、肝脏内脂肪含量的相关性；采用Real-timePCR技术和Westernblot技术检测利拉鲁肽对肝脏FGF-19、FGF-21转录激活因子CREBH、PPAR-α的表达影响情况；进而检测利拉鲁肽对AMPK信号通路关键基因和脂代谢关键酶基因的表达水平。结果：1.利拉鲁肽可显著降低糖尿病大鼠血糖、血TG、TC水平和显著改善大鼠体重、肝脏指数。2.糖尿病组大鼠肝脏脂肪样变明显,利拉鲁肽可显著降低大鼠肝脏炎性活动指数和脂肪含量,减轻糖尿病大鼠非酒精性脂肪样病变。3.利拉鲁肽可显著升高血FGF-19、FGF-21的水平。4.血FGF-19、FGF-21水平与糖尿病大鼠肝脏指数、肝脏内脂肪蓄积成都成反比。5.糖尿病大鼠肝脏CREBH、PPAR-α的表达显著降低,而利拉鲁肽可明显增加糖尿病大鼠肝脏CREBH、PPAR-α的表达。6.利拉鲁肽可促进糖尿病大鼠肝脏FGFR的表达。其中利拉鲁肽促进FGFR1的表达增加量达57%、FGFR3增加49%,、FGFR4增加82%而对FGFR2的表达无明显增加。7.利拉鲁肽可上调AMPKα1以及p-AMPK的表达,而对AMPKa2表达的影响无统计学差异。8.利拉鲁肽可明显促进糖尿病大鼠肝脏脂肪酸p氧化关键酶CPT-1mRNA的表达,显著抑制脂肪合成关键酶FAS、SREBP-1、HMGRmRNA的表达。9.利拉鲁肽可显著提高糖尿病患者血FGF19、FGF21的水平、改善糖尿病患者肝脾比值(L/S)。结论：利拉鲁肽可通过升高糖尿病大鼠血FGF-19、FGF-21水平,上调肝脏FGFR的表达水平,激活AMPK信号通路,调节糖尿病大鼠肝脏脂代谢关键酶的表达水平,从而对糖尿病肝脏非酒精性脂肪肝病起着保护作用。
【作者】白莲；
【导师】于德民；
【作者基本信息】天津医科大学，内科学（专业学位），2014，博士
【关键词】糖尿病；利拉鲁肽；非酒精性脂肪肝；胰岛素抵抗；碱性成纤维细胞生长因子19；碱性成纤维细胞生长因子21；

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