不稳定心绞痛患者循环miR-223水平与抗血小板药物治疗期间血小板反应性的相关研究

【摘要】研究目的：血小板活化与聚集是动脉粥样硬化血栓形成的病理生理基础之一。在临床实践,即使应用了标准的阿司匹林联合氯吡格雷的双联抗血小板治疗,仍有部分冠心病患者可发生血栓事件。此现象可能与治疗后血小板高反应(highon-treatmentplateletreactivity,HTPR)有关。随着氯吡格雷的广泛应用,氯吡格雷低反应不断被报道。目前,有许多实验室方法可以检测患者对抗血小板药物的反应性。我们的前期工作证实冠心病患者血小板microRNA-223(miR-223)的表达水平与服用氯吡格雷后血小板的反应性存在负相关。本研究旨在探索循环miR-223与冠心病患者服用氯吡格雷后的反应性的关系。研究内容与方法：连续纳入2012年11月至2013年01月在武警后勤学院附属医院心脏中心就诊的经冠脉造影证实的不稳定型心绞痛(unstableanginapectoris,UAP)患者。入选患者于采集血样前24小时口服300mg阿司匹林和300mg氯吡格雷,或口服300mg阿司匹林和75mg氯吡格雷5天以上。记录患者的一般临床资料及用药情况;进行各项血细胞参数、生化参数的检验、进行心脏超声心动图检查以及冠脉造影检查及必要的介入治疗。对冠脉病变进行Gensini评分及Syntax评分。以二磷酸腺苷(adenosinediphosphate,ADP)诱导的血小板聚集率和通过流式细胞术测定的血小板血管舒张剂刺激磷蛋白(vasodilatorstimulatedphosphoprotein,VASP)磷酸化水平,判断患者在服用氯吡格雷后血小板反应活性的情况。提取患者血浆中的总miRNA,对与血小板P2Y12受体mRNA3’非编码区结合的miR-223表达进行实时定量聚合酶链反应(realtimepolymerasechainreaction,Real-timePCR)。提取基因组DNA,对CYP2C19*2/*3基因片段进行PCR扩增,并针对该基因突变位点进行限制性内切酶酶切,通过琼脂糖凝胶电泳进行限制性片段长度多态性分析。结果：1.共入选经冠脉造影证实的冠心病,不稳定心绞痛患者62例,根据流式细胞术测定的VASP磷酸化水平即血小板反应指数(plateletreactivityindex,PRI)的中位数水平(56.3%)将入选患者分成2组：正常反应组,即PRI≤56.3%,n=31,平均年龄60.52±8.88,男性14例,女性17例；低反应组,即PRI>56.3%,平均年龄57.68±10.60,男性19例,女12例。①两组患者的年龄、性别构成、平均体重、血压、心率等基础资料无统计学差异(P>0.05)。②两组患者的心血管疾病史、伴发疾病情况及临床主要心血管用药情况无统计学差异(P>0.05)。③两组患者的左室射血分数(LVEF)及左室舒末径(1eftventriculardiastolicenddiameter,LVDED),各项血细胞参数及生化参数均无统计学差异(P>0.05)。④CYP2C19基因多态性分析显示两组患者CYP2C19*2/*3基因携带比例差异无统计学意义(P>0.05)⑤两组患者冠脉Syntax评分及Gensim评分无统计学差异(P>0.05)。⑥与正常反应组组比较,低反应组血浆miR-223相对表达水平下调,有统计学差异(P=0.008)2.根据光比浊法测定的血小板聚集率(plateletaggregation,PAG)的中位数水平(74.5%)重新将入选患者分成2组：正常反应组(PAG≤<74.5%)和低反应组(PAG>74.5%)①两组患者的年龄、性别构成、平均体重、血压、心率等基础资料无统计学差异(P>0.05)。②两组患者的心血管疾病史、伴发疾病情况及临床主要心血管用药情况无统计学差异(P>0.05)。③两组患者的心脏功能及房室腔大小,各项血细胞参数及生化参数均无统计学差异(P>0.05)。④YP2C19基因多态性分析显示两组患者CYP2C19*2/*3基因携带比例差异无统计学意义(P>0.05)⑤两组患者冠脉Syntax评分及Gensim评分无统计学差异(P>0.05)。⑥与正常反应组组比较,低反应组血浆miR-223相对表达水平有降低,但差异无统计学差异(P>0.05)3.①相关分析显示血浆miR-223相对表达水平与血小板反应性PRI呈负相关性(Spearmanr=-0.379,P=0.002)。②将可能影响氯吡格雷反应性的临床因素包括：血浆miR-223相对表达水平、CYP2C19*2/*3基因多态性、年龄、性别、吸烟、合并糖尿病、应用质子泵抑制剂、应用钙拮抗等作为校正变量引入Logistic回归模型后,显示血浆miR-223相对表达水平是预测血小板对氯吡格雷低反应的独立相关因素。③以PRI中位数为分界点定义氯吡格雷正常反应组和低反应组,ROC曲线分析显示miR-223相对表达水平能够有效鉴别血小板低反应和正常反应者。(AUC=0.700,P=0.00895%CI:0.562-0.833)。结论：本研究首次证实血浆miR-223相对表达水平与不稳定型心绞痛患者服用标准双联抗血小板药物期间血小板的高反应相关,提示血浆miRNA-223水平可以作为评价冠心病患者对氯吡格雷反应性的新的血浆标志物。
【作者】张莹莹；
【导师】李玉明；
【作者基本信息】天津医科大学，内科学（专业学位），2014，博士
【关键词】冠心病；氯吡格雷；循环；miR-223；VASP；CYP2C19~*2；CYP2C19~*3；

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