微管相关蛋白（MAP4）影响食管鳞癌细胞侵袭迁移的分子机制研究

【摘要】食管癌依然是严重危害人类健康的恶性肿瘤,抑制肿瘤细胞对周围组织的侵袭以及转移是有效治疗食管癌提高患者生存率的关键。寻找与食管癌侵袭迁移密切相关的基因、并对之进行功能研究,是当前的主要研究方向之一。我们实验室前期工作中发现了与肿瘤细胞侵袭、迁移和失巢凋亡相关的基因CTTN(cortactin),利用GST-PullDown和LC-MS/MS技术,鉴定出微管相关蛋白(Microtubule-associatedprotein4,MAP4)存在于CTTN蛋白的复合体中。MAP4基因定位于3p21,其编码蛋白的主要功能是通过与微管蛋白结合稳定微管结构。目前MAP4在肿瘤中的功能几乎没有报道,为此我们对该基因在食管癌中发挥的功能以及作用机制进行了深入研究。利用组织微阵列联合免疫组织化学技术分析发现MAP4在364例食管癌中存在过表达,阳性率为62.6%。统计学分析发现,MAP4表达与淋巴结转移(P=0.0003)、病理分期(P=0.0010)以及患者术后生存时间较短(P=0.026)相关,Cox回归分析表明MAP4可作为食管鳞癌患者的独立预后因子(P=0.007)。我们选取高表达MAP4的Eca109和KYSE150,以及低表达MAP4的KYSE180食管癌系进行了体外功能实验,结果显示MAP4过表达不影响细胞的增殖、细胞周期和粘附能力,但敲降MAP4能明显抑制肿瘤细胞的划痕愈合、运动穿膜以及Matrigel侵袭能力。动物体内实验显示,MAP4表达降低可抑制裸鼠皮下瘤生长和实验性肺转移。针对MAP4影响食管癌细胞侵袭迁移能力这一表型,我们进一步探讨了MAP4发挥功能的分子机制。当降低MAP4表达时,Real-timePCR和Westernblot结果显示,血管内皮生长因子(VEGFA)在mRNA和蛋白水平均下调,敲降VEGFA后,食管癌细胞的侵袭迁移能力降低。检钡VEGFA的受体VEGFRl和、EGFR2,发现在食管癌细胞系中VEGFRl表达量远远高于、EGFIR2,而且降低VEGFR1表达,细胞侵袭迁移能力也降低。这些结果提示,食管癌细胞系中MAP4在转录水平调节VEGFA,并通过VEGFA/VEGFRl下游通路影响食管癌细胞侵袭迁移能力。利用相同食管癌手术组织的连续切片分析发现,MAP4与VEGFA和VEGFR1蛋白的表达显著正相关。我们继而检测了与细胞侵袭迁移相关的信号通路关键节点分子,发现MAP4影响ERKl/2的磷酸化水平。敲降ERKl/2,发现细胞侵袭迁移的能力降低,而且VEGFA蛋白水平下降。免疫共沉淀(CO-IP)结果提示MAP4能与ERK1/2相互作用。机制分析结果显示,MAP4通过与ERKl/2相互作用,调节VEGFA,而且VEGFA和ERK1/2存在反馈调节,最终影响食管癌细胞的侵袭迁移。抑瘤实验结果显示,利用食管癌细胞诱导的皮下瘤内注射MAP4-siRNA,肿瘤的体积在注射两天后开始缩小；尾静脉注射贝伐单抗也能抑制瘤体生长；当瘤体注射MAP4-siRNA联合尾静脉注射贝伐单抗时,抑瘤效果不仅高于单独注射MAP4-siRNA,也优于单独注射贝伐单抗。这些资料表明,MAP4通过激活ERK1/2-VEGFA/VEGFR1-ERK1/2通路增强食管癌细胞的侵袭迁移能力,MAP4有可能可以作为独立的食管鳞癌预后标志物,并且可能成为食管鳞癌治疗的的分子靶点。
【作者】蒋焱熠；
【导师】王明荣；
【作者基本信息】北京协和医学院，细胞生物学，2014，博士
【关键词】MAP4；侵袭；迁移；食管鳞癌；

【参考文献】
[1]朱冬静.国外城乡关系研究动态及其启示[D].安徽大学,社会学,2013,硕士.
[2]杨向荣,宋擒豹,沈钧毅.基于数据挖掘的智能化入侵检测系统[J].计算机工程,2001,09:17-18+102.
[3]李白云.山地庭园空间营造的研究与实践[D].浙江大学,风景园林,2013,硕士.
[4]呼达古拉.阿拉善盟蒙古语的使用情况研究[D].内蒙古师范大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[5]李雪芳.现代汉语动补结构歧义研究[D].广西师范大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[6]胡军.青藏高原湖泊表层沉积物磁化率特征及环境意义[D].兰州大学,环境科学,2013,硕士.
[7]葛建润.MIMO MRC合作无线通信系统性能研究[D].杭州电子科技大学,通信与信息系统,2012,硕士.
[8]高段.冷弯薄壁卷边槽钢受弯构件畸变屈曲性能研究[D].武汉理工大学,结构工程,2013,硕士.
[9]王颖,苏宝根,邢华斌,鲍宗必,张治国,杨启炜,杨亦文,任其龙.离子液体在微乳液聚合中的应用[J].现代化工,2014,02:38-43.
[10]吕一男.遗传算法在机务段整备区股道安排问题中的应用研究[D].北京交通大学,2014.
[11]孙娟.运动性低血色素形成中大鼠十二指肠铁吸收蛋白表达的动态变化[D].河北师范大学,运动人体科学,2012,硕士.
[12]张子刚.Sesterstatins类似物的合成及活性研究[D].华东理工大学,制药工程与技术,2013,硕士.
[13]褚渊博,袁朝辉,张颖.射流管式伺服阀冲蚀磨损特性研究[J].航空学报.
[14]任军效.建筑业安全文化建设中的农民工思想政治教育研究[D].西安科技大学,思想政治教育,2013,硕士.
[15]王芸.从女性主义翻译理论视角看苔丝形象的传译[D].湖南农业大学,外国语言学及应用语言学,2012,硕士.
[16]赵刚.中国联通巴市分公司产品毛利指标体系设计与应用研究[D].内蒙古大学,工商管理,2013,硕士.
[17]孙宏志.小型无线电监测系统设计[D].吉林大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[18]神碧莹.高校MPA教育中心管理人员管理过程的激励问题研究[D].华南理工大学,公共管理（专业学位）,2012,硕士.
[19]黄葆荷.基于织物组织结构的光纤侧发光系统研究[D].浙江理工大学,纺织材料与纺织品设计,2013,硕士.
[20]井锋.西门子SinamicsS120与PLC在J056精镗床改造中的应用[D].长安大学,检测技术与自动化装置,2013,硕士.
[21]吉晓苹.一花一世界（结题报告）[D].重庆大学,艺术（专业学位）,2014,硕士.
[22]李宜泽.我国公民网络政治参与现状及对策研究[D].郑州大学,思想政治教育,2013,硕士.
[23]赵蓓.基于网络视角的长三角高新技术产业集群升级研究[D].南京师范大学,管理科学与工程,2012,硕士.
[24]董晓荣.建设工程价款优先受偿权研究[D].沈阳师范大学,法律,2014,硕士.
[25]王甫.城市配送中心信息管理研究[D].西南交通大学,管理科学与工程,2012,硕士.
[26]刘坚强.多媒体物理课堂教学软件的设计研究[D].湖南师范大学,物理课程与教学论,2004,硕士.
[27]栗勇.红枫湖大桥挂篮施工方法研究[D].大连理工大学,桥梁与隧道工程,2003,硕士.
[28]辛星.大学生成人依恋、社会支持与焦虑的关系[D].河北师范大学,应用心理,2013,硕士.
[29]于乾乾.NaCl溶液中离子注入铌316不锈钢的电化学行为[D].大连海事大学,材料工程,2014,硕士.
[30]戎默.叶适文学创作与学术思想关系研究[D].华东师范大学,中国古代文学,2013,硕士.
[31]王茹娟.磁性分子印迹聚合物的制备及吸附性能研究[D].兰州理工大学,材料学,2014,硕士.
[32]张秋英.天津市田径裁判员现状调查的分析与研究[D].天津体育学院,运动训练（专业学位）,2014,硕士.
[33]刘景帅.快速凝固CuNiSiCrZn合金的组织与性能研究[D].江苏科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[34]杭的平.4000kN·m能级强夯黄土边坡动态响应规律的研究[D].中北大学,工程力学,2014,硕士.
[35]郭景云.华德福幼儿教育思想及对我国早期教育的启示[D].河北师范大学,教育管理,2013,硕士.
[36]段秀明,杨清娟.轧机用四列圆柱滚子轴承的选用要点[J].一重技术.2007(01)
[37]杨庆.我国《促进科技成果转化法》对科技创新的影响研究[D].渤海大学,科学技术哲学,2013,硕士.
[38]李合菊.基于WCDMA无线网络优化的研究[D].山东大学,电子与通信工程（专业学位）,2012,硕士.
[39]顾愿愿.雌激素残留检测技术的研究与应用[D].宁波大学,食品科学,2014,硕士.
[40]何芳.高中生物小组合作教学与传统教学模式比较的研究[D].苏州大学,学科教学,2014,硕士.
[41]许红梅,高琼,黄永梅,贾海坤.黄土高原森林草原区6种植物光合特性研究[J].植物生态学报,2004,02:157-163.
[42]熊亚东.FeCuNbSiB纳米晶软磁粉芯的制备和磁性能研究[D].浙江大学,材料科学与工程,2013,硕士.
[43]江慧霞.矿山建设领域业务基础平台构件集成研究[D].河北工程大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[44]李伟贤.包商银行微小企业贷款业务技术模式研究[D].内蒙古大学,工商管理,2012,硕士.
[45]刘凤彩.基于WiMAX系统的CTC编译码的研究与实现[D].西安电子科技大学,软件工程,2012,硕士.
[46]杨晓宇,董群峰,岳丽华.基于多事务间序列模式的动态数据分布算法[J].计算机工程与应用,2003,26:168-171+223.
[47]刘文文.自由基亲疏水结构及活性对真丝接枝共聚合反应研究[D].浙江理工大学,纺织化学与染整工程,2013,硕士.
[48]赵嫦.二氧化硅气凝胶膜及复合节能镀膜玻璃的制备及性能研究[D].浙江大学,材料科学与工程,2014,硕士.
[49]夏翔.水泥厂质量管理系统及其优化管理平台的设计与实现[D].四川大学,2003.
[50]李荣荣.建国初期高校思想政治教育特点研究[D].贵州财经大学,思想政治教育,2013,硕士.