Notch1诱导的小鼠白血病环境对正常造血干祖细胞作用机制的研究

Notch1诱导的小鼠白血病环境对正常造血干祖细胞作用机制的研究

作者:师大云端图书馆 时间:2015-06-06 分类:论文格式 喜欢:3143
师大云端图书馆

【摘要】目的:白血病是造血系统的恶性肿瘤,其特点是骨髓及其它造血组织中正常血细胞生成减少,白血病细胞进行性异常增生、浸润并损害各种组织、器官,并进入外周血液,使外周血白细胞发生质和量的异常。白血病临床表现主要有贫血,出血,发热,感染。白血病的病因复杂,病毒因素、化学因素、放射因素、遗传因素都在白血病的发生发展中起重要作用。目前对于白血病的研究主要集中在白血病细胞,但是对于白血病环境下残余的正常造血干细胞(HSC)的功能变化及其机制还没有深入研究。本课题以急性T淋巴细胞白血病为模型,研究白血病宿主体内残留的正常造血细胞功能变化的相关机理。方法:1.将过表达Notch1胞内结构域(ICN1)的逆转录病毒载体MSCV-ICN1-IRES-GFP感染C57BL/6小鼠骨髓LinScal+细胞(CD45.2)。实验组将106过表达ICN1-GFP的白血病细胞与107B6.SJL鼠(CD45.1)骨髓有核细胞尾静脉注入到9.5Gy照射后的C57BL/6受体小鼠,建立白血病小鼠模型。对照组以108C57BL/6小鼠的骨髓细胞替代白血病细胞。移植后流式细胞术检测外周血、骨髓中正常造血细胞和白血病细胞比例,H.E.染色检测白血病细胞在各种组织中的浸润。并在建模后第三天利用BrdU分析正常HPC(Lin-c-Kit+Scal-)处于S期的比例。第十天应用Hoechest/PY分析正常HSC(Lin-c-Kit+Scal+)处于G0/G1期的比例。2.建模后第十天,分选白血病环境下的正常HSC,送做基因芯片。并通过RealtimeRT-PCR对芯片结果中的相关基因进行验证,尤其是Hes1基因在白血病环境下正常HSC、HPC中的表达差异以及和对照组HSC、HPC的表达差异。3.构建Hes1过表达的逆转录病毒载体MSCV-Hesl-IRES-GFP,包装293T,病毒上清感染B6小鼠Lin-细胞,将5×104Hes1-GFP+细胞与106白血病细胞共同移植入致死剂量照射后的C57鼠,并注入107CD45.1+Lin+细胞作为保护细胞,构建骨髓Lin-细胞过表达Hes1的小鼠白血病模型。对照组使用空载体MSCV-IRES-GFP感染B6鼠Lin-细胞后,以相同数量与白血病细胞、保护细胞共同植入照射后的受体鼠。4.分选Hes1感染后的GFP+细胞做CFU。Hes.1过表达模型建模后第十天,应用流式分析骨髓中Hes1+in-造血细胞及Hes1+SPC的植入率。5.在T-ALL白血病小鼠模型移植后第十天,ELISA测外周血血清和骨髓中分泌型SCF的浓度,westernblot检测骨髓细胞SCF的表达量。并用RealtimePCR睑测外周血细胞,脾细胞,骨髓细胞及骨髓中白血病细胞和正常造血细胞SCF表达水平。统计学分析:计量资料比较采用student’sttest,计数资料比较采用Χ2test。最大似然法采用统计软件L-CalcTM分析,生存资料采用Prism4.0软件分析。结果:100%白血病组小鼠在3周内发白血病,中位生存时间13天。10天后,发病小鼠肝、脾肿大,13天时外周血和骨髓细胞白血病细胞(GFP+细胞)占90%以上,CD4+CD8+细胞占80%左右,正常造血干祖细胞频率及绝对数下降。细胞周期分析发现在发病早期HPC增殖加快,发病晚期HSC大多处于静止期。芯片结果显示HSC中与细胞周期,增殖,归巢,粘附相关的许多基因表达发生改变,Hes1在白血病环境下正常HSC中的表达升高,但在HPC中的表达无明显差异。过表达Hes1的体外功能试验结果显示Hes1过表达造血祖细胞CFU形成能力显著下降。过表达Hes1的体内功能试验结果显示Hesl+Lin-细胞及Hesl+HSPC在骨髓中的植入率升高。白血病小鼠SCF蛋白表达水平比对照组高,但RealtimePCR结果显示在外周血、脾、骨髓等白血病细胞占大多数的组织中,白血病小鼠SCF的RNA水平明显低于对照,从骨髓分选的白血病细胞,其SCF的RNA表达水平也低于对照。与此相反,骨髓中的正常造血细胞SCF表达水平是对照小鼠的4.52倍。结论:1.基因芯片结果显示在白血病环境下,正常HSC中与细胞增殖,粘附,归巢相关的基因如CXCR4,Mmp2,Itgb3,Hes1,p21表达改变,使HSC处于更稳定的周期状态中。2.Hes1在白血病中HSC和HPC的差异表达提示HSC和HPC中Hes1对白血病环境的不同反应造成造血干祖细胞的不同命运。3.体外实验显示Hes1对HPC的细胞周期有抑制作用,体内试验也说明Hes1过表达对于白血病环境下造血干祖细胞数量的维持有一定的保护作用,提示Hes1高表达是白血病环境下正常造血干细胞功能可逆性受抑的机制之一。4.在T-ALL白血病环境下,外周血和骨髓中SCF的蛋白表达升高,但白血病细胞SCFmRNA量低于对照,正常细胞反而升高,提示SCF是非白血病细胞对白血病环境的一种反应而分泌的。
【作者】田晨;
【导师】程涛;
【作者基本信息】北京协和医学院,细胞生物学,2011,博士
【关键词】造血干细胞;造血祖细胞;急性T淋巴细胞白血病;SCF;Hesl;保护;细胞周期;

【参考文献】
[1]王娜娜.成人双颌前突患者正畸治疗后上颌切牙区牙槽骨密度变化的研究[D].山东大学,口腔临床医学,2013,硕士.
[2]张春艳.宁夏国大药房连锁有限公司营销策略研究[D].宁夏大学,工商管理(专业学位),2014,硕士.
[3]赵杰,孙涛,孙明德.铁路预应力简支T梁的内力和挠度计算[J].四川建筑,2015,02:127-130.
[4]任斌全.网络环境下企业技术创新组织问题研究[D].西安理工大学,技术经济及管理,2004,硕士.
[5]高玉.浙江省小康体育村体育场地设施建设研究[D].宁波大学,体育人文社会学,2013,硕士.
[6]张晓光.《德国旅游》翻译实践报告[D].郑州大学,翻译(专业学位),2013,硕士.
[7]罗凤.保健型景观设计在成都国际医学城的应用研究[D].西南交通大学,艺术设计,2014,硕士.
[8]黄淼,王昕,王振雷.非线性零阶接近有界多模型神经网络自适应控制器[J].控制与决策,2013,09:1315-1321.
[9]张全,樊治平,潘德惠.区间数多属性决策中一种带有可能度的排序方法[J].控制与决策,1999,06:703-706+711.
[10]冯海清.隔姜灸治疗产后尿潴留临床疗效观察[D].福建中医药大学,针灸推拿学(专业学位),2014,硕士.
[11]于谦.基于分簇的无线传感器网络低能耗路由算法研究[D].江苏科技大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[12]钱晓明.关于香港行政主导政治体制的法律思考[D].上海大学,法律,2014,硕士.
[13]李伟.基于CAN总线的土工三轴仪控制系统的研制[D].大连理工大学,机械制造及其自动化,2004,硕士.
[14]杨熙.网络对大学生思想政治教育的影响及对策研究[D].长春工业大学,思想政治教育,2013,硕士.
[15]孙晓然.纳米碳/磷酸铁锂复合材料的原位合成及其在锂离子电池中的应用[D].天津大学,材料学,2013,硕士.
[16]韩京元,田彦涛,孔英秀,赵博昊,李聪.板球系统的间接模糊自适应控制[J].控制与决策,2015,02:303-310.
[17]郝英,孙健国,白杰.航空燃气涡轮发动机气路故障诊断现状与展望[J].航空动力学报,2003,06:753-760.
[18]袁偲.基于超材料的太赫兹调制、滤波器件的设计及性质的研究[D].天津大学,2014.
[19]王阔.论行政许可的撤销[D].辽宁大学,法律,2012,硕士.
[20]申军涛.基于RFID/ZigBee实验室设备远程监控系统的设计[D].河北大学,检测技术与自动化装置,2014,硕士.
[21]胡静.“大跃进”时期河南永城农村公共食堂研究[D].安徽大学,中国近现代史,2014,硕士.
[22]林凤梅.故障树分析及仿真方法在球磨机传动系统中的应用研究[D].华北电力大学(河北),机械设计及理论,2004,硕士.
[23]张荣荣.移动交易型虚拟社区大学生用户的使用需求与意愿研究[D].西南交通大学,传播学,2013,硕士.
[24]顾文娟.磁性膜系统的铁磁共振现象研究[D].扬州大学,凝聚态物理,2012,硕士.
[25]李响,谭南林,王天雷,苏树强.复杂场景下基于局部运动补偿的目标检测[J].仪器仪表学报,2014,07:1555-1563.
[26]朱叶叶.两套小学英语教材的实用性比较研究[D].宁波大学,学科教育(专业学位),2013,硕士.
[27]梁晨.美术馆公共教育功能实现的途径和方法[D].渤海大学,美术学,2014,硕士.
[28]宋爱波,吴哲辉,董逸生.一类受控Petri网的反馈控制[J].自动化学报,2002,05:832-837.
[29]阮小娥,李换琴,万百五.滞后工业过程稳态优化进程中的局部对称双积分型迭代学习控制(英文)[J].自动化学报,2003,01:125-129.
[30]翁祥栋.大学生就业管理中的政府行为研究[D].山东大学,行政管理,2013,硕士.
[31]张婵娟.妇科癌症术后化疗患者创伤后应激障碍症状及影响因素[D].山东大学,护理学,2013,硕士.
[32]王静,孙彦广,王朝玉.基于JaguarCTS的中间件技术在企业信息管理系统中的应用[J].冶金自动化,2003,02:44-46+55.
[33]杨金成,强军锋,田欣伟,王晓刚,田玉仙,聂丽华,彭龙贵,余竹焕.煤新型气化的气体参数分析[J].煤炭转化.2006(03)
[34]孙所辉.GRIM-19和STAT3基因在脑胶质瘤中的表达及意义[D].郑州大学,外科学,2013,硕士.
[35]张真.五苓散加减方治疗中重度脾肾两虚型卵巢过度刺激综合征[D].福建中医药大学,中西医结合临床(专业学位),2013,硕士.
[36]郑慧.黔毕威高速公路K93岩质高边坡稳定性分析与开挖加固数值模拟研究[D].成都理工大学,地质工程,2013,硕士.
[37]于泠.网络攻击的有效防范技术研究[D].南京师范大学,2002.
[38]傅丹丹.基于EAP致动器的动态控制建模的基础研究[D].杭州电子科技大学,机械电子工程,2014,硕士.
[39]何金.大气压射频放电等离子体活性粒子演化特性的数值模拟研究[D].山东大学,高电压与绝缘技术,2013,硕士.
[40]马玉霞.保护性脂肪与苜蓿对热应激及低质粗饲料条件下奶牛的营养调控效果[D].河南农业大学,动物营养与饲料科学,2004,硕士.
[41]庄知龙.基于CFD的变体飞行器变形过程气动特性及控制问题研究[D].南京航空航天大学,控制理论与控制工程,2012,硕士.
[42]苏丹娅.基于MOLDFLOW平台的电动刨锯外壳产品模流分析[D].山东大学,机械工程(专业学位),2012,硕士.
[43]苏雅拉玛.汉俄语中习俗词语与文化比较[D].内蒙古大学,汉语言文字学,2014,硕士.
[44]李载源.便携式B型超声膀胱测容仪的研究与设计[D].长安大学,检测技术与自动化装置,2014,硕士.
[45]王文娇.“体验式教学法”在羽毛球教学中的应用研究[D].沈阳体育学院,体育教育训练学,2013,硕士.
[46]翟蕾.《红高粱》中反讽话语的认知识解[D].西南大学,英语语言文学,2014,硕士.
[47]张孝廉.大豆E3泛素连接酶基因GmARI的克隆与功能验证[D].南京农业大学,作物遗传育种,2012,硕士.
[48]李文莉.我国内幕交易的法律规制研究[D].安徽大学,法律,2003,硕士.
[49]李海英.我国食品安全监管行政异体问责研究[D].山东大学,公共管理(专业学位),2013,硕士.
[50]刘蓓蓓.洛阳城市建设勘察设计院有限公司竞争策略研究[D].河南科技大学,工商管理(专业学位),2013,硕士.

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