ARID1A在肝癌侵袭转移中的作用及其机制研究

ARID1A在肝癌侵袭转移中的作用及其机制研究

作者:师大云端图书馆 时间:2015-06-06 分类:期刊论文 喜欢:1532
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【摘要】肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)(简称肝癌)是我国发病率最高的恶性肿瘤之一,虽然有关肝癌的研究已取得很大进展,但由于其极高的转移/复发率,肝癌病人总体5年生存率仅有5%左右。目前,肝肿瘤切除术和肝移植仍然是治疗肝细胞肝癌最有效的标准方案,因此,探索肝癌转移复发的机制,了解肿瘤的侵袭转移能力,预测患者预后,寻找有效的抑制途径,成为进一步提高肝癌患者生存率的关键。肿瘤的发生发展、转移侵袭是一个复杂的、多因素作用的过程。从分子生物学的角度来看,肝癌是一种基因疾病。是某些染色体上的DNA损伤导致基因突变的结果,包括癌基因、抑癌基因、细胞凋亡基因、细胞周期调节基因、及维持细胞基因组稳定性的基因(如DNA修复、DNA复制及染色体分离基因)等,是一个多阶段逐步演化的过程。AT丰富结合域1A基因(theAT_richinteractivedomain1AARID1A)最早是作为染色质重塑复合物SWI/SNF(switch/sucrosenon-fermenting)家族的一员被人们发现的。近年来的研究表明,它是一个重要的抑癌基因,与细胞增殖密切相关,在肿瘤的发生发展、转移复发过程中发挥重要作用。至今,ARID1A对肝癌的影响尚未有明确报道。本实验主要研究ARID1A基因对肝癌生物学特性的影响。首先,检测ARID1A在40例肝癌及相应癌旁组织以及不同转移潜能肝癌细胞系中的表达差异;接着利用组织芯片技术对396例原发性肝癌手术切除的患者标本进行研究分析,研究ARID1A表达与肝癌发生、发展以及预后的相关性;通过转染与干扰调节ARID1A表达后,进行一系列体外和体内实验,研究ARID1A的表达对肝癌细胞生长增殖、侵袭转移方面的影响,最后探讨ARID1A抗肿瘤效应的可能机制,以期为防治肝癌提供新的靶点。第一部分ARID1A在肝癌组织及肝癌细胞系中的表达研究目的:研究ARID1A在肝癌细胞株,肝癌及相应癌旁组织中的表达差异,分析其与肝癌发生的关系。方法:应用荧光定量PCR、WesternBlot及免疫组织化学方法检测ARID1A在40例肝癌及相应的癌旁组织和正常肝组织中的表达。应用荧光定量PCR、免疫组织化学及WesternBlot检测不同转移潜能肝癌细胞系中ARID1A的表达情况。结果:Real-timeRT-PCR检测结果分析显示:ARID1A基因在肝癌组织的相对表达量(0.005±0.0003)明显低于癌旁组织(0.0934±0.012),差异有统计学意义(P<0.05)。复发组肝癌组织(0.006±0.0001)ARID1A表达低于未复发组(0.023±0.005),差异有统计学意义(P<0.001)。复发组与未复发组的正常肝组织中ARID1A稳定表达,与预后无相关性。Western-Blot检测结果同样显示肝癌组织ARID1A基因表达低于癌旁组织,差异显著(P<0.05)。复发组与未复发组的正常肝组织中ARID1A稳定表达,与预后无相关性。在细胞研究中:免疫组化显示ARID1A表达情况与肝癌细胞系的转移潜能呈负相关(P<0.05)。Real-timePCR显示,ARID1A的表达,与肿瘤的恶性程度密切相关,ARID1A表达越高,肿瘤的恶性程度越低,ARID1A表达越低,肿瘤的恶性程度越高。结论:ARID1A在肝癌发生、发展中可能有重要的作用第二部分ARID1A表达与肝癌临床病例特征及相关性研究目的:研究ARID1A基因在原发性肝癌中的表达情况,探讨ARID1A在肝癌及癌旁组织中的表达差异、相关性、与原发性肝癌的关系及临床意义。方法:检测包含396例肝癌(癌旁)组织的组织芯片中ARID1A基因的表达情况,统计分析两者与肝癌临床病理特征及预后的关系。结果:ARID1A蛋白的过表达与肝癌患者性别(P=0.036)、血管侵犯(P=0.193)、ALT(P=0.031)、Child-pugh分级(P=0.607)、BCLCstage(P=0.043)有关。ARID1A表达阳性组5年总体生存率及无病生存率明显高于ARID1A表达阴性组。分层Kaplan-Meier分析ARID1A表达显示:在高AFP组、肝硬化组、肿瘤大于5cm组中,肝癌组织中ARID1A过表达的患者OS和DFS高于低表达患者。多因素分析表明肿瘤大于5cm,有微血管侵犯,ARID1A表达阴性是影响OS的独立预后因素;肿瘤小于5cm,无微血管侵犯,ARID1A表达阳性是影响DFS的独立预后因素。结论:肝癌组织中ARID1A的低表达与原发性肝癌的侵袭、转移及预后不良相关。第三部分调节ARID1A基因表达对肝癌细胞侵袭与转移的影响及机制研究目的:研究ARID1A与肝癌细胞侵袭、转移的关系及作用机制方法:利用慢病毒质粒载体在M3和Hep-3B细胞株中分别转染促进ARID1A表达的TALE-VP64质粒和降低ARID1A表达的shARID1A干扰质粒,从而构建M3-ARID1A和Hep3B-shARID1A稳定细胞系。经Western-Blot,qRT-PCR验证ARID1A表达改变后,Transwell法研究细胞迁移、侵袭能力变化;MTT检测细胞增殖能力变化;流式细胞术检测细胞凋亡能力变化。同时研究ARID1A基因表达改变后,细胞中PTEN、PIK3CA、p53、MMP9、VEGF的表达变化;将细胞接种于裸鼠皮下建立成瘤模型,研究转染前后细胞成瘤能力变化,免疫组化检测裸鼠成瘤切片中PTEN,PIK3CA、p53、MMP9、VEGF的表达情况。结果:慢病毒转染下调低转移能力的Hep3B细胞中ARID1A表达和上调高转移能力的HCCLM3细胞的ARID1A表达,建立稳定细胞株。ARID1A表达改变后,体外能明显改变肝癌细胞的迁移、侵袭、增殖和凋亡能力;体内能改变癌细胞成瘤能力。ARID1A上调后,PTEN、p53、PIK3CA基因表达均明显上调,而MMP9和VEGF基因表达均明显下调;ARID1A下调后,PTEN、p53、PIK3CA基因表达均明显下调,而MMP9和VEGF基因表达明显上调。证明ARID1A基因在肝癌中具有明显的抑癌作用。结论:肝癌细胞ARID1A表达上调或下调能降低和促进肝癌的侵袭与转移的能力。
【作者】孙鼎;
【导师】钱海鑫;秦磊;
【作者基本信息】苏州大学,外科学,2014,博士
【关键词】ARID1A;原发性肝癌;侵袭转移;预后;转染;信号转导;

【参考文献】
[1]易如方.射频天线的遗传算法自适应阻抗匹配[D].湖南大学,电气工程,2011,硕士.
[2]陶占东.频率上转换荧光光谱技术及其在生物大分子动力学中的应用[D].华东师范大学,光学,2013,硕士.
[3]于鸿莹,陈莹婷,许振柱,周广胜.内蒙古荒漠草原植物叶片功能性状关系及其经济谱分析[J].植物生态学报,2014,10:1029-1040.
[4]薛源.117例肝门部胆管癌病人外科治疗及其预后分析[D].山西医科大学,外科学(专业学位),2013,硕士.
[5]穆军.我国人口老龄化背景下精神养老体系的构建[D].东北师范大学,公共管理(专业学位),2012,硕士.
[6]史倩倩.非金属掺杂与磺化碳纳米管的制备、表征与氧还原电催化性能[D].华南理工大学,2014.
[7]王利.迷走神经刺激对KA致痫大鼠海马星形胶质细胞GFAP的影响[D].辽宁医学院,生理学,2012,硕士.
[8]陆福宪.在温室效应学术讨论会上的讲话[J].上海环境科学.1990(09)
[9]本报记者吴苡婷.打造“贯通式”科研集团军[N].上海科技报,2013-12-18006.
[10]李新德,董清泉,王丰羽,雒超民.一种基于马尔科夫链的冲突证据组合方法[J].自动化学报,2015,05:914-927.
[11]何霞.基于翻译模式的BPEL到LOTOS映射方法研究[D].北方工业大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[12]王明,张盼盼,白晓玉.聚氯乙烯/氧化石墨烯薄膜的力学性能和热稳定性能[J].材料研究学报,2012,04:390-395.
[13]邵帅.基于CUDA的符号回归算法并行设计与实现[D].西安电子科技大学,计算机软件与理论,2012,硕士.
[14]肖平森.集成愈伤片治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折(肝肾不足兼瘀血阻络)PKP术后的临床研究[D].湖南中医药大学,中医骨伤科学,2014,硕士.
[15]侯怡帆.RAFT活性聚合方法在埃洛石表面接枝两亲嵌段共聚物的研究[D].郑州大学,工业催化,2013,硕士.
[16]孙晓南.准南前陆型盆地流体动力特征及其在成藏中的作用[D].西北大学,能源地质学,2013,硕士.
[17]尚永辉.基于演化博弈的IT外包知识转移问题研究[D].西安电子科技大学,管理科学与工程,2012,硕士.
[18]胡丽芳,初军田,李强.一种基于投影多属性决策的证据推理方法[J].控制与决策,2015,02:261-265.
[19]孙晓青.《进一步,退两步》中党的组织建设思想研究[D].内蒙古师范大学,马克思主义发展史,2012,硕士.
[20]王春辉.还原铁粉磁流变抛光液的合成及性能研究[D].东北大学,材料物理与化学,2011,硕士.
[21]马伶伶.城市轨道交通运营风险耦合研究[D].北京交通大学,2014.
[22]刘叶.城市景观光环境艺术表现形式的研究[D].沈阳建筑大学,设计学,2012,硕士.
[23]郭亮.基于偏微分方程的图像滤波方法研究[D].大连海事大学,运筹学与控制论,2013,硕士.
[24]都晓磊.论中国当代艺术语境下的水彩创作[D].沈阳师范大学,美术学,2013,硕士.
[25]舒风笛,毋国庆,王敏.图象数据关联规则挖掘[J].小型微型计算机系统,2001,11:1353-1356.
[26]朱秀慧.燃煤电厂清洁生产审核的应用研究[D].天津大学,项目管理,2013,硕士.
[27]刘洋.重庆大学校园空间环境研究[D].重庆大学,建筑设计及其理论,2003,硕士.
[28]王彦堃.《特殊儿童学校适应评估量表》的编制[D].华东师范大学,特殊教育学(专业学位),2013,硕士.
[29]何凤芹.高中物理教学中进行可持续发展观教育的研究[D].山东师范大学,学科教学(专业学位),2013,硕士.
[30]夏少萍.大学生技术创造力初探[D].广西师范大学,教育经济与管理,2003,硕士.
[31]徐振新1,杨晓苹1,刘伟2,杨勇3,马忠洪3,孙旭娜1,翟宏琛3.自相关法测量飞秒激光双脉冲若干参数的研究[J].光子学报.
[32]杨梦秋.油茶林光合特性及其养分动态的研究[D].安徽农业大学,园林植物与观赏园艺,2011,硕士.
[33]邱杰.西南民族地区大学生政治认同教育研究[D].中国地质大学,思想政治教育,2014,博士.
[34]王威.连续相位调制信号的参数盲估计[D].西安电子科技大学,电路与系统,2012,硕士.
[35]邢文婷.香蕉MaMYB基因克隆及抗旱功能研究[D].海南大学,作物遗传育种,2014,硕士.
[36]桂卫华,刘建华,谢永芳.铜闪速熔炼过程操作模式快速匹配策略[J].控制与决策,2013,01:120-124+130.
[37]郭晓慧.生物质热裂解装置中流态化规律与进料技术的研究[D].北京林业大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[38]廖建雄,史红文,鲍大川,段庆明.武汉市51种园林植物的气体交换特性[J].植物生态学报,2010,09:1058-1065.
[39]刘红艳.肌电反馈治疗失眠症的临床实验与驻石家庄部队干休所老年人失眠状况调查[D].河北师范大学,基础心理学,2004,硕士.
[40]凡千.城际公交财政补贴问题研究[D].长安大学,行政管理,2013,硕士.
[41]李欣莲.西师版小学数学教材“课堂活动”编写研究[D].西南大学,基础数学,2014,硕士.
[42]燕飞.龙山文化墓葬与二里头文化墓葬的比较研究[D].郑州大学,考古学及博物馆学,2013,硕士.
[43]胡卫静.大豆杂交后代耐盐性及9002稳定系组织培养研究[D].内蒙古农业大学,作物遗传育种,2013,硕士.
[44]林凤姣.二次锂硫电池用阻燃型功能电解液的研究[D].上海交通大学,2013.
[45]李奕潼.我国胎儿民事权利的法律保护[D].吉林财经大学,民商法学,2013,硕士.
[46]胡蕾.四川中小纺织服装企业发展战略和组织模式探讨[D].西南财经大学,工商管理,2003,硕士.
[47]池商城,卜伟,段建宇.利率市场化背景下个人客户银行选择的影响因素研究——基于长春市的问卷调查[J].北京交通大学学报(社会科学版),2015,02:53-61.
[48]辛正伟.航路网络规划技术研究[D].南京航空航天大学,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[49]黄玉飞.基于支持向量机的图像去噪和图像质量评价的研究[D].中北大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[50]白树林,赵云红.石墨烯热学性能及表征技术[J].力学进展,2014,00:236-259.

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