1.MK801、头孢曲松和RU38486对吗啡成瘾记忆各阶段影响的研究 2.咖啡因对体外培养U251胶质瘤细胞影响的研究

【摘要】目的：药物成瘾与环境线索的建立和保持就是学习记忆的过程,而谷氨酸系统和糖皮质激素受体参与了这个记忆的获得、提取、再巩固、消退等过程。为了研究MK801(非竞争性NMDA受体拮抗剂)、头孢曲松(可增强谷氨酸转运体-1活性)和RU38486(糖皮质激素受体拮抗剂)对吗啡成瘾记忆各阶段的影响以及能否作为药物成瘾的治疗手段,我们进行了以下实验。方法：条件性位置偏爱(conditionedplacepreference,CPP)模型是研究成瘾记忆比较成熟的模型之一,我们采用了CPP模型,通过给予MK-801、头孢曲松和RU38486不同方式的干预,检测吗啡诱导的动物CPP评分,通过重复性方差分析统计,研究上述药物是否能改变吗啡成瘾记忆的获得、提取、再巩固。另外,通过上述方法还研究了它们能否诱导动物的条件性位置偏爱(CPP)/条件性位置厌恶(conditionedplaceaversion,CPA)、活动量变化和敏化行为。结果：1)吗啡组动物在药物匹配侧停留时间明显多于在生理盐水匹配侧停留的时间(适应期vs条件化后期,p<0.05)。2)与对照组比较,单药给予的低剂量MK-801组或头孢曲松组对吗啡诱导大鼠的CPP获得、消退、再建立均无统计学显著差异(p>0.05)。3)与对照组比较,该剂量联合用药组对CPP的获得、消退、再建立均有显著性统计差异(P<0.05)。4)与对照组比较,RU38486组(10,20和30mg/kg)对吗啡诱导小鼠CPP行为获得、提取、再巩固均有显著性统计差异(P<0.05)。5)与对照组比较,各剂量RU38486(10,20和30mg/kg)、低剂量MK801和头孢曲松单药或联合用药对动物CPP/CPA评分均无统计学显著差异(p>0.05)。6)与对照组比较,单独给药MK-801组对大鼠活动量评分显著增高(P<0.05)；联合用药组相较MK-801组评分显著降低(P<0.05)。7)与对照组比较,各剂量RU38486组对CPP的行为敏化评分均显著降低(P<0.05)。结论：1)吗啡可以诱导动物建立CPP模型。2)单独应用小剂量MK-801(0.05mg/kg,i.p.)或头孢曲松(25mg/kg,i.p.)任何一种药物对吗啡诱导大鼠CPP行为的获得、消退和再建立都没有影响。3)将该剂量药物联合应用则能够抑制吗啡诱导大鼠CPP行为的获得和再建立,延迟CPP的消退。4)RU38486可以抑制吗啡诱导小鼠奖赏记忆的获得、提取和再巩固。5)各剂量RU38486(10,20和30mg/kg).小剂量MK801和头孢曲松单药或联合用药均不能诱导建立CPP/CPA行为。6)小剂量MK-801对大鼠的活动量有刺激增加作用,而上述联合药物的应用可以抑制由MK-801引起的活动量增加。7)各剂量RU38486均能抑制吗啡诱导小鼠CPP的行为敏化。总之,上述结果提示NMDA受体,GLT-1和糖皮质激素受体在药物成瘾记忆中均有重要治疗作用,这为治疗药物成瘾的新药开发提供了一些实验依据。2.咖啡因对体外培养U251胶质瘤细胞影响的研究目的：近来,有研究表明咖啡因对多种癌细胞有一定程度的抗癌效应(包括胶质瘤),但国外一些前瞻性大样本的流行病学调查结果却不能完全统一,有的显示有抗胶质瘤效应,有的显示没有。为研究咖啡因对体外培养U251神经胶质瘤细胞活性及凋亡的影响,我们进行了此实验。方法：采用MTT法和AnnexinV/PI流式细胞法研究不同浓度和作用时间的咖啡因对U251人胶质瘤细胞的影响。结果：1)不同浓度咖啡因(1,2,4,6,10mM)处理的U251细胞在不同时段(24、48、72h)均表现出浓度依赖性细胞活性下降趋势,与对照组相比,均有统计学显著性(P<0.001)。2)咖啡因在4-10mM时,24h与48h的OD值趋同,在10mM时三个时段的OD值基本相同。3)24h、48h组随咖啡因浓度增加凋亡不显著,72h组从2mM始凋亡增加,l0mM时达峰值(21.55%)。不同时间组在咖啡因>10mM时均出现细胞死亡增加,且有浓度依赖趋势。结论：1)咖啡因在体外可以抑制U251人胶质瘤细胞的细胞活性。2)随着咖啡因作用时间的延长,细胞活性抑制加强。3)咖啡因在体外使U251细胞早期凋亡发生时间较晚,且有一定浓度范围(2-10mM),在此范围内,出现浓度依赖性瘤细胞早期凋亡增加,大于l0mM时,则瘤细胞很快大量坏死。本实验初步证明了咖啡因在体外有一定的抗U251瘤细胞活性和促进凋亡的作用,为进一步的动物实验及新药开发提供实验依据。
【作者】范耀东；
【导师】余化霖；
【作者基本信息】昆明医科大学，外科学，2013，博士
【关键词】CPP；NMDA；GLT-1；RU38486；MK-801；成瘾记忆；咖啡因；神经胶质瘤细胞；凋亡；细胞活性U251；

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