FLEP新辅助化疗对胃癌患者免疫功能影响

【摘要】第一部分FLEP新辅助化疗对胃癌治疗效果的影响目的：给予胃癌患者FLEP新辅助化疗,通过比较化疗前后肿瘤组织病理学及影像学改变,研究该方案在胃癌治疗中的作用。方法：自2012年7月至2013年6月广东医学院附属医院胃肠外科收治的晚期胃癌36例,男29例,女7例,男女之比4.1：1,平均年龄51.6±14.8岁,病程1周～3年不等。将其随机分为两组(每组18例)：实验组(FLEPNACT+手术+术后辅助化疗组,即CSC组)及对照组(手术+术后辅助化疗组,即S组)。FLEP方案进行2-4周期NACT,2和4周期化疗结束后分别重新进行临床分期的评估,继而进行手术。术后行常规方案辅助化疗。结果：CSC组18例中,4例完全缓解(胃镜未见明显病灶,活检未发现癌细胞)；10例部分缓解(病灶明显缩小、浸润深度变浅)；其余4例病变无进展。有效率为77.8%(14/18)。CSC组18名患者大部分得到不同程度的临床降期,Ⅲ期以上患者所占比重由化疗前的66.7%降至11.1%。与S组相比,CSC组RO切除率显著增加,淋巴结转移数量显著下降,肿瘤的浸润范围明显缩小。CSC组所有患者均完成了NACT,2个周期的4例,8个周期的3例,4个周期的6例。按照新的药物毒副反应判定标准有2例后白细胞偏低,但计数都≥3×109/L；有1例粒细胞<1.5×109/L,所有患者未有Ⅲ级以上毒副反应发生。结论：FLEP方案NACT能显著降低胃癌的临床分期,减少淋巴结转移数量,提高胃癌根治性切除机会；同时不增加手术并发症的发生几率,NACT对胃癌手术操作和术后恢复无明显不良影响。第二部分FlEP新辅助化疗对胃癌肿瘤细胞生物学行为的影响目的：给予胃癌患者FLEP新辅助化疗,通过检测细胞凋亡指数(AI)、MVD及PCNA表达水平,探讨FLEP新辅助化疗对诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖和肿瘤血管新生的作用,以助于评估治疗效果及判断其预后。方法：自2012年7月至2013年6月广东医学院附属医院胃肠外科收治的晚期胃癌36例,男29例,女7例,男女之比4.1：1,平均年龄51.6±14.8岁,病程1周～3年不等。将其随机分为两组(每组18例)：实验组(FLEPNACT+手术+术后辅助化疗组,即CSC组)及对照组(手术+术后辅助化疗组,即S组)。FLEP方案进行2-4周期NACT,2和4周期化疗结束后分别重新进行临床分期的评估,继而进行手术。术后行常规方案辅助化疗。结果：CSC组标本胃癌细胞AI最高为13.06%,最低为3.82%,平均为6.15士2.03%；S组标本胃癌细胞AI最高为8.64%,最低为2.37%,平均为4.44士1.68%,p值小于0.05,提示NACT后胃癌细胞凋亡指数比化疗前增高。CSC组胃癌细胞PCNA表达阳性率最高为85.94%,最低为41.18%,平均56.97士14.39%,S组胃癌细胞PCNA表达阳性率最高为59.07%,最低为19.23%,平均40.86士7.92%,差异有统计学意义,说明新辅助化疗后胃癌细胞PCNA表达较未化疗者明显降低。检测CSC组和S组MVD,结果显示两组MVD具有统计学差异,说明CSC组行新辅助化疗后MVD明显低于S组。结论：FLEP方案新辅助化疗可通过诱导进展期胃癌细胞的凋亡、抑制胃癌细胞增殖和肿瘤血管生成,以到达治疗效果。肿瘤微血管形成及细胞增殖可成为判断FLEP方案新辅助化疗用于恶性肿瘤转移治疗效果的重要指标之一。第三部分FLEP新辅助化疗对CD4+CD25+调节性T细胞的影响目的：给予胃癌患者FLEP新辅助化疗,通过分析外周血中CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞比例,及其抑制T细胞增殖能力和免疫抑制细胞因子分泌,明确CD4+CD25+Treg细胞与胃癌临床分期关系,及其在胃癌FLEP新辅助化疗中的作用。方法：收集CSC组、S组患者及正常健康周外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),流式细胞术检测外周血中CD4+CD25+Treg细胞比例,免疫磁珠分选法分离外周血中CD4+CD25+Treg细胞。流式细胞术检测分选所得CD4+CD25+Treg细胞纯度,台盼蓝染色检测其细胞活力,3H掺入法检测体外增殖能力。混合淋巴细胞反应分析CD4+CD25+Treg细胞抑制T细胞体外增殖能力。流式细胞术和ELISA检测CD4+CD25+Treg细胞的免疫抑制细胞因子的分泌。结果：与Ⅰ、Ⅱ期胃癌相比,Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的比例显著增加。胃癌患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞比例显著高于正常人；CSC组新辅助化疗后CD4+CD25+Treg细胞比例显著下降,而术后CD4+CD25+Treg细胞比例无显著变化；S组术后CD4+CD25+Treg细胞比例虽有所下降,却不具有统计学差异；CSC组与S组术后相比,CD4+CD25+Treg细胞比例明显下降,具有统计学差异。这说明手术对患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞比例无影响,新辅助化疗可显著降低胃癌患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞的比例。CD4+CD25+Treg细胞可显著抑制CD4+CD25-T细胞增殖,随着CD4+CD25+Treg细胞数的增加,这种抑制增殖的能力也相应增加；新辅助化疗后,CD4+CD25+Treg细胞对CD4+CD25-T细胞的抑制率显著下降；而手术并不明显改变CD4+CD25+Treg细胞对CD4+CD25-T细胞的抑制作用。胃癌患者CD4+CD25+Treg细胞分泌TGF-β、IL-4、IL-10水平要明显高于与健康人群；新辅助化疗后,CD4+CD25+Treg细胞分泌TGF-β、IL-4、IL-10水平显著降低；手术对上述细胞因子无影响。结论：胃癌分期越高,外周血中CD4+CD25+T细胞比例越高。新辅助化疗可显著降低胃癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞的比例,抑制CD4+CD25+T细胞抑制CD4+CD25-T细胞的作用,影响免疫抑制因子工L-10和TGF-β等的分泌,是新辅助化疗通过调控机体免疫反应达到治疗作用的重要机制。
【作者】陈金元；
【导师】黄宗海；
【作者基本信息】南方医科大学，外科学，2014，博士
【关键词】胃癌；新辅助化疗；FLEP；胃癌肿瘤细胞生物学行为；CD4~+CD25~+调节性T细胞；

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