小反刍兽疫病毒血凝素蛋白与宿主受体相互作用的研究

【摘要】小反刍兽疫（Pestedespetitusruminants，PPR）的流行加剧了欠发达国家的贫困，严重影响了动物健康与食品安全，联合国粮农组织（FoodandAgricultureOrganizationoftheUnitedNations,FAO）于2012年提出开启全球范围的多国家多地区全方位合作，从而控制和消灭PPR。然而，小反刍兽疫病毒（Pestedespetitusruminantsvirus，PPRV）的基础研究还很薄弱，近年来PPRV跨地区跨国界传播以及感染野生动物，给全球消灭计划提出了严峻挑战。基于对同属麻疹病毒（Measlesvirus,MV）的研究证实，与受体的相互作用，不仅是病毒入侵宿主的第一步，也是导致宿主机体组织病理变化分布、宿主呈现临床症状表现的重要原因。下面几个问题值得关注：PPRV除了同MV一样利用SLAM作为受体开启病毒的入侵，是否也同样利用宿主呼吸道等上皮细胞基底层的Nectin4分子作为受体从而介导子代病毒的排出？PPRV疫苗株不具备向外“排毒”的特点，是否因为其不能与Nectin4结合？PPRV利用病毒囊膜上的血凝素蛋白（Hemaggluntinin,H）特异性识别宿主受体，H能否单独决定PPRV的宿主嗜性？运用计算机模拟对PPRV野毒株H蛋白（Hw）、疫苗株H蛋白（Hv）分别与羊源SLAM/Nectin4的相互作用模式、关键区域、关键氨基酸等做了预测，并设计试验进行了验证，结果如下：1.Hw和Hv的重组真核表达质粒均能与绵羊Nectin4的重组真核表达质粒共定位于CHO、293T细胞的细胞质中；Co-Ip确认Hw和Hv蛋白均能与绵羊Nectin4蛋白相互作用；荧光定量PCR显示Nectin4主要在绵羊的呼吸道、消化道等上皮组织中表达，结合本课题组以往人工感染PPRV的病毒载量、组织嗜性，以及绵羊SLAM在各组织中的分布表达来看，PPRV在唇、口腔黏膜、会厌、扁桃体等呼吸道组织和网胃、瓣胃、瘤胃等消化道组织中的分布与Nectin4的表达量成正相关，而PPRV在各种淋巴结、脾脏等免疫相关组织中的分布与SLAM的表达量成正相关；病毒感染实验表明羊源Nectin4可以提高PPRVNeriga75/1株在Vero细胞中的繁殖效率。综上所述，可以得出结论Nectin4是PPRV野毒株和疫苗株利用的受体。2.羊源Nectin4分子胞外区IgV结构域参与了同PPRVHw、Hv蛋白的相互作用；3.计算机模拟计算得出PPRVHw和Hv具备与人源SLAM相互作用的分子基础，无论是Hw还是Hv，发生Ser550Trp、Arg191Tyr、Arg191Phe、Thr545Trp、Ser548Trp、Ser534Trp这六种突变后，与人源SLAM相互作用的能力会加强，存在跨种间传播的风险。本研究成功鉴定了PPRV的受体Nectin4，并通过对PPRV野毒株和疫苗株分别与受体SLAM、Nectin4相互作用的模式、机理进行探究，为PPRV疫苗生产和诊断监测均提出了有益的思路和理论参考。
【作者】陈蕾；
【导师】才学鹏；
【作者基本信息】中国农业科学院，预防兽医学，2014，博士
【关键词】PPRV；PPRVH；Nectin4；SLAM；相互作用；

【参考文献】
[1]陈洁夫.基于敏捷性的BPMS在电子元器件分销企业的应用[D].北京交通大学,2014.
[2]白延国.成人依恋的GNAT内隐测量研究[D].内蒙古师范大学,应用心理学,2012,硕士.
[3]孙振东,夏小华,高为炳.多重（A，B）－不变子空间及多频采样控制[J].自动化学报,1995,03:326-332.
[4]郏方贵,泮海敏.一个高效剪枝的新关联规则挖掘算法[J].计算机应用研究,2004,11:168-169+172.
[5]张鹏娟.A/O生物脱氮工艺影响因素及强化运行效果的试验研究[D].郑州大学,环境工程,2013,硕士.
[6]程龙.孤岛电站多机组并联运行风险分析[D].大连海事大学,电气工程,2013,硕士.
[7]马兆良.WTO协议中的保障措施研究[D].安徽大学,国际贸易学,2004,硕士.
[8]银超.我国商业企业实施知识管理研究[D].河北农业大学,2004.
[9]樊甫.生产运行方案的优选及软件设计[J].自动化学报,1985,01:87-93.
[10]白哈斯.论内蒙古版画的民族性、地域性[D].内蒙古大学,美术学,2013,硕士.
[11]覃永国.非树枝晶合金坯料感应二次加热研究[D].东北大学,工程热物理,2010,硕士.
[12]孔凤英.产业集聚与中小企业发展问题研究[D].华中农业大学,农业经济管理,2001,硕士.
[13]田丛.光—热混杂固化环氧树脂/聚氨酯丙烯酸酯纳米复合涂料的制备与性能[D].河北大学,高分子化学与物理,2014,硕士.
[14]梁晨.精神文化视角下的日本老龄化研究[D].南京大学,日语语言文学,2013,硕士.
[15]张亮亮.被控对象和控制器的模糊基函数不一致的T-S模糊系统的控制设计[D].杭州电子科技大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[16]陈尔健.两型社会背景下湘江航运发展探析[D].湖南大学,公共管理,2013,硕士.
[17]袁国富,张娜,孙晓敏,温学发,张世春.利用原位连续测定水汽δ~(18)O值和KeelingPlot方法区分麦田蒸散组分[J].植物生态学报,2010,02:170-178.
[18]张楠.论我国政府信用体系的建设[D].吉林大学,行政管理,2004,硕士.
[19]林斐斐.不同修复方法对根管治疗伴邻（牙合）缺损的下颌前磨牙抗折性能影响的研究[D].山东大学,口腔临床医学（专业学位）,2013,硕士.
[20]范雄飞.基于ZigBee技术的单相智能电表的设计与实现[D].内蒙古大学,信号与信息处理,2014,硕士.
[21]魏彦平.分子束外延Fe/Si异质结构的热稳定性[D].兰州大学,材料物理与化学,2014,硕士.
[22]李晓龙,李秋芬,姜娓娓,刘淮德,王晓红,宋娴丽,安鑫龙.刺参养殖池环境细菌群落对底质改良剂的响应[J].渔业科学进展,2015,01:111-118.
[23]吕涛,唐巍,丛鹏伟,薄博.分布式电源与配电网架多目标协调规划[J].电力系统自动化,2013,21:139-145.
[24]罗晓春.语类相关性的跨学科比较研究—语言学与教育学学术论文的摘要与引言[D].浙江工商大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[25]刘小宪.面向X10的数据流程序编译优化方法研究[D].华中科技大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[26]张静.基于JPEG的图像编辑与增强方法的研究与设计[D].北方工业大学,计算机技术,2014,硕士.
[27]谢洪明,陈盈,程聪.网络密度、知识流入对企业管理创新的影响[J].科学学研究,2011,10:1542-1548+1567.
[28]张喆.葡聚糖基纳米抗癌药物载体的设计与应用[D].东北师范大学,高分子化学与物理,2014,博士.
[29]秦文.女硕士生成就动机研究[D].南京师范大学,女性教育学,2012,硕士.
[30]李森.新时期导游人员的离职倾向调查[D].鲁东大学,应用心理（专业学位）,2013,硕士.
[31]刘贺平,孙一康.抑制未知确定性扰动的极点配置自适应控制[J].自动化学报,1996,04:401-409.
[32]蒋英刚.中铝青海分公司大型铝电解槽效应情况分析与决策系统研究[D].中南大学,2004.
[33]李大由.窖泥微生物和产酯微生物的分离培养(提高泸州曲酒厂名优酒比率的研究鉴定材料之二)[J].酿酒.1989(02)
[34]王世龄.基于截面尺寸优化的前纵梁耐撞性研究[D].湖南大学,机械工程,2011,硕士.
[35]曹爽.初级中学乒乓球教学中实施分层次教学的研究[D].河北师范大学,体育教学,2012,硕士.
[36]陈杰.鸭部分繁殖性状杂种优势及其与相关基因表达关系的研究[D].扬州大学,动物营养与饲料科学,2011,硕士.
[37]李桂菊.三系杂交稻对白叶枯病和稻瘟病抗性研究及利用评价[D].华中农业大学,作物遗传育种,2000,硕士.
[38]李宏毅,施正荣.太阳能光伏发电技术(10)[J].建筑创作.2004(12)
[39]李瑾杨.基于点云数据的冲沟溯源侵蚀过程动态可视化研究与实现[D].西南交通大学,测绘工程,2013,硕士.
[40]任辉辉.冶炼烟气制酸中稀硫酸浓缩技术的研究及工业装置的设计与应用[D].湖北师范学院,分析化学,2013,硕士.
[41]胡克用,胥芳,艾青林,欧阳静,徐红伟.适用于光伏多峰功率跟踪的改进型粒子群优化算法[J].西安交通大学学报,2015,04:140-148.
[42]汪新民.5S管理在NX石化公司应用的案例分析[D].兰州理工大学,工商管理,2013,硕士.
[43]黄浩.中式香烟包装设计研究[D].中南林业科技大学,设计艺术学,2013,硕士.
[44]申思.血塞泰治疗脑梗死风痰瘀阻证患者的临床观察及对血浆t-PA、PAI-1的影响[D].湖南中医药大学,中医内科学,2013,硕士.
[45]杨春成.硅油基Fe_3O_4磁性液体的制备表征及其粘度性质的研究[D].河北工程大学,机械设计及理论,2012,硕士.
[46]王训.基于单分散纳米晶的纳米复合材料[A].中国化学会.中国化学会第27届学术年会第08分会场摘要集[C].中国化学会:,2010:1.
[47]孔嵩.基于动物纤维（蚕丝）模板的隔热陶瓷纤维的研究[D].南京理工大学,材料工程,2013,硕士.
[48]黄新星.基于结构方程模型的建设工程项目执行力研究[D].西安建筑科技大学,工程经济与管理,2013,硕士.
[49]陈江宁,张忠慧,华初航,赵非.大连钢厂棒线材RDMS激光测径系统的应用[J].冶金自动化,2003,06:59-61.
[50]吴雪娇.B2B电子商务中数据管理技术研究[D].北方工业大学,计算机应用技术,2013,硕士.